BCG-CpG-DNA重复给药对小鼠免疫毒性的初步评价

目的观察BCG-CpG-DNA重复给药对小鼠免疫器官和免疫功能的影响,评价BCG-CpG-DNA的免疫毒性。方法将BALB/c小鼠随机分为4组,对照组注射生理盐水,实验组分别注射低(100μg)、中(250μg)、高(500μg)剂量的BCG-CpG-DNA,于28d内分别经背部皮下免疫7次,分别于初次免疫后14d、末次免疫后3d和3周,检测各组小鼠免疫器官脏器系数、淋巴细胞转化功能、细胞因子释放(ELISPOT法)、T细胞亚群变化(免疫荧光法)和NK细胞杀伤活性(乳酸脱氢酶法)。结果 BCG-CpG-DNA重复给药7次,主要影响小鼠初级免疫器官,表现为脾肿大,对胸腺、肝脏和肾脏无影响;对细胞免疫功能的影响是增强淋巴细胞转化功能;降低中、高剂量组CD3+T细胞亚群含量;提高体内分泌IFNγ和IL-4的细胞数二者的比例;增强NK细胞的杀伤能力。结论 BCG-CpG-DNA重复给药累计达3.5mg,小鼠表现为免疫功能增强,对免疫器官和免疫功能无不良影响,未见免疫毒性副作用。     

BCG-CpG-DNA一般毒性的初步评价

目的观察BCG-CpG-DNA对小鼠急性毒性和28d长期毒性作用,评价其一般毒性。方法小鼠分别经背部皮下给予BCG-CpG-DNA100、250和500μg1次(急性毒性试验)和7次(28d长期毒性试验),对照组注射生理盐水。单次给药后观察小鼠的生长情况和体重变化,14d后观察脏器是否发生病变;重复给药期间及末次给药后3周恢复期内,每周观察小鼠外观体征、局部刺激性和体重变化;末次给药后3d及3周检测血液学、血液生化学指标及主要脏器系数和抗双链DNA抗体水平。结果 BCG-CpG-DNA急性毒性试验中,各组小鼠均健康存活,体重增加,无毒性反应。BCG-CpG-DNA28d长期毒性试验中,动物体重、行为活动无异常,给药部位无局部刺激性表现;BCG-CpG-DNA重复给药可提高小鼠免疫细胞的数量;末次给药后3d,各试验组脾脏系数均高于对照组,且差异有统计学意义(P<0.05),经过3周恢复期回复正常;各试验组血清中抗双链DNA水平与对照组比较,差异无统计学意义,均低于25U/ml的临界值。结论 BCG-CpG-DNA主要影响小鼠的免疫细胞和免疫器官,未见其他明显的急性毒性和长期毒性作用,表明BCG-CpG-DNA具有较好的安全性。     

BCG-CpG-DNA对重组HBsAg的免疫佐剂作用

目的研究BCG-CpG-DNA对重组HBsAg的免疫佐剂作用。方法以BCG-CpG-DNA与重组HBsAg混合免疫小鼠,以铝佐剂疫苗为对照,采用放射免疫法检测抗-HBs中和抗体水平,ELISA法分析抗体亚类,酶联免疫斑点试验(ELIS-POT)检测CD8+细胞毒T淋巴细胞(CTL)功能。结果BCG-CpG-DNA能提高抗-HBs中和抗体水平,促进抗原特异性IgG2a的产生,诱导Th1型免疫应答,与铝佐剂协同作用能部分逆转Th2反应。同时能增强抗原特异性CD8+T淋巴细胞的杀伤作用,实验组与对照组比较差异有显著意义。结论BCG-CpG-DNA对HBsAg有较好的免疫佐剂作用,有可能成为一种新型的免疫佐剂。     

斑马鱼模型评价BCG-CpG-DNA的安全性

目的用斑马鱼模型对BCG-CpG-DNA进行安全性评价。方法以斑马鱼胚胎为实验材料,将BCG-CpG-DNA设置4个浓度组(0.15、1.5、15、75 mg/L),暴露斑马鱼,以胚胎培养液暴露为空白对照组,以三甲基氯化锡(TMT)和全氟辛烷磺酸盐(PFOS)暴露为阳性对照组,胚胎期6 hp(f受精后6 h)脱膜,8 hpf进行暴露毒性实验,研究其对斑马鱼发育、遗传、免疫以及行为的毒性影响。每组做3个重复,试验重复3次。结果未观察到BCG-CpG-DNA各浓度组的斑马鱼胚胎明显的畸形和孵化死亡情况,其自主运动、触摸运动、行为检测、免疫强度检测与空白对照组相比,差异均无统计学意义(P>0.05)。TMT对照组暴露对斑马鱼生长、发育、免疫及其神经等均有不同程度的影响,导致心胞肿大,对光暗刺激反应敏感,相对荧光强度明显增强,嗜中性粒细胞数量增多,对炎症的敏感性增强,与空白对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 BCG-CpG-DNA暴露对斑马鱼生长、发育、免疫及其神经均无明显的急性毒性作用,在斑马鱼的胚胎暴露中具有较好的安全性。     

杨桃多糖的免疫活性研究

通过对小鼠的脏器/体重比、胸腺指数和脾细胞中的IL-2和IL-6含量测定以及足跖增厚法、小鼠鼠碳廓清实验,结果发现,各剂量组的脏器质量和脏器/体重比值、胸腺相对重量和胸腺指数与对照组相比均有显著性差异(p<0.05);杨桃多糖各剂量组的吞噬指数比对照组都有增加,中、高剂量组有明显差异;杨桃多糖中、高剂量组小鼠的IL-2和IL-6水平均显著高于对照组。说明杨桃多糖对小鼠单核-巨噬细胞的吞噬功能有明显的增强作用,对小鼠的细胞免疫功能有一定的增强作用,可以显著增强组成机体特异性免疫的细胞免疫功能,对机体的特异性体液免疫应答有增强作用。     

免疫传感器与高分子活性膜

免疫传感器是近十年发展起来的一种新型生物电化学传感器。本文综述了非标记免疫传感器与标记免疫传感器的原理及测定过程。高分子活性膜是生物电化学传感器的核心。本文就高分子活性膜的基质材料、成膜机理、膜的特性以及生物活性物质在膜表面的固定化等方面进行了讨论。     

口服与注射用转移因子的体内外免疫活性比较

口服和注射TF在促进人外周血T、B淋巴细胞的免疫活性上差异光显著意义，但二者形成的玫瑰花结率均明显高于对照组（P＜0．01）。实验小鼠口服或注射TF后．腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞比率明显增加，（P＜0．05）；体内T、B淋巴细胞与绵羊红细胞和致敏鸡红细胞形成的玫瑰花结率均明显高于对照组（P＜0.05）。口服和注射TF均能促进迟发型变态旦应的产生。两种剂型TF对小鼠的生长无任何影响。但若小鼠生长在低温环境下（9℃）．口服转移因子显示出良好的抗冷效应。     

穿破石抑菌活性初步研究

采用菌丝生长速率法测定了穿破石不同部位甲醇提取物对5种植物病原真菌的抑菌活性.结果表明:穿破石根提取物对梨锈病菌、稻瘟病菌、水稻纹枯病菌以及玉米炭疽病菌有很高的抑菌活性,质量浓度为10 g/L时,抑菌率分别为95.51%、99.39%、100.00%、86.11%;有效中浓度(EC50)分别为0.8031、0.9969、0.9812、0.9304 g/L.对柿角斑病菌的活性较低,质量浓度为10 g,L时,抑菌率为66.72%,EC50值为4.6539 g/L.茎叶提取物对上述5种病原菌的抑菌活性较低.采用固-液萃取法对穿破石抑菌活性成分进行了初步分离,结合活性跟踪,发现穿破石抑菌活性成分主要存在于乙酸乙酯萃取层中.     

重组人干扰素γ联合弓形虫STAg鼻内免疫小鼠的免疫保护作用

目的观察重组人干扰素γ(IFNγ)联合可溶性速殖子抗原(STAg)鼻内免疫小鼠诱导的黏膜和系统免疫应答及抗弓形虫感染作用。方法将BALB/c小鼠随机分为STAg组、STAg+IFNγ组和对照组,分别用20μgSTAg、20μgSTAg+1000UIFNγ和20μlPBS鼻内免疫2次,间隔14d。末次免疫后第10天,用RH株弓形虫速殖子灌胃攻击(4×104个/只),观察小鼠存活情况,并计算存活率,攻击后第43天处死全部小鼠,计数肝、脑组织内弓形虫速殖子虫荷,分离并计数肠上皮淋巴细胞(iIELs)、派伊尔氏结(PP)和脾淋巴细胞,ELISA法检测小鼠粪便弓形虫特异性sIgA和血清IgG水平。结果IFNγ联合STAg鼻内免疫能保护小鼠抵抗弓形虫攻击,小鼠存活率(93%)明显高于STAg组(60%)和对照组(47%);小鼠iIELs(1.81×105)、PP(3.21×107)和脾(3.01×107)淋巴细胞均显著增生,明显高于STAg组和对照组;粪便中sIgA水平(A492=0.435)显著高于对照组(A492=0.047),血清IgG水平(A492=0.233)显著高于STAg组(A492=0.193)和对照组(A492=0.115);肝、脑组织内弓形虫速殖子虫荷显著减少,分别比对照组减少80.90%和64.50%。结论IFNγ联合STAg鼻内免疫效果优于单独STAg免疫,IFNγ能协同STAg有效诱导黏膜和系统免疫应答,提高弓形虫攻击小鼠的存活率,降低肝、脑组织内虫荷。     

人乳头瘤病毒16型L1蛋白的纯化及免疫学活性

目的纯化人乳头瘤病毒16型(HPV16)L1蛋白,并分析其免疫学活性,为诊断试剂和疫苗的研制奠定基础。方法采用电洗脱的方法纯化目的蛋白,通过免疫双扩散和ELISA法检测其免疫反应性。将该蛋白免疫BALB/c小鼠,分析其免疫原性。结果纯化后的目的蛋白经凝胶灰度扫描显示,其纯度达到95%,免疫双扩散和ELISA结果显示,宫颈癌病人血清抗体效价明显高于健康人,表明该蛋白具有良好的抗原性,小鼠免疫力试验结果表明该蛋白具有较好的免疫原性。结论电洗脱法得到的目的蛋白纯度较高,且有较好的免疫学活性。     

牛心朴子生物活性的初步研究

测定了牛心朴子石油醚提取物、乙酸乙酯提取物、甲醇提取物、生物碱、非生物碱5部分杀虫、抑菌、除草活性。结果表明，供试样品中尤以生物碱活性最高，浓度为5％时，生物碱对粘虫3龄幼虫没有明显的触杀和胃毒活性，但有强烈的拒食活性；浓度为500mg／L时，生物碱对烟草赤星病菌、小麦根腐病菌、马铃薯干腐病菌及玉米大斑病菌等8种病菌抑制活性最低也达到了85．6％；浓度为1mg／L时，生物碱对反枝苋主茎及主根生长抑制率分别达到了84．2％和85．4％。     

腐植酸的活性探讨

腐植酸是有活性的有机质,其活性是连结大农业、大工业、大医药、大环境的纽带,抓住这个纽带就能更深入了解腐植酸的多功能,更好地利用它为低碳经济服务。探讨有活性的有机质形成,可以促使我们在开发腐植酸各种产品上注入新的思维,不断创新,开拓腐植酸发展的新局面。     

山蒟(Piper hancei Maxim)杀虫活性初步研究

[目的]研究山蒟的杀虫活性,以丰富植物源农药的来源.[方法]采用胃毒法测定山蒟对家蝇的胃毒活性,浸渍法测定山蒟对致倦库蚊和白纹伊蚊的活性.[结果]结果显示:山药的石油醚萃取物表现较强的杀虫活性,石油醚提取物1 g/L处理家蝇12、24 h后,校正死亡率分别为86.66％、90％,处理家蝇12、24、36 h后的LC50值分别为1.4000、0.5000、0.2000 g/L,接近于处理36h后鱼藤酮的LC50值(0.08 g/L).石油醚提取物处理致倦库蚊和白纹伊蚊12h后的LC50值分别为2.4127、10.5163 mg/L,活性分别高于对照药物鱼藤酮的3.1727、21.5100 mg/L.[结论]山蒟具有较好杀虫活性,经检索未见相关文献曾报道山药的杀虫活性.     

小桐子油粕提取物杀虫活性初步研究

采用盆栽喷雾接虫法、药膜法和点滴法对小桐子油粕粗提物的杀虫活性进行了初步研究。结果表明:小桐子石油醚浸膏EC和小桐子乙酸乙酯浸膏EC对小菜蛾3龄幼虫、豆蚜和甘蓝蚜虫均有一定的杀虫活性,其中小桐子乙酸乙酯浸膏EC对甘蓝蚜虫的72 h致死率达83.3%。     

西洋参皂甙对免疫抑制小鼠免疫功能的影响

目的探讨西洋参皂甙对免疫抑制小鼠免疫功能的影响。方法用不同浓度的西洋参皂甙[0.12、1.20和12 g/(kg.d)]灌胃小鼠,每天1次,连续灌胃21 d,第10～14天,经腹腔注射环磷酰胺0.1 g/(kg.d)。测定小鼠血中血小板(PLT)、白细胞(WBC)、红细胞(RBC)的数量和血红蛋白(Hb)含量以及免疫器官重量;鸡红细胞吞噬试验检测小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能,并进行二硝基氟苯(2,4-D)皮肤试验(DTH);体外测定小鼠腹腔巨噬细胞和脾淋巴细胞的增殖活性、腹腔巨噬细胞NO含量以及脾淋巴细胞转化功能。结果西洋参皂甙可使免疫抑制小鼠血中的PLT、WBC、RBC和Hb的降低恢复良好,并恢复小鼠免疫器官重量,2,4-D所致迟发型超敏反应减轻,促进小鼠腹腔巨噬细胞代谢,增强巨噬细胞吞噬功能,诱导巨噬细胞产生NO,提高脾淋巴细胞转化率及淋转指数。结论西洋参皂甙能提高免疫抑制小鼠巨噬细胞吞噬功能,增强小鼠细胞免疫与体液免疫功能。