抗幽门螺杆菌卵黄抗体的制备及其效价的评定

本论文研究了抗幽门螺杆菌蛋黄抗体(IgY—HP)的制备方法。以HP超声粉碎上清和HP尿素酶混合抗原物免疫鸡蛋，从蛋黄中提取纯化得到了很高纯度的IgY—HP。ELISA实验表明，IgY—HP的抗HP效价和一般IgY相比提高了32倍。其可以应用于食品保健或各种HP相关胃病的抗菌免疫治疗中。     

市售鸡蛋蛋白质图谱分析与真伪调查

目的:分析市售鸡蛋的蛋白图谱,找出共性,建立鸡蛋稳定的蛋白质模式图谱,作为真假鸡蛋鉴别的检测方法。方法:对鸡蛋蛋黄的蛋白质进行等电聚焦(pH4～7)、SDS-PAGE电泳,银染后扫描,对获得的双向图谱用软件进行分析。结果:根据18个市售鸡蛋与真鸡蛋的蛋黄蛋白质图谱对比,获得三个共有的高丰度点群(共17个蛋白质点),分子量分别为97.2～66.4、66.4～44.3、44.3～29.0kDa,可作为鉴别真假鸡蛋的蛋白质模式图谱。市售鸡蛋蛋黄的蛋白质图谱与真鸡蛋相似,没有发现异样情况,没有在市场上发现假鸡蛋。结论:初步建立了鉴别真假鸡蛋的蛋白质组学方法,所建立的检测方法具有高度的重复性和准确性。     

酸奶双菌发酵过程对不同来源IgG的影响

研究了酸奶嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌双菌混合发酵过程对牛初乳IgG，牛血IgG，猪血IgG和鸡蛋黄IgY的影响。聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)证实，常规的双茵发酵不会致使上述4种IgG分子降解，分别采用琼脂单向免疫扩散法(RID)和酶联免疫吸附法(ELISA)对牛初乳、牛血IgG及蛋黄IgY组分作定量分析，发现这些成分保持了原有免疫反应活性。虽然添加不同IgG基料后均可制备含有活性IgG的凝固型酸奶，但显著改变双茵发酵过程中乳源蛋白质的降解模式，添加牛血IgG，猪血IgG或者鸡蛋类IgY基料后，αs-酪蛋白和β-酪蛋白相应为发生降解的主要乳源蛋白。     

鸡卵黄免疫球蛋白的糖基化及其构效关系研究进展

鸡卵黄免疫球蛋白（egg yolk immunoglobulin,IgY）是鸡卵黄中的一种免疫球蛋白。由于其具有原料易得、制备简单、不与类风湿因子以及哺乳动物的补体发生交叉反应等优点,IgY是一种颇具潜力的抗生素替代品,但由于IgY性质不稳定,易受温度、pH值、酶的影响,从而限制了其实际应用。糖链在维持IgY理化性质、抗原特性等功能中扮演着重要角色。因此,对IgY进行糖基化修饰,从而改善其理化性质和抗原特性,不仅能使鸡蛋资源得到充分利用,也为开发蛋黄保健食品、添加剂以及相应的医药产品提供科学依据。本文归纳几种常见的IgY的糖基化方法,并论述IgY糖基化与其结构、理化性质之间的关系。     

鸡卵黄免疫球蛋白的分离制备研究

实验研究了从高免鸡卵黄中分离纯化免疫球蛋白(IgY)的方法。确定最优条件为:卵黄十倍稀释,pH5.3,-18℃冻结6h,4℃解冻;添加3%硅藻土进行微滤;采用超滤浓缩五倍;再用45%饱和硫酸铵(pH5.3)盐析;沉淀重溶后经DEAE-Sepharose F.F.柱层析分离纯化。结果表明,用此方法可以从高免鸡蛋中得到电泳纯IgY,总活性回收率达到64.16%。     

抗大肠杆菌免疫卵黄抗体制备工艺的研究

以猪源致病性大肠杆菌为抗原,免疫蛋鸡获取富含IgY的免疫鸡蛋,探讨抗原剂量、免疫部位、佐剂种类和免疫间隔等因素对IgY含量的影响,并通过正交实验对免疫条件进行了优化。通过单因素和正交实验确定最佳免疫条件为:抗原剂量2×108cfu/mL、佐剂为IFA、胸部肌肉注射免疫、强化免疫间隔方案为第3、5周,此条件下IgY总量达到5.532 g;各因素对IgY总量的影响依次为:免疫间隔>抗原剂量>免疫部位>佐剂种类。     

卵黄抗体咀嚼片配方优化及生物稳定性研究

以卵黄抗体(immunoglobulin of yolk,IgY)、脱脂奶粉和硬脂酸镁等为原辅料混合直接压制成卵黄抗体咀嚼片。以硬度和感官评分为指标,通过单因素和正交试验确定IgY咀嚼片压制配方;体外探讨不同温度、pH、胃蛋白酶和胰蛋白酶处理对咀嚼片中IgY效价的影响并模拟胃肠道消化;通过灌喂小鼠,探究IgY咀嚼片的体内消化代谢。IgY咀嚼片最佳配方为脱脂奶粉45%、硬脂酸镁1.9%、矫味剂45%、微晶纤维素6.1%。IgY咀嚼片在60℃温度处理1 h,IgY咀嚼片抗体效价为阴性。在pH 4～8之间IgY咀嚼片效价稳定;在pH 1.2条件下处理3 h,抗体失活率53.63%;胃蛋白酶消化2 h,抗体失活率19%;胰蛋白酶消化3 h,抗体失活率91.03%。体外模拟胃肠道消化5 h,IgY咀嚼片无抗体活性。小鼠体内消化代谢高中剂量组,灌喂0.5～1 h,在胃、十二指肠内检测抗体效价阳性;灌喂3 h,在空肠中检测抗体效价阳性;灌喂6 h,在回肠中检测抗体效价阳性;灌喂12 h,在消化道内均检测抗体效价阴性。IgY咀嚼片适口性好,可以在消化道内保存一定的生物稳定性,为IgY的使用提供了新的思...     

鸡蛋抗体的研究进展及其抗SARS病毒的可行性分析

鸡蛋抗体，即鸡卵黄中的免疫球蛋白，简称IgY。由于其具有不与人类补体结合，不与蛋白A结合以及不与类风湿因子结合等的免疫学特性，目前已被运用于疾病诊断检测和防治中。因此，利用IgY研制“非典”病毒特异性抗体，以用于预防“非典”病毒引起的呼吸道感染和治疗肺部感染及清除肠道中的病毒、防止排泄物引起的二次感染的设想有可能实现。本文就对鸡蛋抗体的研究进展及其抗SARS病毒的可行性作一分析、综述。     

卯黄抗体冻干粉除菌技术的研究

卵黄抗体(Immunoglobulin of yolk,IgY)是禽类经过特定抗原刺激产生的特异性免疫球蛋白,在生产过程中不能采用高温灭菌.为获得优质的IgY,利用微生物技术分析IgY冻干粉中的微生物,反复冻融和抗菌肽处理,ELISA技术测定IgY效价,抑菌圈法、试管二倍稀释法和琼脂平板计数法测定抗菌肽对IgY冻干粉残...     

肌原纤维蛋白结合态羧甲基赖氨酸的体外消化特性

利用荧光显微镜、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)、三甲基甘氨酸-十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(tricine-sodium dodecyl sulfatepolyacrylamide gel electrophoresis,Tricine-SDS-PAGE)和粒径分析仪研究肌原纤维蛋白结合态羧甲基赖氨酸[myofibrillar protein-bound Nε-(carboxymethyl)lysine,MP-bound CML]在体外模拟胃肠系统消化过程中水解产物的变化情况,并利用超滤对胃肠消化后的水解产物进行分级(5 kDa、3 kDa～5 kDa、1 kDa～3 kDa、1 kDa),用高效液相色谱-三重四极杆串联质谱(high performance liquid chromatography-triple quadrupole-tendem mass spectrum,HPLC-QQQMS/MS)仪测定各分子量组分中CML含量及占总CML的百分比,明确MP-bound CML在胃肠消化道中的消化特性。结果表明:随着体外模拟胃肠消化时间的增加,MP-bound CML粒径逐渐减小,当肠液消化360 min时MP-bound CML水解液粒径在100 nm～1 000 nm范围内,分子量主要在17 kDa以下;MP-bound CML水解液中分子量小于5 kDa的结合态CML比例为68.5%,其中分子量小于1 kDa的结合态CML比例为8.9%,这为探究食品中蛋白结合态晚期糖基化终末产物(advanced glycation end-products,AGEs)的肠道吸收机制提供了一定的理论基础支撑。     

荞麦过敏原致敏蛋白组分研究

目的对荞麦过敏原的主要致敏蛋白进行研究。方法收集26例荞麦过敏症患者,详细询问临床病史,留取血清建立血清库;荧光免疫分析仪ImmunoCAP系统检测荞麦特异性IgE水平;用免疫印迹法测定每种致敏蛋白组分的灰度值。结果共收集荞麦过敏患者26例(男10例、女16例,平均年龄29岁)。荞麦特异性IgE的中位数水平是8.385 KUA/L。免疫印迹法识别了荞麦过敏原中的15种致敏蛋白:10 kDa(8%)、13kDa(4%)、14 kDa(12%)、16 kDa(4%)、18~19 kDa(100%)、22~24 kDa(46%)、34 kDa(31%)、36 kDa(58%)、38kDa(15%)、40~50 kDa(46%)、54 kDa(23%)、56 kDa(19%)、69~70 kDa(46%)、100~130 kDa(27%)和130~170kDa(19%)。结论荞麦中的18~19、22~24、36、40~50和69~70 kDa蛋白显示高阳性率,可能为荞麦过敏原的主要致敏蛋白。     

免疫蛋黄抗体的研究进展

用特殊抗原免疫母鸡,并从免疫蛋中获取特异性抗体(IgY)已受到人们的关注。文章重点介绍了免疫蛋抗体IgY的理化性质和制备方法,并结合食源性疾病诊断与治疗以及我国食品工业发展的趋势,对IgY的应用前景进行了论述。     

酪蛋白和乳球蛋白的抗体及酶标物制备研究

选用牛乳中的β-酪蛋白(β-CN)和β-乳球蛋白(β-Lg)为抗原对鸡体免疫,从鸡卵黄中用水稀释法及亲和色谱(HiTrapTM IgY Purification HP)纯化特异性鸡卵黄抗体(IgY)。PAGE电泳分析IgY纯度高达90%,ELISA效价为1:4096。用过碘酸钠氧化法进行抗原的过氧化物酶(HRP)标记,HRP与β-CN和β-Lg的分子个数比分别为1:1和1.5:1的标记效果最好,β-CN-HRP和β-Lg-HRP的效价高达1:640,其ELISA工作浓度分别为1:80和1:40。特异性IgY和酶标抗原为特异检测牛乳蛋白的酶联免疫吸附(ELISA)分析提供必要条件。     

大鲵肌肉分离蛋白特性

为研究大鲵肌肉蛋白组成及特性,从大鲵肌肉中分离肌浆蛋白、肌原纤维蛋白及肌基质蛋白,测定其含量、氨基酸组成、分子质量、紫外光谱和红外光谱,利用扫描电子显微镜观察蛋白微观结构。结果表明:肌浆蛋白含量为4.91%,分子质量为20～200 kDa;肌原纤维蛋白含量为9.03%,主要包含肌球蛋白重链(200 kDa)、肌动蛋白(43 kDa)和原肌球蛋白(36 kDa);肌基质蛋白含量为2.28%,分子质量分布在29～40 kDa、160～200 kDa;3种分离蛋白在280 nm波长处均有最大紫外吸收峰,肌原纤维蛋白在酰胺A、B、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ带均有红外特征吸收峰,肌浆蛋白和肌基质蛋白仅在酰胺Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ带出现红外特征吸收峰。扫描电子显微镜图像显示,肌浆蛋白蛋白束平滑,肌原纤维蛋白为棒块状或颗粒状聚合物,肌基质蛋白有完整的纤维结构。     

抗金黄色葡萄球菌IgY酶解稳定性及体外抑菌研究

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是引起细菌性食物中毒的重要病原菌之一,近年来由金黄色葡萄球菌污染引起的食品安全问题,越来越受到人们的关注.抗金黄色葡萄球菌IgY热稳定性能优良,同时IgY具有较强的耐酸碱能力;IgY虽然对胃蛋白酶有较好的抵抗力,但在胰蛋白酶作用下会失去活性;体外抑菌实验表明IgY对金黄色葡萄球菌具有抑制生长活性,抑菌率达到93.5％;双向琼脂扩散实验检测IgY效价为64 因此,抗金黄色葡萄球菌IgY有望代替抗生素用于细菌感染性疾病的治疗.     

抗变链球菌鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)的制备及活性检测

以远缘链球菌(S.sorbrinus 6715血清型g)免疫产卵母鸡,应用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定鸡卵黄中免疫球蛋白(Immunoglobulin of Yolk,IgY)的活性,研究鸡免疫应答并制备出高免抗-S.sorbrinus IgY.结果显示以109 cfu/只剂量免疫的母鸡,第一次免疫后的第七天卵黄中出现特异性IgY,加强免设后抗体效价上升更快,经ELISA法检测,卵黄中的抗体效价到1384.而冷冻干燥后的IgY,其效价要超过12000.     

喷雾干燥对蛋黄粉功能特性的影响

目的:开发蛋黄粉在饲料领域、功能性食品及生物制药领域的应用。方法:以鲜鸡蛋为原料,采用喷雾干燥制备蛋黄粉,并分析不同参数对蛋黄粉卵黄抗体(IgY)含量、蛋白质结构和功能特性的影响。结果:综合考虑蛋黄粉抗体含量、理化特性和功能特性,当进口风温为140 ℃、进料流量为600 mL/h时,蛋黄粉的IgY含量为17.71 mg/g,溶解度为61.97%,出粉率为36.46%,水分含量为3.8%,表面疏水性为106.67 μg,持水性为3.63 g/g,持油性为3.03 g/g,乳化性为27.15%,乳化稳定性为24.48%,整体品质最好。结论:改变喷雾干燥参数在保证IgY含量较高的情况下,能保持蛋黄粉的结构完整并提高蛋黄粉的理化特性和功能特性。     

时间分辨免疫荧光法测定食物中鸡蛋过敏原蛋白成分

目的:建立双抗体夹心时间分辨免疫荧光法(TRFIA)用于测定食物中鸡蛋过敏原蛋白成分,为进出口食品鸡蛋过敏原成分检测提供技术基础.方法:提取鸡蛋过敏原总蛋白,免疫小鼠获得多克隆抗体,并以此抗体包被酶标板,采用生物素标记抗鸡蛋过敏原总蛋白抗体、Eu3+标记的链酶亲和素和以β-二酮体为主的增强液等试剂,建立双抗夹心TRFIA方法,用于检测10种食品中是否舍有鸡蛋蛋白成分.结果:鸡蛋总蛋白SDS-PAGE显示带大致有10条,其中主要条带有4条,分子量分别为71、55、38、14kDa;成功地研制出双抗体夹心TRFIA法检测食品中鸡蛋过敏原蛋白成分,具有特异性,其最低检出限为0.625ng/mL,标准曲线在12.5～640ng/mL范围内线性良好;8种食品检测结果与食物过敏原标签标注内容相符,而2种标示不详的食品检测结果均呈现阳性.结论:初步建立了检测食品中鸡蛋过敏原蛋白成分的双抗体夹心TRFIA,具有较好的特异性和灵敏度;该方法对于未标注鸡蛋过敏原成分的食品检测具有一定的实际应用价值.     

卵黄抗体/壳聚糖微囊的制备与体外释放性能的研究

研究卵黄抗体/壳聚糖缓释微囊的制备工艺。以壳聚糖为壁材,三聚磷酸钠为交联剂,采用离子交联法制备卵黄抗体(IgY)壳聚糖微囊,应用星点实验设计,以微囊对IgY的包封率和载药量为指标对壳聚糖溶液的质量浓度,壳聚糖与三聚磷酸钠质量比和IgY的初始浓度三个因素进行模型拟合,效应面分析,获得制备IgY-壳聚糖微囊的最佳工艺:壳聚糖溶液的质量浓度0.23g/100mL,壳聚糖与三聚磷酸钠质量比4∶1,IgY的质量浓度2.46mg/mL,以该条件制备的IgY-壳聚糖微囊的包封率(93.26%)和载药量(25.64%)高,与理论预测值的误差较小。IgY/壳聚糖微囊经粒度分析测得平均粒径为2.16μm,Zeta电位为26.20mV,分散度较好,体外有一定缓释作用,时间为6h,微囊化对IgY活性具有保护作用。     

禽蛋黄免疫球蛋白促进人体健康作用的研究进展

卵黄免疫球蛋白(yolk immunoglobulin,IgY)作为禽蛋中重要的免疫活性成分,具有稳定性好、安全性高、廉价、易获得、免疫活性强、不会引发耐药性等优点,在科学研究和生产应用中表现出极强的竞争力.本文综述了IgY作为良好的抗生素替代物在病毒、细菌性疾病防治中的显著优势.另外,IgY通过特异性作用于关键限速酶...