同时测定人血浆中甲砜霉素和前药甲砜霉素甘氨酸酯浓度及其药代动力学研究

目的: 建立一种简单、灵敏同时测定人血浆中甲砜霉素(TAP)及其前药甲砜霉素甘氨酸酯(TG)的高效液相色谱法。方法: 24名健康志愿者随机分为三组,分别静脉滴注低(0.5 g)、中(1.0 g)、高(1.5 g)三个剂量的注射用盐酸甲砜霉素甘氨酸酯;采用乙酸乙酯萃取法处理血浆,色谱柱为 Hypersil ODS₂(5 μm,4.6 mm×200 mm 大连,依利特),流动相为乙腈-水(0.003 mol/L 四丁基溴化铵与 0.056 mol/L 乙酸铵) =13∶87(pH=6.6),流速为 1 mL/min,检测波长为 224 nm。结果: 血浆中TAP和TG标准曲线线性范围均为 0.78~100 μg/mL,高、中、低(0.78、6.25、100 μg/mL)三种浓度的日间和日内变异均小于 15.0％,血浆经室温 4 h 或者-70 ℃ 冷冻放置,冻融两次均显示TAP稳定性较好。结论: 该方法灵敏、准确、简单、快速,可用于TAP和TG的药代动力学研究。     

LC-MS/MS测定大鼠血浆中乌头碱的浓度

目的: 建立LC-MS/MS法检测大鼠血浆中乌头碱的浓度。方法: 以维拉帕米作内标,血浆样品经MTBE液液萃取后,采用HyPURITY Cyano (150 mm×2.1 mm, 5 μm)柱分离,流动相为乙腈:10 mmol/L 甲酸铵=(70∶30,V/V),流速为 0.30 mL/min。然后采用电喷雾离子源(ESI源)正离子多反应监测(MRM)扫描分析,乌头碱和维拉帕米的离子选择通道分别为:m/z 646.4→586.4 和 455.2→164.9。结果: 乌头碱的线性范围为 9.3～2390 pg/mL,最低检测浓度为 9.3 pg/mL,日内和日间变异均<15%。结论: 本方法灵敏度高,适用于乌头碱在鼠内的药物代谢动力学研究。     

UPLC-MS/MS同时测定血浆样品中他莫昔芬及代谢产物的浓度和应用

目的: 建立UPLC-MS/MS法测定人体血浆样品中他莫昔芬及代谢产物的浓度和应用。 方法: 采用Waters AcQuity型超高效液相色谱联用API4000型三重四级杆质谱仪,样品处理采用固相萃取的方法,采用Thermo hypurity C₁₈(150 mm×2.1 mm,5 μm)色谱分析柱, 流动相为 10 mmol/L 甲酸胺-乙腈(40∶60,V/V),流速为 0.3 mL/min,进样体积为 10 μL,柱温为 30 ℃, 样品室温度为 5 ℃,质谱应用ESI源、正离子模式、多反应监测(MRM)方式检测他莫昔芬及各代谢产物的浓度。 结果: 他莫昔芬、ND-Tam和TamNox线性范围为1~400 ng/mL,4-OH-Tam线性范围为 0.4~160 ng/mL,4-OHND-Tam线性范围为2~800 ng/mL,可以满足样本浓度定量检测的需要,方法稳定、特异性高,并成功地应用到用药后他莫昔芬及各代谢产物血浆浓度的检测。 结论: 该方法简便、准确、重复性好,可以准确地定量人体血浆他莫昔芬和代谢产物的浓度,除了为临床血药浓度监测及他莫昔芬药效学研究提供服务外,也可为遗传药理学科研提供技术方法。     

液相色谱串联质谱法测定人血清中匹多莫德的浓度

目的: 建立液相色谱串联质谱法测定人血清中匹多莫德的浓度。方法: 血清样品用甲醇沉淀蛋白,内标为格列吡嗪,色谱柱为Lichrospher C₁₈ (4.6 mm×150 mm,5 μm),柱温为 30 ℃,流动相为甲醇-2.5 mmol/L NH₄Ac(90∶10,V/V),流速为 0.5 mL/min。质谱采用ESI离子源负离子检测,定量分析的离子对为:m/z 242.9/153.0(匹多莫德),m/z 444.0/169.9(内标格列吡嗪)。结果: 匹多莫德在 0.1~10 mg/L 范围内线性关系良好(r=0.9995),批内批间RSD均小于15%,提取回收率为 85.52%~98.30%。结论: 该方法快速,灵敏,准确,可用于匹多莫德的临床药动学研究。     

HPLC-MS-MS法测定人血浆中芬太尼浓度及其生物等效性研究

目的: 建立液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS-MS) 测定人血浆中芬太尼的浓度。 方法: 以D5-芬太尼为内标,采用正己烷处理血浆样品。色谱柱为Thermo Hypurity C₁₈(150 mm×2.1 mm, 5 μm),流动相为甲醇∶水(含 0.1%甲酸)=(85∶15,V/V),流速为 0.3 mL/min,柱温 40 ℃;质谱条件为电喷雾电离源(ESI),检测方式为正离子方式、多离子反应监测(MRM),用于定量分析的离子为芬太尼m/z 337.1→188.1,D5-芬太尼m/z 341.9→187.9。 结果: 芬太尼血药浓度在 19.53～5000 pg/mL 范围内线性关系良好,定量下限为 19.53 pg/mL,日内和日间变异均小于 5.16%,提取回收率均在90％以上;应用此方法研究了24名健康男性受试者使用两种芬太尼透皮贴剂的药代动力学特点,受试制剂对参比制剂的相对生物利用度为(94.0±19.5)%。 结论: 本法具有快速、简便、灵敏、准确等特点,适合人血浆中芬太尼浓度测定。两种制剂生物等效。     

HPLC-MS/MS法测定人体血浆中吲哒帕胺的浓度

目的: 建立一种简便、灵敏的测定人体血浆中吲哒帕胺浓度的高效液相色谱-串联质谱 (HPLC-MS/MS) 方法。方法: 以瑞格列奈钙为内标,采用乙腈:0.1%甲酸水溶液=90∶10为流动相,以Agilent-ZORBAX-C₁₈柱(2.1 mm×150 mm,5.0 m)色谱柱为分析柱,通过电喷雾离子源(ESI),以正离子多反应监测(MRM)方式进行进样检测。检测离子为 [M+H]+m/z 364.1 m/z 188.8(吲哒帕胺)和[M+H]+m/z 451.1 m/z 134.8(瑞格列奈钙,内标)。结果: 吲哒帕胺线性范围为 0.5～50 ng/mL,定量下限为 0.5 ng/mL,线性关系良好;高、中、低三个浓度的日内、日间的RSD均<15%,平均回收率为 94.60%～110.33%。结论: 本方法专属性强,操作简便,灵敏度高,适用于吲哒帕胺制剂的临床药动学研究。     

LC-MS/MS法测定犬体内托拉塞米浓度及相对生物利用度研究

目的: 建立LC-MS/MS法测定Beagle犬体内托拉塞米的浓度,并研究托拉塞米缓释片的相对生物利用度。方法: 色谱柱为Waters Symmetry-C₁₈ (100 mm×4.6 mm, 5 μm);流动相为甲醇∶20 mmol/L 甲酸铵(65∶35,V∶V);流速 0.4 mL/min;柱温 30 ℃。采用两制剂双周期随机交叉试验设计,分别给予6只Beagle犬受试制剂或参比制剂 5 mg,采用LC-MS/MS法测定给药后不同时间的血药浓度。结果: 托拉塞米线性范围为 0.02~5 μg/mL,最低定量限为 0.02 μg/mL,分析方法灵敏、稳定、特异性高。受试制剂和参比制剂的主要药动学参数:峰浓度(C_max)、达峰时间(t_max)和药-时曲线下面积(AUC_{0-48 h})分别为(2.6±0.5) g/mL 和 (3.0±0.6) g/mL、(3.3±1.4) h 和(1.2±0.8) h、(36.1±11.0) g·h·mL^-1和(32.1±13.1) g·h·mL^-1。以AUC_{0-48 h}计算,受试制剂的相对生物利用度F为(118.0±28.3)%。结论: 该方法操作简单、准确、重复性好,并成功地运用于犬体内托拉塞米相对生物利用度的研究。     

HPLC-MS/MS法测定人体血浆中格列美脲及其活性代谢物

目的: 建立同时测定格列美脲(Glimepiride,G)及其活性代谢物羟基格列美脲(Hydroxyl-glimepiride,M₁)血浆浓度的高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)法。方法: 血浆样品酸化后,经乙酸乙酯萃取后浓集进样,色谱柱为Phenomenex Gemini C₁₈ (50 mm×3.0 mm,5 μm),甲醇∶水∶甲酸(80∶20∶0.1)为流动相,流速为 0.2 mL/min,柱温为室温,采用电喷雾(ESI) 离子源,多反应离子检测模式, 以格列齐特(Gliclazide,IS)为内标。G、M₁和IS的检测离子对分别为质荷比(m/z) 491.4→352.4、507. 4→352.4、324.4→127.2。结果: G和M₁的线性范围分别为 1.25～400 ng/mL 和 0.313~100 ng/mL,最低定量限分别为 1.25 和 0.313 ng/mL;批内批间精密度均小于10%,方法回收率均在 96.4% ~102.5%之间。结论: 该方法简便快速、特异性高,可用于同时测定G和M₁血药浓度及其人体药代动力学的研究。     

LC-MS 法测定Beagle 犬血浆中苦参碱及其药代动力学

目的: 建立Beagle 犬血浆中苦参碱的LC-MS测定法, 测定其药物动力学及绝对生物利用度。方法: 采用Lichrospher C18 柱, 250 mm×4.6 mm(ID),5 μm, 柱温:25 ℃;流动相:10 mmol·L^-1醋酸胺水溶液∶甲醇(25 ∶75), 流速:1 ml·min^-1 。电喷雾离子化(ESI) 方式, 采用选择性离子检测, 检测离子为正离子, 苦参碱的离子是[M+H] +, m/z 249.2 。结果: 苦参碱在2～5 000 μg·L^-1的范围内呈良好的线性关系(r=0.9975), 最低检出限达0.3 μg·L^-1。日内和日间误差均小于4.5 %, 方法回收率大于96.6 %;药-时数据符合二室模型, C_max 为3821±705 μg·L^-1, T_max为0.4±0.1 h, T_1/2β为11.2±2.1 h,AUC_0→∞为7446±1456 μg·h·L^-1, 绝对生物利用度为(60.1±19.0) %。结论: 该法灵敏、快速、简单, 专属性强, 苦参碱在Beagle 犬体内有较高的绝对生物利用度。     

高效液相色谱法定量尿酸、黄嘌呤和次黄嘌呤在人体血清中的浓度

目的: 建立高效液相色谱法测定尿酸、黄嘌呤和次黄嘌呤在人体血清中的浓度。方法: 用Agilent ZORBAX SB-Aq column色谱柱,ZORBAX-Extend C₁₈预柱,以甲醇和 47 mmol/L KH₂PO₄水溶液作为流动相,流速:1.0 mL/min,检测波长为 260 nm。结果: 血清中尿酸、黄嘌呤和次黄嘌呤的线性范围分别是(1.667~166.667)×10³ ng/mL (r=0.9995)、(0.033~3.338)×10³ ng/mL(r=0.9994)和 (0.033~3.338)×10³ ng/mL (r=0.9996),日间与日内精密度均<15%。结论: 该法灵敏度高,精密度和准确度佳,能满足非布司他体内药效学研究。     

LC-MS/MS快速测定大鼠血浆中HHY-002浓度

目的: 建立用于测定治疗慢性心律失常药物HHY-002的大鼠血浆测定法。方法: 流动相为乙腈-0.1%甲酸(65∶35),流速 0.200 mL/min,色谱柱Phenomenex Luna C₁₈柱(150 mm×2.00 mm,5 μm,5 micron),进样量为 10 μL,柱温 35 ℃,以地西泮为内标。结果: HHY-002在 1.98~1013.50 ng/mL 的范围内呈良好的线性关系(r=0.998),最低定量限达 1.98 ng/mL,绝对回收率高于80%,日内和日间误差小于10%,方法回收率大于(81.4±4.5)%,符合生物样品分析要求。结论: 建立的LC-MS/MS方法专属性强,灵敏度高,可用于HHY-002的体内定量分析。     

HPLC-UV法测定大鼠体内S-腺苷蛋氨酸浓度及其药动学研究

目的: 建立HPLC-UV法测定大鼠血浆中S-腺苷蛋氨酸(S-Adenosylmethionine, SAMe)浓度,并用此法研究静脉给药后的大鼠体内药代动力学特征。方法: 色谱柱:大连依利特Kromasil C₁₈ 柱(4.6 mm×200 mm, 5 μm),流动相:甲醇∶0.3%三氟乙酸溶液(含1%磷酸二氢钠盐)=2∶98,等浓度洗脱,紫外检测波长:260 nm,流速:0.6 mL/min,柱温:30 ℃。大鼠(n=6)经静脉给予 140 mg/kg SAMe并测定血浆药物浓度,采用DAS 2.0 软件进行药动分析。结果: SAMe能完全分离,线性范围:10~2000 μg/mL,回归方程为Y=30241X+256204,r=0.9991, 日内精密度分别为 2.6%,3.6%,3.9%;日间精密度分别为 6.3%,4.9%,7.9%;回收率分别为107%,101%,98.3%。静脉给予 140 mg/kg SAMe药动学参数,血浆药物浓度-时间曲线下面积AUC_(0-t)为(569.52±174.87) mg·L^-1·h,半衰期(t_1/2)为(2.03±0.96) h,清除率(CL)为(0.21±0.13)L·h^-1·kg^-1,表观分布容积(V_d)为(0.53±0.31) L/kg。结论: 本实验方法专属性好,灵敏度高,可靠性强,可用于SAMe药动学分析。