生长抑素及类似物对大肠癌组织血管生成的调控

目的:研究生长抑素(somatostatin, SS) 与大肠癌组织微血管密度(MVD) 及相关因子血管内皮细胞生长因子(VEGF) 和基质金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2) 表达的相关性。方法:应用免疫组织化学S-P 法, 分析80 例手术切除的新鲜大肠癌标本SS,CD34,VEGF, TIMP-2 的变化。结果:大肠癌组织中SS 表达阳性率为66.25 %, SS 高表达组的大肠癌MVD 的表达显著低于SS 低表达组(P <0.01), SS 表达与TIMP-2 表达呈明显正相关(P <0.05), 与VEGF呈显著负相关(P <0.05) 。结论:SS 及VEGF, TIMP-2 在人体大肠癌组织中的表达有一定拮抗性。SS 的抑癌机制之一可能是干扰了血管生长因子的合成,影响了细胞内调节细胞生长信号的传递, 从而抑制肿瘤血管的生长。     

食管鳞状细胞癌中基质金属蛋白酶-14和组织蛋白酶D的表达及对预后判断价值的研究

目的: 检测食管鳞状细胞癌中基质金属蛋白酶-14(MMP-14)和组织蛋白酶-D(Cath-D)的表达特征,观察其在不同临床病理特征中的表达差别及相关性,以期为临床治疗提供理论支持。方法: 以95例食管鳞状细胞癌作为观察组,以70例正常食管黏膜组织作为对照组,采用免疫组织化学方法检测2组中MMP-14和Cath-D的表达情况。结果: 观察组中MMP-14和Cath-D表达的阳性率明显高于对照组,观察组中MMP-14和Cath-D表达的阳性率与肿瘤直径、分化程度、Ki67的表达密切相关。相关性分析显示观察组中MMP-14和Cath-D的表达呈正相关性。生存分析显示MMP-14和Cath-D的表达与预后相关。结论: 食管癌组织中MMP-14和Cath-D高表达,对肿瘤的进展有促进作用;术后联合检测MMP-14和Cath-D的表达对判断食管鳞癌的预后有参考意义。     

经典Wnt信号途径相关因子与大肠癌分期的关系

目的: 探讨经典Wnt信号途径相关因子与大肠癌分期的关系。方法: 搜集2013年1月1日至2014年1月1日皖南医学院第一附属医院胃肠外科收治的46例大肠癌患者的临床资料、血清样本及病理组织标本,根据Dukes分期分为四组。搜集10例正常的肠黏膜组织标本作为对照组1,应用免疫组化法检测大肠癌及正常肠黏膜组织中Wnt-2蛋白、β-catenin蛋白、Axin蛋白、APC蛋白的表达。搜集15例健康人的血清样本作为对照组2,应用酶联免疫吸附试验检测大肠癌患者和对照组2血清中Wnt-2蛋白、Axin蛋白的表达。结果: Wnt-2、β-catenin在大肠癌组织中高表达,Axin、APC在大肠癌组织中低表达,且各个分期之间差异有统计学意义;46例大肠癌患者血清中Wnt-2浓度明显高于健康人,各个分期之间的差异也有统计学意义。Axin血清浓度低于健康人,但是各个分期之间的差异无统计学意义。结论: 经典Wnt信号途径相关蛋白的表达与大肠癌Dukes分期有关,经典Wnt信号途径相关因子可作为大肠癌筛查的血清学辅助指标,有助于提高大肠癌检出的灵敏度。     

ERCC1蛋白的表达与晚期食管癌含顺铂方案化疗疗效的临床观察

目的: 探讨晚期食管癌患者癌组织中切除修复交叉互补基因1(ERCC1)蛋白的表达与含顺铂方案联合化疗疗效的相关性。方法: 回顾性检测98例晚期食管癌患者肿瘤组织中ERCC1蛋白的表达,观察患者接受含顺铂方案的联合化疗的疗效,分析ERCC1表达与客观有效率、疾病控制率、无进展生存期、总生存期之间的关系。结果: 98例患者ERCC1表达阳性率为 56.1％(55/98),总疾病控制率为 70.4％(69/98),ERCC1表达阴性组的客观有效率(76.7%)优于表达阳性组(38.2%), 差异有统计学意义(χ²=14.506, P=0.000);ERCC1表达阴性组的疾病控制率(88.4%)优于表达阳性组(56.4%), 差异有统计学意义(χ²=11.867, P=0.001);ERCC1表达阳性和阴性的两组无进展生存期和总生存期变化相近(P＞0.05)。结论: 晚期食管癌病理组织中ERCC1阴性表达患者疗效近期有效率优于ERCC1阳性表达患者。     

手术为主的综合治疗直肠癌的预后因素分析

目的: 初步探讨影响以手术为主的综合治疗直肠癌的预后因素。方法: 回顾性分析124 例以手术为主的综合治疗直肠癌患者的临床资料。用Kaplan-Meier 法计算生存率和局部控制率, Log-rank 法作差异检验, 多因素分析采用Cox 比例风险模型。结果: 所有患者的随访时间为7 ~ 81 个月。本组病例的5 年总生存率和局部控制率分别为30.6 %和49.1 %。单因素分析结果显示术后病理类型为腺癌、粘液腺癌和印戒细胞癌的患者5 年生存率分别为44.9 %, 0 %和0 %(χ² =8.67, P =0.0129), 5 年局控率分别为55.2 %, 34.6 %和33.3 %(χ² =4.86,P =0.0334) 。行辅助放疗与未行辅助放疗者5 年生存率分别为40.4 %和13.3 %(χ² =7.48, P =0.0062), 5 年局控率分别为73.5 %和37.5 %(χ² =29.68, P =0.0000) 。而Dukes 分期, 淋巴转移情况, 肿瘤浸润肠壁深度, 直肠系膜全切除(TME) 以及术后辅助化疗等因素与预后无关(P >0.05) 。多因素分析显示辅助放疗与病理类型是影响直肠癌患者生存率的独立预后因素(P =0.009 和0.045), 而对局部复发率进行多因素分析发现仅辅助放疗有统计学意义(P =0.0000) 。结论: 对以手术为主的综合治疗直肠癌病例, 肿瘤病理类型和是否辅以放射治疗是影响其预后的重要因素, 其它因素尚不能肯定。     

肠道抗生素行肠道准备后对大肠杆菌耐药的影响

目的: 探讨结直肠肿瘤患者术前口服肠道抗生素行肠道准备对大肠杆菌耐药的影响。方法: 对符合要求的100例结直肠肿瘤患者随机分成两组,观察组采用口服肠道抗生素 1 d,对照组口服肠道抗生素 3 d,于术中采集每例病员结肠黏膜附着物行细菌培养及药敏试验,统计两组大肠杆菌培养阳性率及其耐药情况。结果: 1 d 组和 3 d 组结肠黏膜附着物大肠杆菌培养阳性率分别为46%和40%, 3 d 组大肠杆菌较 1 d 组对丁胺卡那霉素、庆大霉素、环丙沙星及左氧氟沙星耐药增加(P＜0.05);两组均对氨苄西林全部耐药,而对厄他培南、亚胺培南及哌拉西/他唑巴坦全部敏感。结论: 肠道抗生素用于结直肠肿瘤患者术前肠道准备, 3 d 方案致大肠杆菌对部分药物耐药性增加,术前肠道准备宜尽量减少服用抗生素。     

RRM1和ERCC1基因外周血中表达水平与吉西他滨联合铂类治疗晚期非小细胞肺癌疗效的相关性研究

目的: 探讨外周血中DNA修复基因RRM1(核苷酸还原酶,ribonucleotide reductase M1)和ERCCl(切除修复交叉互补组基因1,excision repair cross-complementation 1)的表达水平与吉西他滨联合铂类治疗非小细胞肺癌(Non-small-cell lung cancer, NSCLC)疗效的相关性。方法: SYBR荧光实时定量PCR检测NSCLC组织和外周血中RRM1和ERCC1 mRNA表达水平。分类变量之间进行χ²检验,连续性变量之间进行Spearman等级相关性分析;总体生存率的比较采用Kaplan-Meier生存曲线和log-rank检验。结果: 本研究中,34例晚期NSCLC患者外周血RRM1和ERCC1 mRNA表达水平进行了有效地检测,22例病例同时进行了肿瘤组织和外周血的基因检测。RRM1 mRNA 的相对表达量在外周血和肿瘤组织中存在线性相关性(R²=0.045,P=0.048),而ERCC1在两者之间无线性相关(R²=0.016,P=0.251)。RRM1低表达组的生存期(16.0月)明显长于高表达组(12.5 月)( Log-rank 3.980,P=0.046 )。而ERCC1的表达在两组间无统计学意义( P＞0.05)。结论: 研究表明,在入组的NSCLC患者中,外周血中RRM1低表达组的生存期明显长于高表达组,对化疗反应的有效率更高,其结果有助于筛选出接受吉西他滨联合铂类化疗方案的患者。     

泛素连接酶hrd1在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的: 研究泛素连接酶hrd1(hydroxymethylglutaryl reductase degradation 1,hrd1)在胃癌及癌旁组织中的表达水平,以此探讨hrd1在胃癌发生发展中的意义。方法: 收集临床胃癌组织及距癌灶边缘 5 cm 以上胃壁组织,应用免疫组织化学SP法研究63例胃癌(实验组)及其癌旁正常组织(对照组)中hrd1蛋白的表达水平,应用荧光定量PCR(Q-PCR)方法分别检测实验组及对照组hrd1基因表达水平,并用统计学方法分析hrd1表达水平与胃癌临床病理参数之间的关系。结果: 免疫组化及Q-PCR结果均显示,胃癌组织中hrd1表达水平明显高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.05)。hrd1在癌灶≥5 cm 的胃癌组织中表达水平高于癌灶＜5 cm 的胃癌组织,差异有统计学意义(P<0.05);胃癌组织中hrd1的表达与肿瘤浸润深度、分化程度、淋巴结有无转移和临床分期均无关(P>0.05)。结论: 泛素连接酶hrd1在胃癌组织中表达明显高于癌旁正常组织,提示hrd1可能与胃癌的发生有关。     

靶向siRNA下调人结直肠癌 Colo320 细胞端粒长度与端粒酶逆转录酶基因表达的研究

目的: 探讨发夹状 shRNA 封阻原癌基因(c-myc) , 抑制癌细胞增殖 、生长的作用。方法: 针对c-myc 的构建发夹状 shRNA 的真核表达质粒, 并转染人结直肠癌 Colo320细胞。荧光定量 RT-PCR检测 c-myc 及细胞端粒酶逆转录酶的 mRNA 的表达,Western-blot 检测 c-myc、端粒酶逆转录酶(hu-man telomerase reverse transeriptase, hTERT) 蛋白表达水平 。Southern blot 检测端粒的长度, PCR-ELISE法检测端粒酶活性。³H-thymidine 实验分析DNA 合成和细胞增殖 。结果: 转染细胞增殖、生长皆受到抑制。同时c-myc 和 hTERT 的 mRNA 和蛋白表达显著下降, 端粒的长度明显缩短, 端粒酶活性降低 。结论: c-myc 的 shRNA 对人结直肠癌Colo320 细胞的生长增殖、端粒长度、端粒酶活性有特异性抑制作用, 并呈剂量依赖关系 。     

睑板腺癌中MMP-2的表达及其临床意义

目的: 探讨基质金属蛋白酶-2(matrix metallop roteinase-2,MMP-2)在睑板腺囊肿和睑板腺癌组织中的表达差异及其与睑板腺癌临床病理特征的关系和临床意义。方法: 采用免疫组化SP法检测睑板腺囊肿和睑板腺癌组织中MMP-2、血管内皮生长因子(VEGF)的表达情况,以CD34标记检测肿瘤内的微血管密度(microvessel density, MVD),分析MMP-2与临床病理因素、VEGF、MVD的关系。结果: MMP-2在睑板腺癌组织中阳性表达率高于睑板腺囊肿(56% vs 20%),差异具有统计学意义(P﹤0.05),而VEGF表达在睑板腺癌和睑板腺囊肿中差别无统计学意义;MMP-2蛋白表达与肿瘤复发和局部浸润有关 (P﹤0.05),与患者年龄、组织学分级、病理类型和病程无关 (P﹥0.05)。MMP-2阳性的肿瘤组织内MVD明显高于MMP-2阴性肿瘤(P﹤0.05),VEGF的表达与MMP-2无相关性(r=-0.049,P=0.748)。结论: MMP-2在睑板腺癌中高表达,可能通过非VEFG依赖途径促进肿瘤的血管生成,进而参与肿瘤浸润和复发。     

胰岛素受体底物1低表达促进头颈部鳞状细胞癌的侵袭转移

目的: 研究胰岛素受体底物1(insulin receptor substrate 1, IRS-1)在头颈部鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma, HNSCC)侵袭转移中的作用及其可能的机制。 方法: 应用定量RT-PCR法检测HNSCC患者淋巴结转移灶和原发灶癌组织中IRS-1 mRNA的表达,以及不同转移能力头颈部肿瘤细胞株上IRS-1 mRNA的表达。用Taqman探针法检测miR-9及U6的相对表达量。利用小干扰RNA技术阻抑IRS-1表达,肿瘤细胞侵袭实验检测IRS-1干扰前后对细胞侵袭能力的影响。用定量RT-PCR和Western blot检测上皮-间叶转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)的标志物E-cadherin及vimentin mRNA和蛋白的表达;用SRB法检测细胞存活率。 结果: (1)HNSCC患者淋巴结转移灶中IRS-1 mRNA的表达低于原发灶(P<0.05);高转移性HNSCC细胞株中IRS-1 mRNA的表达低于低转移性细胞株(P<0.05)。(2)下调IRS-1表达,肿瘤细胞的侵袭能力增强,上皮-间叶转化标志物E-cadherin表达下降,同时伴有miR-9表达的升高。 结论: IRS-1低表达可能通过上皮-间叶转化和上调miR-9而增强细胞的侵袭能力,促进HNSCC的转移。     

脂氧合酶抑制剂对肝癌细胞株HepG2增殖及MEK/ERK信号通路的影响

目的: 探讨脂氧合酶抑制剂去甲二氢愈创木酸(NDGA)对肝癌细胞株HepG2增殖及MEK/ERK信号通路的影响。方法: 在不同浓度的NDGA干预下对HepG2细胞进行体外培养;应用MTT比色法观察NDGA对HepG2增殖的影响;逆转录PCR(RT-PCR)测定不同浓度NDGA干预下丝裂原活化蛋白激酶的激酶(MEK)1、MEK2、细胞外信号调节激酶(ERK)1、ERK2 mRNA表达强度。结果: NDGA可抑制HepG2细胞增殖,且呈剂量依赖性;NDGA干预后HepG2细胞中MEK1、MEK2、ERK1、ERK2 mRNA的表达强度随着浓度的增加呈递减趋势;不同浓度NDGA干预均显著降低MEK1 mRNA的表达强度(P<0.05),在NDGA干预浓度为 100 μmol/L 及 200 μmol/L 时可显著降低MEK2、ERK1、ERK2 mRNA表达强度(P<0.05)。结论: NDGA可抑制HepG2细胞增殖,其作用机制与抑制MEK/ERK信号通路有关。     

大鼠重症急性胰腺炎ENA-78的表达及生长抑素的干预作用

目的: 探讨趋化因子上皮中性粒细胞活化蛋白-78(ENA-78)在重症急性胰腺炎(SAP)大鼠早期发病机制中的作用,并观察生长抑素对ENA-78表达的影响。方法: 采用 3.5%牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射制备SAP大鼠模型。SD大鼠随机分为假手术(SO)组、SAP 3 h、6 h、12 h 组和生长抑素(SST)干预 3 h、6 h、12 h 组。检测血清淀粉酶、胰腺髓过氧化物酶(MPO),光镜下观察胰腺病理组织学改变,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测胰腺组织中ENA-78mRNA的表达,同时采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清ENA-78的水平。结果: 与SO组相比,SAP组大鼠胰腺组织ENA-78 mRNA表达显著上调,并随SAP的加重ENA-78 mRNA表达逐渐增加(P＜0.05 或 P＜0.01); SAP各组大鼠血清中ENA-78水平明显高于SO组,并随SAP的加重逐渐增高(P＜0.01);胰腺组织ENA-78 mRNA的水平与胰腺的病理损伤呈正相关(r=0.888,P＜0.01);而经生长抑素干预后,SAP大鼠胰腺组织ENA-78 mRNA和血清ENA-78的水平明显下调。结论: ENA-78可能在SAP发生、发展过程中发挥重要作用;生长抑素可能通过抑制趋化因子ENA-78表达从而缓解SAP。     

重组人白血病抑制因子体外诱导HL-60细胞凋亡与bcl-2及p5表达的关系

目的 探讨重组人白血病抑制因子(rh-LIF) 诱导HL-60 细胞凋亡的作用及其可能机制。 方法 不同剂量(10 ~ 4 000 U·ml^-1) 的rh-LIF 作用HL-60 细胞3 d 后, 用流式细胞仪观察分析细胞周期变化并检测细胞凋亡率, 用TUNEL 法检测原位细胞凋亡情况;分别用免疫组化法和原位杂交法检测rh-LIF 作用2、4、6 d 后P53 蛋白及p53 mRNA、bcl-2 mRNA 表达水平的改变。 结果 rh-LIF (10 ~ 4 000 U·ml^-1) 作用d 3, 细胞凋亡率较对照组显著增加, 其中以1 000 U·ml^-1组的作用最强;rh-LIF (800 U·ml^-1) 作用2 ~ 6 d,P53 蛋白和p53 mRNA 表达也同步增高,而bcl-2 mRNA 表达显著降低(P <0.01)。 结论 rh-LIF 能诱导HL-60 细胞凋亡, 该作用与P53 蛋白表达增加和bcl-2 表达降低有关。     

柚皮苷对人卵巢癌SKOV3细胞环氧化酶2 mRNA及蛋白表达水平的影响

目的: 研究中药柚皮苷对人卵巢癌SKOV3细胞环氧化酶2(COX-2)mRNA及蛋白表达水平的影响。方法: 常规培养人卵巢癌SKOV3细胞,分为空白对照组、柚皮苷 10 μmol/L 组、柚皮苷 20 μmol/L 组、柚皮苷 40 μmol/L 组、阳性对照组(塞来昔布 80 μmol/L)。MTT法测定柚皮苷对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响,运用Real-time PCR和Western Blot法测定培养48 h后各组细胞中COX-2 mRNA和蛋白表达水平的变化。结果: MTT检测法显示,柚皮苷各浓度处理组,时间依赖性和剂量依赖性地抑制人卵巢癌SKOV3细胞生长。经药物处理48 h后,Real-time PCR结果显示,与空白对照组(1.094±0.053)比较,10、20 μmol/L 柚皮苷即对SKOV3细胞COX-2 mRNA表达抑制作用(0.828±0.006,0.753±0.011,P<0.05),而 40 μmol/L 柚皮苷则明显下调 COX-2 mRNA的表达(0.412±0.216,P<0.01),与塞来昔布组(0.321±0.017)的抑制程度相近。Western Blot法检测结果显示,与空白对照组(1.7325±0.0826)相比,10 μmol/L 柚皮苷组相对表达量(1.7925±0.0880)虽略有上调,但无统计学差异,20、40 μmol/L 柚皮苷组均可明显下调SKOV3细胞COX-2蛋白的表达(1.2225±0.0822,1.2725±0.0763,P<0.05),塞来昔布组也明显抑制COX-2蛋白的表达。结论: 柚皮苷可抑制人卵巢癌SKOV3细胞体外增殖并抑制COX-2 mRNA和蛋白的表达。     

心房颤动患者氯电流相关通道CIC-3 基因表达的研究

目的: 研究心房颤动(AF) 患者心房组织氯电流相关通道ClC-3 的基因表达, 探讨AF 时心房组织ClC-3 的mRNA 表达改变及其意义。方法: 将71 例风湿性心瓣膜病接受换瓣手术患者分为3 组:窦性心律组(SR 组) 31 例, 阵发性房颤组(PAF 组) 7 例,持续性房颤组(CAF 组) 33 例, 术中获取右心耳组织, 应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR) 技术检测心房组织ClC-3 的mRNA 表达的相对含量。结果: 与SR 组相比, PAF 组心房组织中ClC-3 的mRNA表达增加, 但无显著的统计学意义(P >0.05), CAF组的表达明显增加(P <0.01), 并与AF 时程呈明显正相关(r =0.376, P =0.001) 。结论: 房颤患者ClC-3 的mRNA 表达水平的增加可能是细胞容量调节的氯电流(I_{Cl. VOL}) 上调的分子基础。     

激动黑皮质素4型受体对抗脓毒症诱导的肾脏损伤

目的: 观察激动黑皮质素4型受体(MC4R)对抗脓毒症诱导的肾脏损伤作用,并探讨其机制。方法: 雄性SD大鼠24只,随机分为:假手术组(Sham)、Sham+MC4R激动剂Ro27-3225组、盲肠结扎穿孔组(CLP)和CLP+Ro27-3225组,造模 24 h 后测定血清尿素氮(BUN)和肌酐(CRE)水平,HE染色观察肾脏形态学变化,免疫组化观察肾小管细胞NF-κB P65的表达,RT-PCR测定肾脏组织NF-κB mRNA表达情况。结果: 与Sham组相比,CLP组血清BUN和CRE水平明显升高(P<0.01),组织切片显示CLP组大鼠肾小体中血管球淤血、皱缩、肾小囊腔扩大,伴肾小管上皮细胞肿胀和坏死。肾脏组织NF-κB P65表达呈强阳性,NF-κB mRNA表达增高(P<0.01)。与CLP组相比,CLP+Ro27-3225组BUN和CRE水平下降(P<0.01),肾小体、肾小管损伤减轻,肾脏组织NF-κB P65表达和NF-κB mRNA表达下降(P<0.01)。结论: 脓毒症大鼠肾脏功能受损,激动MC4R可对抗脓毒症诱导的肾脏损伤,这可能与减少NF-κB的表达,降低炎症反应有关。