拟蕈状芽孢杆菌Gxun-30产角蛋白酶液体发酵条件优化

为提高海洋来源拟蕈状芽孢杆菌(Bacillus paramycoides) Gxun-30产角蛋白酶的能力,该文利用单因素及响应面法对该菌产酶的培养基和培养条件进行了优化。先利用单因素试验对羽毛浓度、碳源、氮源、无机盐、初始pH值、发酵时间及接种量等影响菌株产酶条件进行了优化。结果表明,羽毛15 g/L、果糖10 g/L、玉米浆4.0 g/L、初始pH 6.5、氯化钙0.15 g/L、接种量2.0%、接种发酵48 h后酶活达到最高。再利用Plackett-Burman试验确定对菌株产酶有显著影响的3个因素为玉米浆、氯化钙及羽毛浓度;结合最陡爬坡及响应面试验优化方法对这3个显著因素进行优化,获得最优产酶条件为玉米浆8.17 g/L,氯化钙0.27 g/L,羽毛含量13.58 g/L,在此发酵条件下,模型预测角蛋白酶酶活为1 866.47 U/mL,验证试验实测值达到1 810.98 U/mL,较优化前酶活227.38 U/mL提高了7.96倍。     

产果胶酶菌株的分离鉴定及其产酶条件优化

为丰富高效产果胶酶的微生物种质资源，该研究采用刚果红染色法从采自菠萝地的土样中分离产果胶酶微生物，通过测定菌株产果胶酶能力对其进行筛选，并对其进行形态学鉴定、生理生化特征分析和分子生物学鉴定，最后通过单因素和响应面试验设计对其发酵产酶条件进行优化。结果表明，经初筛与复筛得到一株产果胶酶酶活最高的菌株XW-18，经鉴定，该菌株为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。其最佳产酶条件为：蔗糖添加量40 g/L，蛋白胨添加量20 g/L，发酵温度30℃，培养基初始pH 7.0，在此最佳条件下，所产的果胶酶活力达到（1 804.32±55.28）U/mL。     

嗜热真菌FL12产耐热木聚糖酶条件优化

自土样中筛选得到一株高产耐热木聚糖酶嗜热真菌FL12,通过单因素实验及Box-Behnken design响应面分析,确定该菌株液体发酵产耐热木聚糖酶最佳条件:碳源玉米芯粉(浓度为4.9％),氮源牛肉蛋白胨(1.0％),培养基初始pH6.45,装液量60mL,培养温度50℃,转速200r/min.在此条件下菌株FL12发酵7d产酶量达2284.06U/mL.结果显示该菌株发酵粗酶液最适温度75℃,85℃时相对酶活为62.94％,对高温耐受性较好.     

海洋源低温微生物产苹果酸脱氢酶发酵条件优化

苹果酸脱氢酶（MDH）是参与生物三羧酸循环（TCA）的关键酶,广泛用于临床肝脏相关疾病的诊断,并在生物制药、化工检测等领域具有极大的市场需求。该研究以墓画大洋芽孢杆菌（Oceanobacillus picturae）XJH-11为苹果酸脱氢酶（MDH）产生菌,基于单 因素试验,通过Plackett-Burman响应面试验并结合Box-Behnken试验设计对发酵条件进行响应面优化。结果表明,菌株XJH-11产MDH 的发酵培养基为葡萄糖10g/L、酵母膏20g/L、硫酸镁0.1g/L、初始pH值8.0,最佳发酵条件为发酵温度27℃、摇床转速150r/min、接种量5%、装液量125mL/500 mL。在此优化条件下,MDH酶活为43.67U/mL,比优化前提高了197.87%。     

嗜热菌Geobacillus sp.PZH1产木聚糖酶发酵条件的优化

对嗜热菌Geobacillus sp.PZH1发酵产嗜热耐碱木聚糖酶的培养条件进行了优化研究。对碳源、氮源、初始pH、接种量以及发酵温度五个因素进行了单因素实验,在此基础上对碳氮比、初始pH以及接种量进行了正交实验。结果表明,该菌株在发酵培养7d时有最大产酶量,Geobacillus sp.PZH1发酵产木聚糖酶最佳发酵条件为:桦木木聚糖为碳源,牛肉膏为氮源,碳氮比2∶3,初始pH7.0,接种量4%,发酵温度50℃,发酵时间7d。在最佳产酶条件下进行发酵,木聚糖酶活力可达2.56IU/mL,是未优化前酶活的1.44倍。     

产高分子量木聚糖酶细菌的筛选及产酶条件优化

通过透明圈法从土壤中筛选出55株产木聚糖酶的细菌菌株,经产酶发酵培养基复筛及SDS-PAGE酶谱分析得到1株产高分子量木聚糖酶细菌菌株Paenibacillus sp.39631。在单因素实验的基础上,运用响应面分析,对影响产酶发酵的各因素进行优化,得到的最佳产酶发酵条件:碳源(80目玉米芯粉)0.8%,氮源(牛肉膏)1%,初始值pH7.2,培养温度30℃,转速158 r/min,接种量2%,装液量50 mL。在最佳培养条件下,经72 h液态发酵,酶活力达到44.12 U/mL,比优化前提高了4.36倍。     

基于高含油废水降解的产脂肪酶菌株的 筛选及发酵工艺优化

为了筛选高产脂肪酶菌株并探究其对高含油废水的降解能力,采用传统的微生物筛选法从餐厨废水中分离筛选菌株,考察菌株对高含油废水（油脂含量20 g/L）的油脂降解率和产脂肪酶酶活,并对产脂肪酶酶活较高的菌株进行鉴定。采用单因素实验和响应面实验对鉴定菌株发酵产脂肪酶的工艺条件进行优化。结果表明：从餐厨废水中筛选出3株细菌、2株酵母菌,其中2株细菌可在高含油废水中快速生长代谢,油脂降解率和产脂肪酶酶活均较高,经鉴定1株为解淀粉芽孢杆菌（Bi）,1株为鲁氏不动杆菌（Bu）;Bi产脂肪酶最优发酵工艺条件为pH 6.69、氯化钠含量301 g/L、蛋白胨含量6.01 g/L;Bu产脂肪酶最优发酵工艺条件为pH 5.07、氯化钠含量6.10 g/L、蛋白胨含量9.38 g/L;在最优发酵工艺条件下,Bi和Bu产脂肪酶酶活分别为（222.83±0.91）U/mL和（231.50±2.28）U/mL,优化后的Bu产脂肪酶酶活甚至高于初始脂肪酶酶活更高的Bi。综上,2株细菌具有高含油废水降解能力,具备广阔的应用前景。     

蜡样芽孢杆菌产磷脂酶D发酵条件优化

通过单因素和正交试验,对蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）产磷脂酶D发酵条件进行了优化。结果表明,培养基最佳组成为卵黄10 g/L、蛋白胨15 g/L、牛肉粉2 g/L、MgSO4·7H2O 1 g/L、氯化钠3 g/L;最佳发酵条件为：培养基初始pH8.0,接种量1.0%,于36 ℃,200 r/min培养8 h。在最适发酵条件下磷脂酶D酶活达4.21 U/mL。     

枯草芽孢杆菌工程菌株产普鲁兰酶发酵条件的优化

利用基因工程手段获得的产长野芽孢杆菌普鲁兰酶的枯草芽孢杆菌基因工程菌株WB600/pWB-pulB,通过单因素筛选及正交试验进行发酵培养基优化,得到产酶最佳配方为玉米淀粉3.0％,酵母膏20％,CaCl20.03％,Na2HPO41.0％.同时对重组菌株摇瓶条件下液体发酵的主要影响因素初始pH、接种量、装液量、转速、温度等进行探讨,确定了产酶最佳培养条件为,以3％接种量接种于优化后培养基,初始pH7.0,装液量30 mL/250 mL,37℃,200 r/min摇床培养36 h.在此优化条件下,普鲁兰酶活力达到20.16 U/mL,是之前研究结果(10.94 U/mL)的1.84倍.     

产木聚糖酶霉菌发酵条件优化及酶学性质研究

通过透明圈比较法从土壤中筛选出产木聚糖酶的菌株36株,以玉米芯为唯一碳源进行液体摇瓶发酵,对其中一株产酶水平较高的霉菌FH2213进行发酵条件的优化并对粗酶液的性质进行初步研究。采用Setp-by-step单因素试验法,获得FH2213产木聚糖酶的最佳发酵培养条件:碳源为玉米芯(15 g/L),氮源为酵母膏(15 g/L),初始pH为3.0,培养温度为30℃。在最适培养条件下发酵5 d木聚糖酶活达200 U/mL。FH2213产木聚糖酶的最适反应温度为65℃,最适反应pH为5.4。另外,SDS-PAGE和酶谱分析结果表明该菌产生3种木聚糖酶,分子量约为20.4,21.7以及34.3 kDa。     

木聚糖酶的研究进展

木聚糖是仅次于纤维素的第二丰富的可再生资源,通过筛选出产木聚糖酶的菌株,利用基因工程技术,将木聚糖酶基因进行异源表达,提高木聚糖酶产量。该文综述了菌株产生的木聚糖酶酶学性质,并对酶学性质进行改善使木聚糖酶更符合应用的条件,同时研究木聚糖酶分离纯化的步骤,来提高木聚糖酶的酶活。文章重点介绍了木聚糖酶的产生菌和木聚糖酶在基因工程技术等方面研究进展,并对木聚糖酶的分离纯化方法做了简要地介绍。     

木聚糖酶活性测定的实践与研究

研究了木聚糖酶活性测定中的几个关键因素对酶活测定值的影响,并以此为主要依据,建立了应用DNS法测定木聚糖酶活力的方法:存50℃、pH6.50条件下,底物浓度1%,酶促反应时间10min,DNS显色5min,于波长540nm处测定吸光度值.以期建立木聚糖酶活性榆测的最佳条件,为进一步研究木聚糖酶纯化工艺提供相关的参考依据.     

Endophytes as producers of xylanase

One hundred and sixty-nine endophytic fungi and 81 endophytic bacteria were isolated from 14 plants in total. Among them, 155 fungi (91.7%) and 52 bacteria (64%) were found to produce xylanase. The inside part of plants is a novel and good source for isolating xylanase producers in comparison with soil.     

壳聚糖—戊二醛固定化木聚糖酶的技术研究

采用壳聚糖微球一戊二醛交联的方法固定木聚糖酶,探讨壳聚糖浓度、戊二醛体积分数和交联时间对固定化酶相对酶活力的影响.以正交试验确定木聚糖酶的最佳固定化条件,比较固定化酶与其游离酶的最适反应pH值、pH值稳定性、最适反应温度及热稳定性.结果表明,在壳聚糖质量浓度0.1g/mL、戊二醛添加量3％、给酶量2000U/g载体、交联时间2.5h时,固定化酶的回收率较高,可达到65.38％,同时固定化和游离酶的最适温度分别为60℃、55℃,最适pH值分别为4.5、5.0,热稳定性有不同程度的提高,pH稳定性两者变化不大.木聚糖酶的固定化能有效地提高其作用性能,从而为木聚糖酶的工业化应用提供了一定的理论依据.     

粗糙脉孢菌木聚糖酶酶学性质的研究

对粗糙脉孢菌木聚糖酶粗酶的酶学性质进行了研究,结果表明:该木聚糖酶的最适反应温度50℃、pH值为5.8,温度低于50%、pH 4.6～7.4时该酶稳定性较好;金属离子Ca2+、Mg2+、Mn2+、Fe2+对该酶的活性有促进作用,K+、Na+、Pb2+、Cu2+、Fe3+、Al3+对酶的活性有抑制作用;EDTA、SDS、DMSO对该酶活性的抑制作用较小;以木聚糖为底物的酶动力学常数Km和Vmax值分别为1.30g/L和1.35μmol/(min·mL).     

发酵啤酒糟产饲用木聚糖酶的基质条件及其酶学性质研究

以啤酒糟为主要原料，利用黑曲霉发酵生产饲用木聚糖酶，通过正交试验法确定最佳培养基组分及其配比，并对其粗酶的酶学性质进行了研究。结果表明，黑曲霉An54．2．1在啤酒糟：玉米芯：麸皮=6：2：2；2％NH4O3，0．1％Tween-80的基质，适宜的条件培养2d-3d，产酶量可达6196．803U／g。粗酶液的最适反应温度N55℃，最适反应pH4．6-5．0，在pH4.0-6．6的范围内酶活性较稳定。粗酶粉的热稳定性良好，在90％干热处理60min仍保留74．73％的酶活性。     

木聚糖酶活力的二硝基水杨酸(DNS)测定法

采用DNS法研究不同稀释倍数、底物用量、pH值和反应温度对木聚糖酶活力的影响.结果表明:木聚糖酶的活力随酶稀释倍数、底物木聚糖量的提高而增加,但应控制好酶的稀释倍数和底物用量,否则会引起测定误差.酶处理反应的较佳工艺为:时间20 min,pH值6,反应温度60℃.木聚糖酶在60℃恒温稳定0-4 h,相对酶活都在85%以上,稳定性较好.其它前处理用酶制剂对木聚糖酶活力的影响不明显.不同类型的化学助剂对木聚糖酶的影响不同.     

海洋微生物来源木聚糖酶研究进展

由于海洋微生物生存环境的特殊性，使其所产生的酶大部分具有突出的优势和特点，这些特性使得海洋微生物来源的酶在基础研究和工业应用等方面具有巨大价值，具有独特的应用前景。木聚糖酶作为一种重要的工业酶制剂，大部分来源于陆地，该文对木聚糖酶的海洋微生物来源、生产及应用现状进行综述，以期为木聚糖酶基因的研究提供参考。     

酸性木聚糖酶及其在酿酒中的应用

酸性木聚糖酶已在饲料工业和酿酒工业表现出了较好的应用前景。介绍了酸性木聚糖酶的产生、性质及其在酿酒工业中的应用。     

宏基因组学在木聚糖酶制剂基因新资源开发中的应用

木聚糖酶是一种重要的工业酶制剂,其来源主要是从多种生物体,尤其是微生物体中通过培养分离得到的。目前通过常规培养手段只能获取自然界约1%的微生物木聚糖酶基因资源,使得优良木聚糖酶制剂的开发遭遇限制瓶颈。而宏基因组学研究通过提取环境中的大量微生物基因组DNA、构建文库并对文库进行筛选寻找,它突破了传统微生物产木聚糖纯培养方法的局限,使得从环境中获得大量非培养的99%的微生物基因资源成为现实,极大地扩展了微生物产木聚糖酶资源的利用空间。宏基因组学在开发具有工业应用价值的优良木聚糖酶基因方面具有独特优势,综述了宏基因组学文库的构建、筛选方法以及其在木聚糖酶基因资源开发应用的情况。