大理州烟草黑胫病菌对烯酰吗啉的敏感性测定

采用含药平板法建立烟草黑胫病菌对杀菌剂烯酰吗啉的敏感基线,并测定了2013年从云南省大理州各烟区分离纯化的烟草黑胫病菌菌株对烯酰吗啉的敏感性。结果显示,烟草黑胫病菌的敏感基线为1.4656 μg/mL;68个田间菌株对烯酰吗啉的EC₅₀值在0.5857~2.5254 μg/mL之间,平均为1.1118 μg/mL。表明烯酰吗啉对烟草黑胫病菌的活性较高,大理州烟草黑胫病菌的抗药性风险较低。烯酰吗啉可用于大理州烟草黑胫病的有效防控,但应与其他杀菌剂进行合理的轮换使用。     

果蔬中烯酰吗啉基质效应的研究

目的研究烯酰吗啉在橙子和芹菜中的基质效应,以准确测定橙子和芹菜中的烯酰吗啉。方法利用超高效液相色谱-串联质谱法进行测定。橙子和芹菜样品利用乙腈提取后直接进样分析,并采用正离子多反应监测模式,外标法定量,比较了甲醇-水、甲醇-0.1%(V:V)甲酸水溶液、甲醇-1 mmol/L乙酸铵水溶液3种流动相组成对烯酰吗啉基质效应的影响情况。同时也比较了纯甲醇溶剂和样品空白基质配制的标准对烯酰吗啉基质效应的影响。结果利用样品空白基质配制的标准能够有效地抑制烯酰吗啉的基质效应,而测定橙子和芹菜基质中烯酰吗啉时,使用甲醇-0.1%(V:V)甲酸水溶液作为流动相,可在一定程度上抑制烯酰吗啉的基质效应。结论本方法快速简便,为烯酰吗啉在其他果蔬中的基质效应研究提供参考。     

超临界流体色谱—串联质谱分离和测定烟草中磷胺和速灭磷顺反异构体

  目的  快速分离和测定烟草中磷胺和速灭磷顺反异构体。  方法  通过超临界流体色谱-串联质谱(SFC-MS/MS)建立了磷胺和速灭磷顺反异构体的分析方法。  结果  结果表明:①磷胺和速灭磷顺反异构体均达到基线分离,分离时间为5 min。②在高、中、低三个不同添加浓度水平下,所有异构体的回收率在84.7%~96.7%之间,日间RSD < 5.0%,检出限(LOD)为0.6 μg/kg~1.7 μg/kg定量限(LOQ)为2.0 μg/kg~5.5 μg/kg。③采用该方法对20个烟叶实际样品进行检测,所有样品均未检出磷胺和速灭磷的异构体。  结论  该方法快速,环保,稳定可靠,可用于分离和测定烟草中磷胺和速灭磷顺反异构体的含量。      

QuEChERS-液相串联质谱法快速测定蔬菜水果中氟吗啉和烯酰吗啉残留量

目的建立基于QuEChERS与液相串联质谱(liquidchromatographytandemmassspectrometry,LC-MS/MS)联用技术快速测定蔬菜水果中氟吗啉和烯酰吗啉残留量的分析方法。方法样品经乙腈提取后,用QuEChERS法净化, Symmetry C18色谱柱分离, LC-MS/MS外标法定量。结果方法学验证,该方法具有较高的灵敏度,氟吗啉和烯酰吗啉的检出限为0.05μg/kg,定量限为0.1μg/kg;在0.1～25μg/kg浓度范围,线性相关系数大于等于0.9963,回收率在82.4%～106.3%之间,相对标准偏差为1.5%～8.8%,该方法具有较好的回收率和良好的再现性,满足国家相关标准要求。结论该方法处理过程快速简便,灵敏度高、专属性强。     

申嗪霉素对烟草黑胫病的毒力及防治效果

为探明申嗪霉素防治烟草黑胫病的潜力,在室内离体条件下测定其对烟草黑胫病菌菌丝生长、孢子囊形成和游动孢子释放的毒力,并通过温室盆栽和大田药效试验明确其对烟草黑胫病菌的防效及对烟草生长的影响。结果表明,申嗪霉素对沂水烟区黑胫病菌孢子囊的形成和游动孢子的释放抑制效果最好,EC₅₀值分别为0.31和0.35 μg/mL。室内防效结果表明,1%申嗪霉素悬浮剂（15 g a.i./hm²）对烟草黑胫病的防效为84.37%,显著高于25%甲霜灵可湿性粉剂（56.33%）和50%烯酰吗啉可湿性粉剂（80.55%）,而田间药效试验结果与室内防效基本一致,在冕宁和诸城两地1%申嗪霉素田间防效分别为90.49%和82.93%,显著高于对照药剂甲霜灵（71.89%,38.87%）和烯酰吗啉（78.42%,69.01%）。除此之外,申嗪霉素较甲霜灵和烯酰吗啉在提高株高、茎粗、有效叶片数及光合速率等指标效果更好。可见,申嗪霉素是防治烟草黑胫病的有效制剂,可作为甲霜灵和烯酰吗啉的轮换药剂使用。     

烟草黑胫病菌高效杀菌剂的筛选

为了筛选防治烟草黑胫病的有效药剂,采用菌丝生长速率法分析了22种杀菌剂对烟草黑胫病菌的抑制作用,测定了其中抑菌效果较好的7种杀菌剂对烟草黑胫病菌菌丝生长的EC50值,并以50%（质量分数）烯酰吗啉悬浮剂和25%（质量分数）甲霜灵可湿性粉剂为对照药剂,通过温室盆栽试验考察了23.4%（质量分数）双炔酰菌胺悬浮剂对烟草黑胫病的防效。结果表明,在供试的22种杀菌剂中,氟吗啉、申嗪霉素、甲霜灵、代森锰锌、丁吡吗啉、烯酰吗啉和双炔酰菌胺7种杀菌剂的抑菌效果较好,其对烟草黑胫病菌的EC50值分别为2.023 0、1.923 0、1.808 2、1.758 0、1.400 0、0.783 0和0.018 0 mg/L。23.4%双炔酰菌胺悬浮剂对烟草黑胫病的病指防效为80.11%,显著高于对照药剂50%烯酰吗啉悬浮剂（64.89%）和25%甲霜灵可湿性粉剂（66.05%）,可有效控制烟草黑胫病的危害。     

气相色谱法测定人参提取物中3种农药残留

建立GC-ECD(气相色谱-电子捕获检测器,Gas chromatograph-electron capture detector)检测人参提取物中五氯苯胺、腐霉利、烯酰吗啉3种农残的方法。人参提取物样品用水溶解,环己烷萃取,通过毛细管气相色谱-电子捕获检测器检测。五氯苯胺和腐霉利在范围为0.01μg/m L~1.0μg/m L(n=5),烯酰吗啉在范围为0.1μg/m L~10.0μg/m L标准曲线范围内线性良好,加标回收率平均值为97.71%~107.45%,RSD为1.61%~5.09%(n=9),检测限为1μg/kg~20μg/kg。该法可用于准确检测人参提取物中五氯苯胺、腐霉利、烯酰吗啉3种农残含量。     

超高效液相色谱-串联质谱法测定辣椒及其栽培土壤中烯酰吗啉和唑嘧菌胺

目的建立用于辣椒和土壤中烯酰吗啉和唑嘧菌胺残留检测的超高效液相色谱-串联质谱方法。方法辣椒和土壤样品采用乙腈和水提取,盐析后取上清液,通过优化色谱分离等条件,建立超高效液相色谱-串联质谱方法,结合目标物标准曲线进行定量分析。结果经过3个水平的加标回收率实验,所建立方法的平均回收率在85.2%~97.8%,相对标准偏差0.1%~2.2%(n=5)。烯酰吗啉在辣椒的定量限为0.04mg/kg,在土壤中定量限为0.01 mg/kg;唑嘧菌胺在辣椒和土壤中的定量限均为0.01mg/kg。结论所建立的分析方法操作简便,分离净化效果良好,灵敏度、准确度和精密度均达到农药残留检测要求。     

SP-2560毛细管柱拆分9-十八碳烯酸甲酯顺反异构体的研究

采用SP-2560毛细管柱气相色谱法成功分离了9-十八碳烯酸甲酯顺反异构体。在优化的气相色谱条件下,9-十八碳烯酸甲酯顺反异构体的色谱峰实现基线完全分离,保留时间差在0.5 min以上,分离度Rs>3。9-十八碳烯酸甲酯顺反异构体混标浓度与检测器的响应信号之间呈现线性关系,采用内标法能够获得较好的相关性(R>0.99),线性范围为25~10 000μg/mL,同时具有较低的检出限(约0.2μg)和较高的精密度(RSD<5%)。9-十八碳烯酸甲酯顺反异构体的成功分离为气相色谱法测定食品中的反式脂肪酸奠定了重要基础。     

烯酰吗啉在人参和土壤中的残留动态及膳食风险评估

采用高效液相色谱-质谱技术研究质量分数80%的烯酰吗啉水分散粒剂在人参根、茎、叶和土壤中的消解动态及最终残留量,并对其可能产生的膳食安全风险进行评估。样品经丙酮提取,GPR固相萃取柱净化后以液相色谱分离,采用电喷雾电离源,以质谱正离子扫描多反应监测模式进行定量分析,外标法定量。在0.01～0.20 mg/kg添加范围内,烯酰吗啉在人参根、茎、叶及土壤中的回收率为82.0%～95.5%,相对标准偏差为5.01%～7.67%。施药剂量为800 g a.i./hm2时,烯酰吗啉在人参根、茎、叶和土壤中的降解半衰期为9.13～16.35 d。在一个生长季节使用1 次,施药剂量为533.33～800 g a.i./hm2时,烯酰吗啉在人参根、茎、叶和土壤中的最终残留量分别为未检出～0.024 5、0.023 3～0.138 7、0.121 5～0.618 2 mg/kg和0.008 4～0.073 8 mg/kg,风险商值为3.56×10-7（远小于1）,风险较低,处于安全水平。建议我国烯酰吗啉在人参中的最大残留限量值可暂定为0.05 mg/kg,安全间隔期为28 d。     

HPLC法测定烟草及烟草制品中马来酰肼残留

建立了萃取溶剂、固相萃取小柱净化、高效液相色谱( HPLC)法检测烟草及烟草制品中马来酰肼(MH)残留量的方法,并采用该方法检测了23个烟草样品中的马来酰肼残留.结果表明:①用4 mol/L盐酸加热回流萃取1h效果较好;②用Varian Microsorb- MV 100-5 C18色谱柱,以0.1 mol/L醋酸水溶液为流动相,等梯度洗脱,流速0.7 mL/min,检测波长313 nm,20 min内MH色谱峰和杂质色谱峰可以有效分离;③该法的回收率为97.11％,相对标准偏差为7.13％.该方法适合烟草及烟草制品中马来酰肼的测定.     

不同类型杀菌剂对烟草黑胫病菌生物活性的研究

研究了烯酰吗啉、嘧菌酯、醚菌酯、甲霜灵及代森锰锌5种不同类型杀卵菌剂对烟草黑胫病菌菌丝生长、孢子囊产量、游动孢子释放、孢子囊直接萌发及休止孢萌发的生物活性。结果表明:烯酰吗啉和甲霜灵对菌丝生长具有强烈的抑制作用,其次为代森锰锌,嘧菌酯和醚菌酯的活性最低;烯酰吗啉和甲霜灵对孢子囊的形成也具有很高的抑制活性,显著高于其它类药剂;游动孢子的释放对嘧菌酯和醚菌酯最为敏感,其次为代森锰锌,而烯酰吗啉和甲霜灵对其没有抑制作用;孢子囊的直接萌发对嘧菌酯和醚菌酯最为敏感,其次为烯酰吗啉和代森锰锌,而甲霜灵对此阶段没有活性;休止孢的萌发对嘧菌酯和醚菌酯最为敏感,其次为烯酰吗啉、代森锰锌,而甲霜灵不影响其萌发。     

β-胡萝卜素微胶囊和胡萝卜汁中β-胡萝卜素异构体的测定

本文使用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定了β-胡萝卜素的顺反异构体。采用的色谱柱为Vydac 201TP54 C18柱，流动相为甲醇：乙睛：四氢呋喃(15：80：5)，流速0．6mL/min，检测波长：450nm，柱温30℃。在该色谱条件下，微胶囊化β-胡萝卜素产品与胡萝卜汁中的β-胡萝卜素顺反异构体可以快速完全地分离，其β-胡萝卜素顺反异构体的组成也能进行准确定量。     

DSPE-LC-MS/MS法测定海红果中9种杀菌剂残留量

建立分散固相萃取(DSPE)-液相色谱-质谱法(LC-MS/MS)测定海红果中9种杀菌剂(嘧霉胺、百菌清、稻丰散、甲霜灵、三唑酮、五氯硝基苯、烯酰吗啉、咪鲜胺、苯醚甲环唑)残留量的检测方法。样品匀浆粉碎后经乙腈提取、氧化铝萃取剂净化后,采用Atlantis T3色谱柱分离,LC-MS/MS测定。结果表明:9种杀菌剂在5.0μg/L~500μg/L范围内,呈良好的线性关系,线性相关系数R~2≥0.999 3;检出限为0.03μg/kg~1.0μg/kg,定量限为0.1μg/kg~3.0μg/kg;回收率在80.4%~102.3%,相对标准偏差(RSD)在1.1%~5.8%之间。     

3种农药在土壤-烟株系统中的迁移降解特征

为明确甲霜灵、噁霜灵和烯酰吗啉3种农药从土壤向烟草叶片的迁移降解及在不同部位叶片中的分布特征,在烟田进行灌根施药,采用GC-MS/MS测定农药残留量,研究了灌根施药方式对烟叶农药残留的影响。结果表明,灌根施药后,3种农药在土壤中的残留量逐渐降低且降解动态符合一级动力学方程;在烟叶中的残留量先升高后降低,不同部位的残留量呈现下部叶 > 中部叶 > 上部叶的趋势。甲霜灵、烯酰吗啉在施药后第7天烟叶农药残留量低于最大残留限量标准,噁霜灵在施药后第28天烟叶农药残留量仍高于最大残留限量标准。可见,按推荐高剂量进行灌根施药后,烟叶中甲霜灵、烯酰吗啉超限风险较低,噁霜灵超限风险较高。     

固相萃取-气相色谱法同时检测草莓中13种农药残留

目的建立一种固相萃取-毛细管柱气相色谱方法,可以同时检测草莓中常用的13种农药残留,包括百菌清、腐霉利、粉唑醇、腈菌唑、醚菌酯、苯醚甲环唑、烯酰吗啉等7种杀菌剂,毒死蜱、三氟氯氰菊酯、哒螨灵、氰戊菊酯等4种杀虫剂及莠去津、乙草胺等2种除草剂。方法草莓样品20 g匀浆后,经乙腈50 mL提取,NH_2固相萃取柱净化,HP-5毛细管气相色谱柱进行分离,GC-ECD进行定性及定量分析。结果 13种农药残留的色谱图分离效果良好,线性相关系数均大于0.996,方法检出限在0.01 mg/kg~0.5 mg/kg之间。13种农药的添加水平为0.01 mg/kg~2 mg/kg,回收试验表明该方法平均回收率在70.5%~114.5%之间,相对标准偏差在2.17%~6.85%之间。结论该方法简单、快速、灵敏、净化效果好、回收率高,适合草莓中多种农药残留的检测和安全监控。通过对50份草莓样品进行检测,检出百菌清、乙草胺、毒死蜱、粉唑醇、醚菌酯、烯酰吗啉6种农药。     

氟菌·霜霉威对烟草黑胫病的防效及其对烟株生长的影响

为探明氟菌·霜霉威防治烟草黑胫病的潜力,本研究采用菌丝生长速率法测定了6种杀菌剂对烟草黑胫病菌丝生长的影响,并通过温室盆栽试验明确了氟菌·霜霉威对烟草黑胫病的防效及其对烟株生长的影响。结果表明,氟吡菌胺与霜霉威盐酸盐以质量比1∶10混用（氟菌·霜霉威）对烟草黑胫病菌丝生长的抑制效果最好,EC₅₀值为0.06 mg/L。温室盆栽试验结果表明氟菌·霜霉威在773.4 g a.i./hm2时,对烟草黑胫病的防效可达81.50%,显著高于甲霜灵（55.75%）和烯酰吗啉（67.83%）的防效。氟菌·霜霉威在提高烟草株高、茎粗、有效叶片数及光合速率等指标优于与甲霜灵和烯酰吗啉,表现出良好的促生效果。施用氟菌·霜霉威后,烟株叶片的多酚氧化酶（PPO）、过氧化物酶（POD）和超氧化物歧化酶（SOD）等防御酶活性显著增加,而丙二醛（MDA）含量降低。本结果表明氟菌·霜霉威可作为甲霜灵和烯酰吗啉的替代药剂用来防治烟草黑胫病。      

高效液相色谱-串联质谱法测定葡萄酒中22种杀菌剂残留量

本文建立了葡萄酒中22种杀菌剂残留量的高效液相-串联质谱(LC-MS/MS)分析方法。样品经碱化乙酸乙酯提取后,无水硫酸钠去水、石墨化炭黑除色后制得澄清提取液,再经HLB固相萃取小柱净化去除杂质和干扰物,液相色谱分离,正离子多反应监测模式(MRM)二级质谱扫描定量分析;研究了流动相不同修饰剂对22种化合物质谱信号的影响,确定流动相中添加0.1%甲酸以提高质谱的灵敏度;分析了葡萄酒中多种化合物的基质效应的影响,采用基质匹配曲线定量的方式消除了基质效应的影响。多种杀菌剂的方法定量限为0.01~0.1μg/kg。在各自分析物的线性范围内回收率为70.18%~109.02%,相对标准偏差RSD≤16.36%。经方法验证实验确认本方法具有快速、准确、灵敏度高、专属性强等特点。在实际样品检测中杀菌剂检出率为94.12%,精苯霜灵、唑菌胺酯、精甲霜灵、烯酰吗啉和氟吗啉等杀菌剂被检出,烯酰吗啉浓度偏高,最高浓度为40.40μg/kg。     

超高效合相色谱-串联质谱手性分离和测定烟草及土壤中茚虫威对映体

为实现烟草和土壤中茚虫威对映体的手性分离和测定,建立了超高效合相色谱-串联质谱(UPC2-MS/MS)快速分离和测定烟草及其土壤中茚虫威对映体的方法。样品经QuEChERS方法处理后,以CO2和甲醇为流动相,用Chiralcel IG-3色谱柱分离样品,并在多反应监测模式(MRM)下进行MS/MS分析,采用基质匹配标准工作曲线法定量。结果表明:①该方法实现了R-/S-茚虫威对映体的基线分离,手性分离时间仅为5 min。②在对映体含量为2.5、7.5和15.0 mg/kg水平下,各对映体的回收率为83.7%～96.6%,日间相对标准偏差(RSD)6.0%。在质量浓度50～1 000 ng/mL范围内,烟草和土壤基质中两种对映体的线性良好(R2≥0.993 2)。两种基质中对映体的检出限(LOD)和定量限(LOQ)分别为0.028～0.048和0.088～0.148 mg/kg。③采用该方法对10个烟叶和10个土壤实际样品进行了检测,仅有1个土壤样品检出R-茚虫威(1.05 mg/kg)和S-茚虫威(0.88 mg/kg)。该方法绿色、快速、可靠,适用于烟草及其土壤中茚虫威对映体的分离和测定。     

超高效液相色谱法测定烟草西柏三烯二醇

建立了超高效液相色谱-紫外检测(UPLC-UV)外标法定量测定烟草α和β-2,7,11-西柏三烯-4,6-二醇的方法。烟草样品以乙酸乙酯为萃取剂,液料比为50:1,在超声频率45 k Hz,提取温度为25~30℃,提取时间10 min条件下进行目标化合物提取,提取液经氮气吹干,用流动相溶解,以ACQUITY UPLC BEH C18(2.1 mm×50 mm,1.7μm)为分离色谱柱,以70%乙腈为流动相,流速为0.3 m L/min,柱温为35℃,在波长为200 nm条件下进行检测。结果表明,α和β-2,7,11-西柏三烯-4,6-二醇线性范围分别为12.14~194.2、6.229~99.67μg/m L,仪器检出限分别为0.1166、0.1495μg/m L,方法定量限分别为33.8、49.8μg/g,在3个加标浓度下,平均回收率分别在96.7%~98.8%、96.2%~98.4%,方法重现性相对标准偏差分别为3.46%、3.11%。本方法与行业标准相比,对烟草西柏三烯二醇的测定结果无显著差异。该方法操作简单、溶剂用量少,检测周期短,精密度和准确度均较高,适用于烟草α和β-2,7,11-西柏三烯-4,6-二醇批量检测。