不同真菌纤维素酶固体发酵条件的比较研究

在稻草和麸皮固体培养基上对木霉、康宁木霉、绿色木霉、黑曲霉、宇佐美曲霉纤维素酶产酶条件进行了研究,分析了培养基组成、含水量、氮源、培养时间对酶活性的影响,并对酶的pH稳定性及酶促温度进行了初步研究。     

绿色木霉固态发酵工艺及诱导条件研究

探讨绿色木霉固态发酵产生纤维素酶的诱导促进条件。通过初始培养基、表面活性剂、诱导物、缓冲pH体系等对绿色木霉固态发酵产酶的诱导情况进行分析,获得产酶时间曲线和最大产酶量。不同条件下绿色木霉产纤维素酶活力存在显著差异(P0.05),麸皮∶秸秆粉=1.5∶1(质量比),培养基固液比1∶2.5(g/m L),硫酸铵按培养基干基的2%加入,初始pH=6为最佳条件,采用缓冲pH体系对产酶有促进作用,添加表面活性剂和适当种类的诱导物可以提高产酶量,而过高浓度的诱导物则降低产酶量。该研究为绿色木霉对秸秆的转化应用提供了理论依据。     

里氏木霉产纤维素酶的条件优化及酶学性质研究

本文对里氏木霉产纤维素酶发酵培养条件及对其所产纤维素酶的酶学性质进行初步研究。结果表明,里氏木霉发酵产酶的最佳培养基为:麦麸1.8%、硝酸钠1.3%、碳酸钙0.3%、氯化钠0.2%、磷酸二氢钾0.3%;里氏木霉所产纤维素酶的最适反应条件为:pH 4.0、50℃,金属离子Fe2+、Co2+、Mn2+、Ca2+对酶活有促进作用,而Fe3+、Ag+对酶有抑制作用。经培养基优化后,发酵液上清中的最终酶活为116.64U/mL,是优化前的3.5倍。     

多菌混合发酵产纤维素酶及生物法预处理秸秆的研究

对实验室分离筛选的3株绿色木霉和6株枯草芽孢杆菌的生长及产酶情况进行了研究,综合确定绿色木霉绿2与芽孢杆菌S3为混合菌中产纤维素酶酶活最高的组合。在此基础上,采用解脂假丝酵母处理高粱秸秆。先将解脂假丝酵母的种子培养液按照3%的接种量接种到发酵产酶培养基中,隔24 h将绿色木霉绿2的孢子悬浮液按照2.67%的接种量接种到发酵产酶培养基中,再隔12 h将芽孢杆菌S3的种子培养液按照5.33%的接种量接种到发酵产酶培养基中,测定出的滤纸酶活（FPA）最高,为389.89 U/mL,比优化前提高了14.30%。     

响应面优化木霉TP-24固态发酵生产β-1,3-葡聚糖酶产酶条件

研究采用响应面法(RSM)对木霉TP-24固态发酵生产β-1,3-葡聚糖酶的培养基组成(碳源酵母粉、氮源NH4NO3和料水比)进行了优化。结果表明,采用以麸皮为基质、添加1.91%酵母粉、1.99%NH4NO3和15.79mL水的培养基中,接种木霉TP-24菌株于30℃发酵4d,β-1,3-葡聚糖酶活力可达到594.37U/g·ssc,比对照产酶水平提高了273.55%。     

康氏木霉降解麸皮的研究

对实验室分离筛选的康氏木霉进行研究.研究和分析了滤纸酶活（FPA）测定法的最优酶解条件为：在60℃、pH4.5下酶解40min,酶与底物之比为1：2.康氏木霉的最优产酶条件为28℃下,培养4d,培养基pH为6.5,含水量为150%,接种量为5%.用同时去蛋白和淀粉的麸皮作为作用底物,麸皮的转化率可高达28.5%.     

响应面法优化康氏木霉产β-葡聚糖酶的液体发酵条件

确定康氏木霉(Trichoderma koningii)产β-葡聚糖酶的发酵培养条件。利用响应面优化法,通过两步实验设计,即部分因子实验和中心组合实验设计,对康氏木霉液体发酵产β-葡聚糖酶的最佳培养条件进行了优化研究。得到最优培养条件:发酵培养温度29·8℃,摇床转速为200r/min,发酵培养基起始pH为3·43;250mL三角瓶中装液量30mL;接种量5%(1·5mL/瓶),培养时间为156h。在最优培养条件下康氏木霉产β-葡聚糖酶活力达到36·9U/mL。实验结果表明,康氏木霉在液体发酵条件下产β-葡聚糖酶,发酵液起始pH和培养温度对康氏木霉产β-葡聚糖酶活力影响最显著。     

木霉10号应用于食醋生产培养条件的试验

已有报导,木霉应用于食醋生产可提高淀粉利用率和出品率。我们在陕西省微生物所刘涛工程师的协助下,以该所新菌株2559—10<简称10号>与木霉9023进行了优选试验,同时根据食品卫生的要求对木霉10号一、二代培养基的组成、三代木霉、黑曲霉共生种曲培养中接种量的比值等培养条件进行了选优试验,应用于大生产效果显著,现就部分试验简报如下: 一、种曲培养方法1.菌株来源黑曲霉3324:西安大庆酿造厂;木霉2539—10:陕西微生物研究所;木霉9023;陕西微生物研究所. 2.试管斜面培养黑曲霉用米曲汁培养基,木霉均用土豆琼脂培养基(土豆20%,葡葡糖1%琼脂2.5%)做保藏菌株培养基,以碱麦草粉、麸皮培养基做一代生产     

聚乙二醇介导木霉的原生质体转化

在研究绿色木霉菌(Tdchoderma viride)原生质体形成和再生基础上,初步研究了木霉的转化条件.实验表明,木霉原生质体形成的合适条件为:pH6.98磷酸盐缓冲液中加入8mg/mL溶壁酶,培养24 h的菌丝,在40 r/min荡条件下30℃酶解4 h,原生质体产量为4.70×107个/mg.原生质体在0.3mol/L,肌醇和0.3mol/L氯化钾的CM培养基上再生率为14.5%.利用聚乙二醇(PEG)介导将带有潮霉素抗性标记的激发子基因转化到绿色木霉中,使其成为价值更大的生防菌.对获得的转化子进行了初步的鉴定,结果表明,外源基因已转入受体菌绿色木霉中.     

康氏木霉ZJ4摇瓶发酵产纤维素酶的研究

本文以稻草为主要碳源，对几种真菌产纤维素酶的能力进行了比较研究，发现康氏木霉ZJ4产酶能力最强。研究了康氏木霉ZJ4发酵产纤维素酶的发酵条件，结果表明：康氏木霉ZJ4发酵产纤维素酶的培养基组成为（g／L）：稻草40，麦麸20，大麦粉16．5，（NH4）2SO410，装液量30mL，起始pH5．0。产酶条件为：培养温度28℃，转速200r／min，当培养时间为144h，纤维素酶活达到最高值。     

里氏木霉与黑曲霉混合发酵产纤维素酶的条件优化

为提高纤维素酶酶解秸秆产糖效果,以碱性双氧水处理过的玉米秸秆为发酵基质,进行里氏木霉与黑曲霉混合发酵的研究。通过单因素试验确定黑曲霉延迟接种时间、里氏木霉与黑曲霉接种比例 、发酵时间和固液比4个因素的最优水平。在此基础上,采用Box-Behnken响应面设计对混合发酵产酶条件进行优化,获得最佳产酶条件：黑曲霉延迟接种时间 36h,里氏木霉与黑曲霉接种比例 5:1、发酵时间7d、固液比2:50(m/V)、吐温-80体积分数0.4%、pH 5.0和装液量50mL/250mL。此时,滤纸酶力(FPA)可达1.224 IU/mL,β-葡萄糖苷酶活力(β-GA)可达0.315 IU/mL。采用高效液相色谱法,对最佳条件下的纤维素酶酶解秸秆的水解液进行检测。结果表明,两菌株混合发酵较单菌株发酵的纤维素酶系更加完整,且降解木质纤维素类原料产可发酵性糖的能力增强。     

绿色木霉与黑曲霉混合发酵产纤维素酶的研究

为提高绿色木霉与黑曲霉混合发酵产纤维素酶的能力,进行了黑曲霉接种时间和混合发酵时间的优化。研究了绿色木霉与黑曲霉4株菌单独发酵及混合发酵产纤维素酶酶活的特点,调整黑曲霉NH11-1的接种时间与绿色木霉NM01进行混合发酵来寻找产酶能力最高的时间点。结果表明,黑曲霉NH11-1推迟48 h接种的混合发酵组产酶效果最佳。最佳混合发酵条件为30 ℃、200 r/min恒温振荡培养5 d,滤纸酶活力（FPA）达到242.80 U/mL,是出发菌黑曲霉NH11-1的2.66倍;β-葡萄糖苷酶活力（β-GA）达到297.35 U/mL,是出发菌绿色木霉NM01的1.94倍;β-GA与FPA的比值为1.22,符合纤维素酶水解天然纤维素的最佳比值范围（0.12～1.50）。     

固态发酵油菜籽壳生产饲用纤维素酶研究

为了开发利用油菜籽壳这一油脂工业生产副产品,采用固态发酵方式培养木霉T5,研究以油菜籽壳为主要原料生产饲用纤维素酶最佳工艺条件。结果表明,木霉T5在油菜籽壳／啤酒糟／麸皮=5／2／3,NH4NO3 2％,CaCl2 0．1％,Tween 80 0．1％基质上;加水量为120％,接种量为10％,置30℃下培养60 hr,产酶量可达80．116IU／g,具有较好应用前景。     

黑曲霉液体深层发酵产纤维二糖酶的研究

纤维二糖酶（cellobiase）是纤维素酶系中的重要组分之一,目前由里氏木霉（Trichoderma reesei）生产的纤维素酶制剂中纤维二糖酶的活力明显偏低,限制了纤维素的糖化效率。本文采用一个黑曲霉菌株（Aspergillus niger ZU-04）,在液态发酵条件下生产纤维二糖酶,对主要的发酵工艺参数进行了研究,结果表明,培养基中添加1.0%的麸皮对纤维二糖酶的形成有明显的促进作用;葡萄糖、玉米浆粉的适宜浓度分别为2.0%、0.3%;变温培养缩短了产酶周期,培养4d,酶活力达到最高,为6.23IU/mL。采用黑曲霉纤维二糖酶与里氏木霉纤维素酶协同水解酸预处理后的玉米芯,当纤维素酶用量为20IU/g底物时,纤维二糖酶活力和滤纸酶活力比例为0.43,2d酶解得率达到91.1%。     

一株锡林郭勒盟木霉的鉴定及其产纤维素酶研究

该研究以分离自锡林郭勒地区白桦林的一株木霉菌株XLGL201709100为研究对象,采用分子生物学技术对其进行鉴定,以 菌丝生长能力和生物量为评价指标,对其最适生长固体培养基进行筛选,采用滤纸酶活（FPA）法对其产纤维素酶能力进行研究。 结 果表明,木霉菌株XLGL201709100被鉴定为哈茨木霉（Trichoderma harzianum）,其最适生长的固体培养基为木生菌葡萄糖蛋白胨酵 母膏（GPY）培养基,且在马玲薯葡萄糖肉汤（PDB）培养基中发酵3 d时,FPA为0.025 U/mL;以白桦木木屑为固体产酶基质发酵7 d时, FPA为1.043 U/g。     

绿色木霉JD-1固态发酵玉米芯产纤维素酶条件优化

以玉米芯与麸皮为主要原料,对影响绿色木霉（Trichoderma viride）JD-1固态发酵的因素如玉米芯与麸皮的比例、氮源浓度、发酵温度、时间、料水比等进行研究。在单因素试验的基础上,采取正交试验设计进行优化。结果表明,最佳固体发酵条件为即玉米芯与麸皮质量比为7∶3,培养温度30 ℃,料液比1∶2.0（g∶mL）,培养时间96 h,接种量为10%。在此优化条件下,羧甲基纤维素酶活力达8.95 IU/g,滤纸酶酶活力达2.00 IU/g。     

固态发酵生产高活力纤维二糖酶

在固态发酵条件下,对７个纤维二糖酶生产菌株进行了筛选,发现ＡｓｐｅｒｇｉｌｕｓｎｉｇｅｒＬＯＲＲＥ０１２为纤维二糖酶高产菌株。研究了培养时间、温度、培养基含水量及初始ｐＨ等因子对该菌形成纤维二糖酶的影响。当培养基采用自然ｐＨ（约６．０）、含水量７０％,接种后在３０℃下先培养２ｄ,再在２５℃下培养２ｄ,每克干酶曲所含的纤维二糖酶活力可达到４３０．５６ＩＵ。由此获得的纤维二糖酶曲与Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｒｅｓｅｉ产生的纤维素酶曲在糖化纸浆过程中有明显的协同作用,当两者以１∶１０混合使用时（纤维二糖酶与滤纸酶活力之比约为０．４４）,可有效地消除水解产物中纤维二糖的累积,使纤维纸浆的酶水解得率高达９０．７％。     

The effect of cellulase preparations on the chemical changes during the ensilage of grass in laboratory silos

Three experiments are described. In the first, cellulase prepared from Aspergillus niger was added at the rate of 4 g/kg to herbage treated with a variety of silage additives, formic acid, caproic acid, formalin, sodium metabisulphite and zinc bacitracin. The lowest cellulose contents and highest residual water soluble carbohydrate contents were found in the silages treated with formic acid and cellulase. Formic acid was included as a treatment in subsequent experiments. In the second experiment, the enzyme was added to herbage at two levels, 1.0 g/kg fresh grass and 4.0 g/kg fresh grass. Cellulose contents of the silages were significantly lower after 61 days at the higher rate of application of the enzyme. In the third experiment, two enzymes produced from Aspergillus niger were compared with two enzymes derived from Trichoderma viride. Under the conditions of the experiment the cellulase enzymes produced from T. viride were more active.     

Enzyme, bacterial inoculant, and formic acid effects on silage composition of orchardgrass and alfalfa

We evaluated the effects of cellulase (from Trichoderma longibrachiatum) application rates on neutral detergent fiber (NDF) concentration and fermentation products of orchardgrass (Dactylis glomerata L.) and alfalfa (Medicago sativa L.) silages harvested with decreasing dry matter (DM) digestibility. Additionally, the impacts of inoculant (Lactobacillus plantarum and Pediococcus cerevisiae), pectinase (from Aspergillus niger), or formic acid on silage composition were studied. Forages wilted to a DM content of about 320 g/kg were ensiled in laboratory silos for 60 d. Cellulase, combined with inoculant, was applied at 2, 10, and 20 ml/kg of herbage (at least 2500 IU/ml). Cellulase at 10 ml/kg was also applied alone or in combination with pectinase and inoculant or formic acid. The NDF concentration of orchardgrass silage decreased with increasing cellulase up to 20 ml/kg, at which NDF content was decreased by 30%. The NDF concentration of alfalfa silage decreased with increasing cellulase application up to 10 ml/kg, at which NDF content was decreased by 13%. Immature plants were more responsive to cellulase treatment than mature plants. Cellulase at 2 ml/kg combined with inoculant improved fermentation characteristics of the silages but generally, there was no effect on silage fermentation by higher cellulase applications, resulting in an accumulation of sugar. The improved fermentation of orchardgrass treated with cellulase and inoculant was mostly related to the effect of inoculant, whereas cellulase alone improved fermentation characteristics of alfalfa silage and this effect was enhanced by addition of inoculant. Decreased NDF and increased sugar concentrations did not improve the in vitro DM digestibility of cellulase-treated silages.     

堆积糖化对玉米秸秆同步糖化固态发酵生产乙醇的影响

该文以玉米秸秆为原料,经蒸汽爆破预处理后接入Trichoderma reesei Rut C-40培养纤维素酶曲,将纤维素酶曲与汽爆秸秆混合堆积糖化后,接入酵母菌进行同步糖化固态发酵生产乙醇,通过Box-Behnken设计实验得到最适酶解工艺条件:酶曲/汽爆秸秆为1.2,温度46℃,pH值4.4,堆积糖化48h后酶解率可达到32.50%。将酶解糖化48h后的底物接入酵母菌,发酵96h后乙醇产率可达0.15g/g底物,较直接同步糖化发酵乙醇产率提高了9.3%。