光度滴定法定量Cosequin~ DS咀嚼片中硫酸软骨素钠的方法验证与发展

本文对光度滴定法定量原料及CosequinDS咀嚼片中的硫酸软骨素钠进行了方法验证与发展。光度滴定条件是:0.1%(w/v)氯化十六烷基吡啶为滴定剂,光度指示检测波长420nm。在0.6～1.4mg/mL浓度范围内,硫酸软骨素钠的标准曲线呈线性(r≥0.99)。将咀嚼片粉碎成细粉并用水提取后,经0.45μm膜滤器过滤。回收率97%～103%。光度滴定法具有良好的专属性、准确度、精密度且线性卓越,非常适用于定量检测原料及CosequinDS咀嚼片中的硫酸软骨素钠。2001年由ElsevierScienceB.V.公布。     

光度滴定法定量Cosequin DS咀嚼片中硫酸软骨素钠的方法验证与发展

本文对光度滴定法定量原料及CosequinDS咀嚼片中的硫酸软骨素钠进行了方法验证与发展。光度滴定条件是：0.1%（w/v）氯化十六烷基吡啶为滴定剂,光度指示检测波长420nm。在0.6～1.4mg/mL浓度范围内,硫酸软骨素钠的标准曲线呈线性（r≥0.99）。将咀嚼片粉碎成细粉并用水提取后,经0.45μm膜滤器过滤。回收率97%～103%。光度滴定法具有良好的专属性、准确度、精密度且线性卓越,非常适用于定量检测原料及CosequinDS咀嚼片中的硫酸软骨素钠。2001年由ElsevierScienceB.V.公布。     

硫酸软骨素钠质量安全标准及关键控制点研究进展

硫酸软骨素钠是从动物软骨组织中提取的天然酸性黏多糖,主要作为一种抗骨关节炎药品和保健食品在世界范围内被广泛应用。由于硫酸软骨素钠的结构、物理化学特征、生理活性会因动物种类、组织、提取工艺的不同而存在差异,使得硫酸软骨素钠的质量安全控制存在难度。国内外针对硫酸软骨素钠都制定有相应标准,本文以中国、美国、日本、欧洲药典收载的硫酸软骨素钠原料标准为依据,进行分析、归纳和总结,综述了硫酸软骨素钠质量安全标准化发展现状和趋势。结合最新的研究成果,进一步提炼影响硫酸软骨素钠质量安全的关键控制点,对来源、潜在外源污染物、掺假等因素进行深入分析与探讨,有助于监管部门、生产企业准确把握影响硫酸软骨素钠质量安全的风险源。本文也明确了未来硫酸软骨素钠质量安全标准化的工作需求,为硫酸软骨素钠质量安全标准体系的不断完善提供参考。     

不同硫酸软骨素对口腔癌KB细胞的抑制作用

以鲟鱼软骨和鸡软骨为原料,采用碱提-酶解-醇沉的工艺流程提取硫酸软骨素后,利用Sephadex G-50凝胶色谱及Sephacryl S-300 HR凝胶色谱对硫酸软骨素进行纯化,并通过高效凝胶渗透色谱法进行分子质量测定与纯度鉴定。采用MTT法检测硫酸软骨素对口腔癌KB细胞增殖活性的影响,并采用流式细胞术检测口腔癌KB细胞凋亡情况。研究结果表明鲟鱼及鸡软骨硫酸软骨素粗制品得率分别为23.80%和25.23%。经高效液相凝胶渗透色谱分析可得纯化的鲟鱼及鸡软骨硫酸软骨素均为高纯度多糖,且鲟鱼软骨硫酸软骨素的平均分子量比鸡软骨硫酸软骨素的大。以体外抗肿瘤的方法研究硫酸软骨素粗提物和纯化样品对口腔癌KB细胞的抑制作用,结果所得鲟鱼软骨硫酸软骨素粗制品和纯化样品的IC50值分别为80.18μg/m L和58.78μg/m L;鸡软骨硫酸软骨素粗制品和纯化样品的IC50值分别为68.55μg/m L和53.71μg/m L。流式细胞术表明硫酸软骨素能够诱导KB细胞发生凋亡,细胞凋亡率与药物的浓度呈剂量依赖关系,且鸡软骨硫酸软骨素诱导KB细胞凋亡率高于鲟鱼软骨硫酸软骨素。     

硫酸软骨素中掺假动物成分的检测研究

研究建立硫酸软骨素中牛、羊、猪、鸡、鸭、鹅等动物源性成分的PCR检测方法,该方法特异、灵敏,检测限为0.1%.运用建立的方法对市场上的38个不同动物成分来源的硫酸软骨素样品进行检测,在27个硫酸软骨素样品中检出其它动物成分.该检测方法能够用于硫酸软骨素中牛、羊、猪、鸡、鸭和鹅源性成分的原料成分鉴别.     

响应曲面法优化硫酸软骨素提取工艺条件

采用鸡胸软骨为原料,以硫酸软骨素得率为指标,对超声波辅助碱-酶法提取硫酸软骨素的工艺条件进行研究。首先,通过单因素实验确定了各因素的范围,再应用Box-Behnken中心组合实验设计建立二次多项数学模型,进行响应面分析。结果表明,超声波辅助碱-酶法提取鸡软骨中硫酸软骨素的最佳工艺条件为:碱浓度4%,酶添加量1.4g/L,料液比1000∶5923(g/mL),数据结果显著,硫酸软骨素得率为23.94%,通过紫外光谱检测确定提取物质为硫酸软骨素。     

硫酸软骨素A钠注射液细菌内毒素检查方法研究

目的建立检查硫酸软骨素A钠注射液细菌内毒素的方法。方法采用中国药典2005年版附录细菌内毒素检查法。结果硫酸软骨素A钠注射液浓度为0.15 mg.mL-1,用灵敏度为0.25 EU.mL-1的鲎试剂检测细菌内毒素,无干扰因素的影响。结论硫酸软骨素A钠注射液可用鲎试剂检查细菌内毒素。     

人工养殖鲟鱼头中硫酸软骨素的提取工艺

对人工养殖鲟鱼头中硫酸软骨素采用稀碱法进行提取工艺的研究,以硫酸软骨素产率为考察时象,对影响产率的因素进行了单因素试验,并在此基础上通过正交试验,确定硫酸软骨素提取的最佳工艺.试验结果表明:提取硫酸软骨素的最佳工艺条件为NaOH浓度:0.06kg/L、固液比:1/5(g/mL)、浸提温度:25℃、浸提时间:20h.在此条件下硫酸软骨素的提取率为48.9%,其蛋白质和脂肪含量分别为0.980%和0.130%.     

鲟鱼软骨硫酸软骨素降解产物的结构分析

以鲟鱼软骨为原料,采取碱提-酶解-醇沉的方式提取硫酸软骨素后,采用普通粉碎、超微粉碎联合辐照技术分别对硫酸软骨素样品进行降解后,再利用离子色谱法、紫外-可见光光谱扫描法、红外吸收光谱法、核磁共振波谱法研究硫酸软骨素的化学结构。单糖分析表明,粗样中的鼠李糖经超微粉碎加辐照共处理后含量从56.16%增加到59.31%,粗样中的葡萄糖醛酸经超微粉碎加辐照共处理后含量由33.69%降低到31.84%;而纯化样品中葡萄糖醛酸含88.77%。紫外光谱分析表明硫酸软骨素经超微粉碎与辐照的共处理方式使硫酸软骨素的分子结构发生断裂即糖苷键的分裂及产生C=O基团。红外光谱结果表明普通粉碎及经超微和辐照降解共处理的硫酸软骨素均呈现4-硫酸软骨素和6-硫酸软骨素的典型特征。核磁共振分析得出经超微粉碎和辐照的处理使硫酸软骨素上的乙酰半乳糖胺和葡萄糖质子信号增强,且推测鲟鱼硫酸软骨素包含GlcA (β1→3) GalNAc-4SO3和GlcA (β1→3) GalNAc-6SO3重复单元结构。     

鮟鱇鱼硫酸软骨素的提取及性质研究

建立了从鮟鱇鱼骨中提取硫酸软骨素的方法,并对提取工艺进行了优化.样品用20%氯化钠碱溶液浸提,pH7.8条件除去中性蛋白,pH2.5除去酸性蛋白,然后用70%(v/v)乙醇沉淀获得鮟鱇鱼硫酸软骨素.本方法硫酸软骨素的得率为3.47%,所得鮟鱇鱼硫酸软骨素产品为白色粉末,纯度为90.94%.对鮟鱇鱼硫酸软骨素的理化性质研究表明,其水分含量为8.88%,氮含量为2.86%,氨基己糖含量为30.12%,葡萄糖醛酸含量为31.40%.从鮟鱇鱼骨中提取出的硫酸软骨素产品电泳实验显示为单点,表明其为单一糖胺聚糖,红外光谱吸收特征显示其为硫酸软骨素C.     

响应面法优化猪硫酸软骨素的提取工艺

以猪软骨为原料,采用复合酶法提取硫酸软骨素,为了优化硫酸软骨素的提取工艺,采Plackett-Burma设计和响应面分析法,研究不同的提取条件对猪硫酸软骨素提取率的影响,并建立了提取条件与提取率之间的数学模型,确定适宜的硫酸软骨素提取条件,并初步分析了其结构。结果表明:(1)根据Plackett-Burman设计,温度对硫酸软骨素的提取率影响最为显著,其次为酶加量、pH;(2)通过响应面交互作用分析与优化,确定猪硫酸软骨素酶解的适宜条件为温度57.00℃,酶加量为1.00%,pH为8.50,此时硫酸软骨素的提取率提高至58.12%,纯度为92.32%。     

胃蛋白酶提取硫酸软骨素工艺优化

以牛喉管为原料,采用超声波辅助碱-双酶(木瓜蛋白酶、胃蛋白酶)法提取硫酸软骨素。通过单因素试验、正交试验优化胃蛋白酶酶解硫酸软骨素的工艺。结果显示:当pH值为5.9、胃蛋白酶添加量为1.4:1000(m/V)、酶解温度40℃、酶解时间为100min时,产品最高得率可达25.43%,纯度达到87.96%。     

秘鲁巨鱿软骨硫酸软骨素理化性质研究

探索一种新的硫酸软骨素来源。以秘鲁巨鱿软骨为原料,经过酶解、超滤浓缩和乙醇沉淀的方法获得硫酸软骨素。秘鲁巨鱿硫酸软骨素得率为3.2%,比旋度为-25.2°,黏均分子量为157 000,硫酸软骨素E型二糖占总二糖比例的17%。秘鲁巨鱿软骨可以作为一种硫酸软骨素新原料。     

分光光度法和高效液相色谱法测定啤酒中残留直链烷基苯磺酸钠含量

目的建立分光光度法和高效液相色谱法测定啤酒中残留直链烷基苯磺酸钠的分析方法。方法确定实验过程主要参数。制作吸光度浓度工作曲线,定量样品检测结果。采用液液萃取法提取样品中的直链烷基苯磺酸钠,在最佳色谱条件下,制作了阴离子表面活性剂(以十二烷基苯磺酸钠计)标准曲线,采用峰高外标法定量样品检测结果。结果通过实验验证亚甲蓝活性物质(methylene-blue active substances,MBAS)的特征吸收波长为652 nm,表观摩尔吸光系数ε=1.93×10~6 L/(mol·cm),检出限为4.04×10~(-3)mg/L,检测方法回收率73.4%～104.5%,相对标准偏差3.04%,线性范围为4.04×10~(-3)～2.0 mg/L。在确定的最佳实验条件下检测了6份啤酒样品,其中直链烷基苯磺酸钠残留量在0.024～0.036 mg/L之间。高效液相色谱法的线性范围是2.0～200 mg/L,检出限为2.05×10~(-3) mg/L,回收率为78.6%～98.5%,相对标准偏差≤8.9%。在确定的最佳色谱条件下检测了6个样品,测得啤酒中直链烷基苯磺酸钠的残留量在0.014～0.022 mg/L之间。结论液液萃取高效液相色谱法检测结果的准确度略高于分光光度法,但不宜在低浓度(2 mg/L)下作标准曲线。对啤酒中残留直链烷基苯磺酸钠的直接快速检测宜选取分光光度法,而准确检测则优先选用液液萃取高效液相色谱法。     

鸡胸软骨糖/肽水解物的结构表征及其抗炎活性

本研究从鸡胸软骨水解物中分离得到胶原蛋白肽和硫酸软骨素并对其进行了结构表征和抗炎活性研究。胶原蛋白肽和硫酸软骨素得率分别为68.32%和18.82%(以干重计)。氨基酸分析表明胶原蛋白肽中甘氨酸含量最高,达14.05 mg/g,其次为谷氨酸(9.09mg/g)和脯氨酸(7.44 mg/g);紫外光谱分析与圆二色性结果显示所提取样品符合胶原蛋白肽的典型特征;通过高效液相色谱分析发现92.38%的胶原蛋白肽分子量小于1000u。傅里叶红外光谱、琼脂糖凝胶电泳、二糖组成分析结果表明提取的硫酸软骨素主要由硫酸软骨素A组成,相对纯度为91.87%。通过建立关节炎大鼠模型并检测糖/肽水解物对炎症因子TNF-α、IL-1β、PGE-2水平影响,与模型组相比(TNF-α39.90 pg/mL、IL-1β22.38 pg/mL、PGE-2 89.41 pg/mL),灌胃软骨水解物、胶原蛋白肽和硫酸软骨素能显著降低关节炎大鼠TNF-α、IL-1β、PGE-2水平(p0.05)。本实验结果表明,使用软骨水解物、胶原蛋白肽和硫酸软骨素能够抑制炎症因子TNF-α、IL-1β、PGE-2水平,减轻关节炎大鼠炎症反应。     

鸡软骨中硫酸软骨素的分离纯化

以鸡软骨为原料,对酶法提取硫酸软骨素进行纯化工艺的研究,采用阴离子交换树脂和凝胶层析法对提取的硫酸软骨素粗品进行纯化。结果表明:D218型阴离子交换树脂纯化硫酸软骨素最佳工艺条件为,吸附液用量与树脂体积比为1∶1;吸附流速为1.0m L/min;吸附时间为60 min;洗脱剂Na Cl溶液的浓度为3.0mol/L;洗脱剂用量与树脂体积比为5∶1,最佳解析时间为75 min,硫酸软骨素纯度为72.03%。通过葡聚糖凝胶G-75纯化后得到的硫酸软骨素的纯度为99.30%,较第一次纯化提高了27.27%。通过高效液相色谱法对纯化后的物质进行检测,进一步证明从鸡软骨中提取的物质为CS。     

罗非鱼头中硫酸软骨素的提取工艺研究

利用稀碱法对广西罗非鱼头中的硫酸软骨素进行提取工艺的研究,通过比较硫酸咔唑比色法和高效液相色谱法的分析结果,确定高效液相色谱法为硫酸软骨素的检测方法,以硫酸软骨素的得率为考察对象,对影响硫酸软骨素产品粗提率的因素进行单因素试验,并通过正交试验确定罗非鱼头中硫酸软骨素的最佳提取工艺。试验结果表明:提取硫酸软骨素的最佳工艺条件为NaOH浓度1%,料液比1∶5(g/ml),提取温度40℃,提取时间20h。在此条件下硫酸软骨素粗提率为1.67±0.15%。     

离子色谱法测定原料乳中蛋白质含量

目的建立测定原料乳中蛋白质的离子色谱法。方法用15%三氯乙酸沉淀原料乳中蛋白并抽滤得滤液,用硫酸—双氧水体系分别消解原料乳及滤液,用20mmol/L的甲烷磺酸作淋洗液,IonpacCS12A色谱柱,DS-6电导检测器测定原料乳及滤液中的NH4+-N含量,两者之差乘以转换系数即为蛋白质含量。结果蛋白质(以NH4+-N计)在0.2～10mg/L范围内线性良好,该方法的定量限为0.038g/100g,加标回收率为90.0%～105.0%,相对标准偏差(RSD)为1.06%～5.38%。结论本法简便、快速、准确,灵敏度及精密度高,适用于原料乳中蛋白质含量的测定。     

超声波辅助法提取硫酸软骨素的工艺研究

以猪喉管为原料提取硫酸软骨素,使用超声波辅助手段进行碱处理,浸出液再用木瓜蛋白酶进一步去除蛋白质。结果表明：最佳工艺条件为超声波处理时间139min、超声功率491W、木瓜蛋白酶酶解pH6.8、酶加入量1.3:1000(mg/mL)、酶解温度45℃、酶解时间1h,该工艺制备得到硫酸软骨素为白色粉末得率达23.15%,澄清度0.038,蛋白质含量2.48%,氨基己糖含量30.52%,硫酸软骨素纯度86.06%,水分6.32%,pH6.7,各项指标完全符合国家相关标准要求。     

牛初乳中sIgA双抗夹心ELISA检测方法的建立

为定量检测牛初乳中sIgA,建立双抗夹心ELISA方法。以牛初乳中的sIgA为抗原,免疫新西兰白兔,制得抗血清,经纯化后作为包被抗体;利用简易过碘酸钠法对兔抗牛sIgA标记辣根过氧化物酶(HRP),制得酶标抗体;通过方阵滴定法确定ELISA最佳工作条件;进行特异性、重复性、稳定性实验并且检测牛初乳粉样本中的sIgA含量。结果:成功建立了一种定量检测牛初乳中sIgA的双抗夹心ELISA方法。该方法线性范围:15.625～1 000μg/L;最低检测限(LOD)为15.625μg/L;精密度为:批内CV=4.8%;批间CV=6.5%。