螺旋藻多糖对小鼠移植性肿瘤化疗后造血恢复及相关细胞因子的影响

目的: 研究螺旋藻多糖(polysaccharide fromspirulina platensis, PSP) 对小鼠移植性肿瘤化疗后造血恢复及相关细胞因子的影响。方法: 通过右前肢皮下接种肿瘤细胞形成小鼠移植性实体瘤, 给予PSP 连续灌胃 10 d, d 4 给予环磷酰胺(CTX) 腹腔注射连续 3 d。于 d 11, 分别观察了外周血细胞、骨髓有核细胞及 CFU-S 计数, 用紫外分光光度计检测骨髓DNA 含量, 用双抗体夹心 ELISA 法检测血清中IL-1、IL-3、GM-CSF、TNF 含量。 结果: CTX 可造成明显骨髓抑制, 而 PSP 则提升了外周血细胞、增加了骨髓中有核细胞计数和 DNA 含量以及促进了 CFU-S形成。 此外, PSP 还增加了血清中 IL-1、IL-3、GM-CSF、TNFα含量。结论: PSP 可能通过促进内源性细胞因子的分泌来实现其促进小鼠移植性肿瘤化疗损伤后的造血恢复。     

唐古特大黄多糖组分1对电离辐射损伤小鼠造血系统的影响

目的: 探讨唐古特大黄多糖组分1(RTP1)对电离辐射损伤小鼠造血功能的影响。方法: 采用雄性6周龄昆明种小鼠,随机分为5组:正常对照组(Normal Control,NC)、辐射对照组(Irradiation Control,IC)以及RTP1低剂量组(200 mg/kg)、中剂量组(400 mg/kg)和高剂量组(800 mg/kg),采用灌胃给药方式,连续 14 d,NC组和IC组则给予等量的生理盐水,第 14 d 除NC组外,各组小鼠均接受 6.5 Gy/只⁶⁰Coγ射线照射1次,照射后继续灌胃给药,观察照射后 30 d 小鼠生存情况,并对小鼠骨髓有核细胞数(bone marrow cell, BMC)、骨髓DNA含量、内源性脾集落形成单位(spleen colony forming unit, CFU-S)及外周血中白细胞(white blood cell, WBC)计数进行检测。结果: 与IC组比较,RTP1可提高小鼠 30 d 存活率,并剂量依赖性地升高外周血中WBC计数、骨髓有核细胞数、DNA含量以及脾结节数。结论: RTP1对辐射小鼠的造血系统起到一定保护作用。     

双氢青蒿素对小鼠Lewis肺癌移植瘤生长的影响

目的:探讨双氢青蒿素对小鼠Lewis 肺癌移植瘤的抑瘤效应及其作用机制。方法:50只C57BL/6J 小鼠皮下接种3LL 细胞(2×10⁶), 随机分为5组, 分别为生理盐水组, 阳性对照顺铂组,双氢青蒿素高、中、低剂量组(150、100、50 mg/kg),检测各组小鼠的体重变化和抑瘤率, 应用流式细胞术进行瘤细胞的DNA 倍体分析。结果:双氢青蒿素中、高剂量组体重无生理盐水组增加明显, 其抑瘤率分别为53.50%及59.24%;流式细胞术检测双氢青蒿素能诱导肿瘤细胞凋亡, 并能影响肿瘤的细胞周期, G0G 期及G₂/M 期细胞数大量减少, 细胞被阻滞在S1期。结论:口服双氢青蒿素对Lewis 小鼠肺癌有明显的抑制作用, 可促进肿瘤细胞凋亡。     

青蒿琥酯诱导人早幼粒白血病细胞HL60 凋亡的线粒体机制

目的:探讨青蒿琥酯(artesunate, Art) 诱导人急性早幼粒白血病细胞HL60 凋亡的线粒体机制。方法:用Art 处理HL60 细胞, 通过MTT 比色法检测细胞增殖抑制的效果;透射电镜、DNA 凝胶电泳技术观察细胞的凋亡;流式细胞术(flow cytometry,FCM) 进行细胞周期分析和线粒体膜电位(mitochondrialmembrane potential, MMP) 水平的检测;比色法检测半胱-天冬氨酸蛋白酶3(cysteine containing aspartate,Caspase 3) 活性。结果:Art 呈浓度和时间依赖性的抑制HL60 细胞的增殖(P<0.05) 。Art 诱导后HL60 细胞出现典型的凋亡形态学变化和生化改变, G²⁺M 期细胞比例增高, S 期减少, 凋亡率上升(P<0.05), 线粒体膜电位降低(P<0.05),Caspase 3 活性增强(P<0.05) 。结论:Art 可能通过线粒体/半胱-天冬氨酸蛋白酶3 特定途径诱导HL60细胞凋亡。     

螺旋藻多糖对环磷酰胺所致小鼠骨髓抑制的实验研究

目的 研究螺旋藻多糖对小鼠骨髓造血功能的增强作用。方法 将小鼠分成4 组:对照组、环磷酰胺模型组、螺旋藻多糖30 mg·kg^-1、螺旋藻多糖60mg·kg^-1。模型组、螺旋藻多糖组腹腔注射环磷酰胺造模。同时螺旋藻多糖组灌胃螺旋藻多糖, 对照组、模型组灌胃生理盐水。结果 螺旋藻多糖在30、60mg·kg^-1剂量下, 对环磷酰胺所致小鼠外周血象、骨髓有核细胞均有改善(P <0.01) 。对骨髓细胞微核增加有明显的拮抗作用(P <0.05) 。螺旋藻多糖组小鼠骨髓细胞染色体畸变率较模型组显著降低,其抑制率分别为51.2%、61.5 %。结论 螺旋藻多糖可抑制环磷酰胺诱发的小鼠造血功能损伤。     

全反式维甲酸和阿糖胞苷对HL-60细胞端粒酶活性的影响

目的 探讨全反式维甲酸(all trans-retinoic acid,ATRA) 和阿糖胞苷(Ara-c) 诱导人早幼粒细胞白血病细胞凋亡和分化的机制。方法 采用PCR-ELISA 方法观察A TRA 和Ara-c 对HL-60细胞端粒酶活性的影响。结果 ATRA 和Ara-c 在诱导HL-60 细胞凋亡和分化过程中均可使端粒酶活性减低。结论 ATRA 和Ara-c抑制HK-60 细胞端粒酶的活性,可能是其诱导白血病细胞凋亡和分化的重要机制之一。     

静脉注射和肌肉注射不同剂量rhIFNα2a 对小鼠体温的影响

目的: 研究静脉注射和肌肉注射不同剂量rhIFNα2a 对小鼠体温的影响。方法: 测量给药前后不同时间点的小鼠体温和血清rhIFNα2a 的浓度。结果: 相同剂量的rhIFNα2a 静脉注射与肌肉注射比较,引起小鼠体温升高的作用更强, 而且rhIFNα2a 引起的发热可被吲哚美辛阻断。结论: rhIFNα2a 肌肉注射较静脉注射引起不良反应轻, 对于rhIFNα2a 引起发热敏感的机体可联合用非甾体类抗炎药。     

蛋白酶体抑制剂MG-132对柯萨奇B3病毒性心肌炎小鼠的作用研究

目的: 研究泛素蛋白酶体抑制剂MG-132对柯萨奇B3(CVB3)病毒性心肌炎小鼠的作用,探讨泛素蛋白酶体系统在病毒性心肌炎发病学中的作用机制。方法: 随机将80只雄性BALB/C小鼠分为4 组(n=20):正常对照组、心肌炎组、心肌炎+处理组、正常+处理组。腹腔接种CVB3诱发急性心肌炎,次日腹腔注射MG-132,0.75 mg/kg;连续给药 7 d,对照组腹腔注射PBS。第8天小鼠取材,观察心脏病理变化,测定心肌CVB3病毒复制及血清肌钙蛋白、脑钠肽水平。结果: MG-132显著减轻心肌炎小鼠心脏病理损伤,显著降低心脏重量/身体重量比值,MG-132干预后第8天小鼠血清肌钙蛋白、脑钠肽水平显著降低,同时荧光定量PCR显示CVB3 mRNA复制水平显著降低。结论: MG-132通过抑制CVB3病毒复制,显著减轻心肌炎小鼠心脏病理损伤,起到保护心肌作用。     

不同靶点的反义bcl-2 寡核苷酸对白血病细胞足叶乙甙敏感性影响的研究1

目的 探讨针对bcl-2 mRNA 蛋白编码区的反义寡核苷酸对足叶乙甙诱导HL-60 和K562 细胞凋亡的影响。方法 应用MTT 法和流式细胞仪检测反义寡核苷酸与足叶乙甙联合作用的HL60 和K 562 细胞中bcl-2 蛋白表达和细胞凋亡及足叶乙甙IC₅₀值。结果 10 μmol·L^-1 反义寡核苷酸与足叶乙甙联用能明显抑制HL60 和K562 细胞中bcl-2 蛋白表达和增强细胞对足叶乙甙诱导凋亡的敏感性, 提高细胞的凋亡率;并且针对bcl-2 mRNA 蛋白编码区的反义寡核苷酸比针对bcl-2 mRNA 翻译起始区的反义寡核苷酸作用更强。结论 针对bcl-2 mRNA蛋白编码区的反义寡核苷酸能促进HL60 和K 562 细胞足叶乙甙敏感性。     

纳米雄黄的抗小鼠原位乳腺癌作用及其机制

目的: 研究纳米雄黄体内体外对小鼠乳腺癌细胞(4T1)的增殖抑制作用及其机制。方法: 以萤火虫荧光素酶(Luciferase, Luc)基因标记小鼠4T1乳腺癌(4T1-Luc)细胞,应用噻唑蓝(MTT)比色法和生物发光法(Bioluminescent method, BLM)检测细胞增殖活性;细胞形态学及Annexin V/PI 双标记法观察细胞凋亡。4T1-Luc细胞接种雌性BALB/c小鼠乳腺脂肪垫制作原位乳腺癌模型,纳米雄黄(4和 8 mg·kg^-1·d^-1)灌胃治疗 20 d,小动物活体成像系统连续动态观察小鼠乳腺肿瘤生长变化,治疗末期处死动物、剥离肿瘤块称重,并制片HE染色和CD₃₄标记观测肿瘤组织内细胞核分裂像、新生血管形成及坏死改变。结果: MTT法和BLM法检测显示 1.56~50 μg/mL 纳米雄黄体外显著抑制 4T1-Luc 细胞的增殖(P<0.05);形态学观察和Annexin V/PI染色显示细胞呈现典型的凋亡改变。体内纳米雄黄呈时间和剂量依赖性地抑制小鼠4T1-Luc原位乳腺癌的生长(P<0.05);肿瘤组织制片观察,经纳米雄黄治疗后肿瘤组织内细胞核分裂像和微小血管显著减少(P<0.01),肿瘤组织内部呈显著的坏死改变。结论: 纳米雄黄体外抑制小鼠乳腺癌4T1细胞增殖和诱导细胞凋亡,并主要通过减低原位肿瘤组织内新生血管的形成而导致肿瘤组织坏死而发挥抗乳腺癌作用。     

内毒素耐受状态小鼠对大肠埃希菌敏感性及促炎细胞因子水平变化的研究

目的: 研究内毒素耐受状态对大肠埃希菌的敏感性及促炎细胞因子水平的变化。方法: 采用小剂量LPS(1 mg/kg)连续腹腔注射 5 d 并在第6天尾静脉注射大剂量LPS(50 mg/kg)建立小鼠内毒素耐受模型。观察小鼠 7 d 存活率或采用ELISA法检测注射大剂量LPS后6、12 h 血清中TNF-α、IL-6水平。然后,采用不同浓度的大肠埃希菌攻击耐受小鼠,观察小鼠 7 d 存活率;或采用血培养方法检测血液中细菌数量,ELISA法检测血清中TNF-α、IL-6水平。结果: 大剂量LPS攻击组(攻击组)小鼠存活率为0 %,LPS耐受组(耐受组)小鼠存活率为100%;耐受组小鼠血清TNF-α、IL-6水平较攻击组显著降低(P＜0.01)。5.0×10⁸ CFU/kg 大肠埃希菌可导致正常小鼠100%死亡,但是仅 1.0×10⁷ CFU/kg大肠埃希菌就可导致耐受组小鼠100%死亡;耐受组给予大肠埃希菌低、高剂量组小鼠血液中细菌数量远远高于相应的正常小鼠大肠埃希菌低或高剂量组(P＜0.01),而血清中TNF-α、IL-6水平则远远低于相应的大肠埃希菌低或高剂量组(P<0.01)。结论: 连续腹腔注射小剂量LPS 5 d 后并在第6天尾静脉注射大剂量LPS可成功建立LPS耐受模型;与正常对照组小鼠比较,较低数量的大肠埃希菌就可导致耐受组小鼠死亡,说明内毒素耐受小鼠对大肠埃希菌的敏感性较正常小鼠明显增高,其机制可能与内毒素耐受后促炎细胞因子水平降低、机体抵抗力降低有关。     

咖啡酸、阿魏酸:新的非肽类内皮素拮抗剂1

目的 评价桂皮酸类化合物咖啡酸和阿魏酸对内皮素(ET-1)生物效应的拮抗作用并初步探讨其拮抗ET-1 的作用机理。方法 用咖啡酸与阿魏酸腹腔注射及静脉注射给药后观察其对ET-1 致小鼠急性死亡以及对大鼠升压效应、对离体主动脉条的收缩效应的拮抗作用;口服给药后考察其对醋酸去氧皮质酮(DOCA)-盐高血压大鼠ET-1 的作用, 并对DOCA-盐高血压动物模型ET-1 血浆浓度、血压和动物体重变化及心血管组织增生的影响;对ET-1、c-fos、热休克蛋白(HSP70)mRNA 基因表达的影响。结果 咖啡酸和阿魏酸腹腔注射给药后能显著延长ET-1 致小鼠急性死亡时间, 与对照组相比该作用具剂量依赖性;静脉注射给药后能拮抗ET-1 引起的正常大鼠升压效应;在离体器官上可观察到咖啡酸与阿魏酸能拮抗ET-1 的缩血管效应;咖啡酸和阿魏酸长期口服给药能降低DOCA-盐高血压模型大鼠的血压、对心脏和血管的组织增生有明显的抑制作用;可降低血浆中ET-1 的浓度并可减少ET-1 引起的c-fos、HSP70 mRNA 基因表达的增加;放射性受体-配体结合实验表明, 咖啡酸和阿魏酸可竞争性地抑制ET-1 与其受体结合。结论 咖啡酸和阿魏酸为新的非肽类ET-1 拮抗剂。     

皖南蝮蛇毒抑瘤组分I对人胃癌细胞SGC-7901荷瘤鼠体内抑制作用的研究

目的:研究皖南蝮蛇毒抑瘤组分I(Agkistrodon halys venom antitumor component I,AHVAC-I)对人胃癌细胞SGC-7901荷瘤鼠的体内抑制作用及瘤细胞增殖活性变化,并初步探讨其作用机制。方法: 取生长状态良好的浓度为1×10⁷个/mL的SGC-7901人胃癌细胞悬液 0.1 mL 接种于裸小鼠右侧腋窝皮下,待其成瘤后随机分为模型组、紫杉醇阳性对照组、AHVAC-I高、中、低剂量组,隔日连续给药5次,定期观察肿瘤生长情况,测量肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线并计算抑瘤率,HE染色观察瘤体形态学变化,免疫组化SP法检测Ki-67增殖指数,原位末端标记技术(TUNEL)法检测细胞凋亡指数。结果: AHVAC-I在 1.0 mg/kg 剂量时对SGC-7901细胞有抑制作用,抑瘤率达 42.2%;在 3.0 mg/kg 剂量时有显著抑制作用,抑瘤率达 78.5%。实验组肿瘤内Ki-67阳性细胞数量下降,凋亡细胞明显增多。结论:AHVAC-I能明显抑制裸鼠体内SGC-7901人胃癌细胞的生长,其作用机制可能与诱导胃癌细胞发生凋亡及抑制肿瘤细胞增殖有关。     

非免疫性过敏反应细胞模型的建立

目的 通过非免疫性刺激物C48/80诱导大鼠嗜碱性粒细胞白血病细胞株RBL-2H3细胞脱颗粒反应正交试验,优化非免疫性过敏反应细胞模型建立条件。方法 在不同的孵育时间下,C48/80与不同浓度的RBL-2H3细胞共孵育,通过测定β-氨基己糖苷酶的释放率确定建立非免疫型过敏反应细胞模型的最优实验条件,并且分析不同检测方法间的差异。结果 不同浓度、不同孵育时间下的RBL-2H3细胞均可受C48/80诱导发生典型的脱颗粒反应,但不同条件下的脱颗粒程度和β-氨基己糖苷酶释放率都有显著差异。结论 当RBL-2H3细胞浓度为2×10⁵ mL、孵育时间 60 min 时,细胞的感受性较好,其脱颗粒程度与药物浓度呈正相关。     

柯萨奇B3 病毒经晚期孕鼠胎盘致母婴感染的小鼠动物模型研究1

目的: 探讨柯萨奇B3 病毒( CVB_3m) 在母婴间经胎盘垂直传播的可能性和条件, 并建立小鼠动物模型。方法: 对不同孕期的母鼠分别接种最佳感染量柯萨奇B3 病毒嗜心肌株( CVB_3m), 剖腹取胎或产仔。对母鼠、胎鼠、仔鼠及胎盘分别进行病毒学、血清学及病理检查。结果: 晚期孕鼠接种适量的CVB_3m后次日形成病毒血症, 此时血中无抗CVB_3m中和抗体。病毒经胎盘传播形成母婴垂直感染。胎盘、胎鼠、母鼠心肌及仔鼠血清和心肌中均查到较高滴度的病毒。电镜下可见受染仔鼠心肌细胞线粒体肿胀、嵴突缺失、肌纤维断裂、明暗带模糊等初期病变。结论: 晚期孕鼠感染CVB_3m后形成病毒血症, 通过胎盘屏障将病毒传至胎儿, 引起胎鼠及仔鼠心肌病变, 可作为防治CVB₃ 围产期感染的动物模型。     

新型重组人肿瘤坏死因子-α对四氯化碳及刀豆蛋白A 诱导小鼠肝损伤的影响

目的:研究不同剂量的新型重组人肿瘤坏死因子(nrhTNFα)对肝功能及肝脏组织形态学的影响。方法:用四氯化碳(CCl4)或刀豆蛋白A(Con A)诱导小鼠肝损伤, nrhTNFα低、中、高剂量(5×10⁴, 5×10⁵, 5×10⁶ IU°kg^-1)im, 测血清中ALT、AST、LDH、IFN-α、IL-2 和NO 浓度变化, 检查肝脏组织形态学变化。结果:3 个剂量的nrhTNFαim 对正常小鼠肝功能及肝脏组织形态学无影响;低、中剂量nrhTNFα对CCl4 诱导肝损伤小鼠的肝功能及肝脏组织形态学无影响, 高剂量nrhTNFα加重肝损伤;3 个剂量的nrhTNFα降低Con A 诱导的肝损伤小鼠血清ALT、AST、LDH 和IFN-γ浓度增加, 且nrhTNFα低剂量作用明显, 能明显减轻肝脏病理学改变。结论:nrhTNFα低、中、高剂量im 对正常小鼠无肝毒性;nrhTNFα低、中剂量im 不影响CCl4 诱导的肝损伤,高剂量则加重之;3 个剂量的nrhTNFαim 抑制Con A诱导的肝损伤, 其作用机理与抑制Con A 诱导的小鼠IFN-γ产生有关。