农用抗生素高产菌株的筛选分离及诱变育种

该实验分离得到4株产农用抗生素菌株,编号1#～4#。 以厚垣镰孢霉（Fusarium chlamydosporum）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、大肠杆菌（Escherichia coli）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）作为指示菌,测定其发酵液的抑菌活性,并对抑菌 活性菌株进行诱变育种。 结果表明,菌株1#对枯草芽孢杆菌（B. subtilis）和金黄色葡萄球菌（S. aureus）抑菌圈直径＞10 mm,抑菌 活性较好。 采用紫外诱变、重金属激活沉默基因复活诱变两种方法诱变菌株1#后,对厚垣镰孢霉、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄 色葡萄球菌抑菌作用分别增加了25.68%、32.11%、34.85%、28.28%。 形态学观察及生理生化实验结果初步鉴定菌株1#为链霉菌属（Streptomyces sp.）。     

窖泥高产己酸菌的分离筛选及发酵性能测试

通过对老窖泥的多次富集培养,从中筛选高产己酸的菌株,并通过形态观察及分子生物学技术对其进行鉴定。同时,选取己酸产量最高的菌株进行发酵性能的测定。结果表明,从3#老窖泥中筛选并鉴定得到3株高产己酸的克鲁维氏梭菌（Clostridium kluyveri）A-1、A-3、A-5,己酸产量分别为5.73 g/L、9.77 g/L、7.45 g/L。其中Clostridium kluyveri A-3的己酸产量最高,生长周期为88.5 h,其产己酸的最佳初始pH值为7.0,发酵时间为14 d,发酵温度为37 ℃,乙醇含量为2%。pH耐受范围为3.0～11.0,温度耐受范围为13～55 ℃,乙醇最高耐受含量为5%。     

高产γ-氨基丁酸霉菌菌株的筛选及诱变育种

以霉菌作为出发菌株,将其接入大豆-水(3:5,m/V)的发酵培养基中进行发酵,根据发酵过程中γ-氨基丁酸(GABA)产量,筛选出GABA的高产霉菌菌株,然后利用紫外线对高产菌株进行诱变处理,并通过抗性初筛获得长势较好的突变菌株,再分别利用含有质量浓度为1g/100mL L-谷氨酸的PDA综合培养基和大豆水溶液的发酵培养基进行两次筛选,得到稳定高产GABA突变菌株。结果表明,通过对产GABA霉菌菌株的筛选,得到米曲霉3.800为高产GABA霉菌,GABA产量达到0.674g/L。以米曲霉3.800作为原始菌株,对其进行紫外诱变处理,从而获得高产GABA突变菌株,结果表明,利用紫外线对米曲霉3.800进行处理的最佳照射时间为2min。在此照射时间下,通过突变菌株在含有质量浓度为1g/100mL L-谷氨酸的PDA综合培养基和大豆-水溶液的发酵培养基进行两次筛选,最终获得一株稳定的高产GABA突变菌株3.800-4,其在含有质量浓度为1g/100mL谷氨酸的PDA综合培养基中的GABA产量为4.491g/L,比原菌株的GABA产量提高了23.58%;同时其在大豆-水的发酵培养基中的GABA产量为0.874g/L,比原菌株的产量提高了29.67%。     

枯草芽孢杆菌凝乳酶高产菌株的微波诱变

以1株产凝乳酶枯草芽孢杆菌菌株为对象,对其进行微波诱变处理,考察诱变时间、诱变频率对菌株诱变效果影响,得到最佳诱变条件为:诱变时间为4 min,诱变功率为450 W;获得1株高凝乳酶活菌株(菌株编号为BsB1.1),其遗传稳定性良好,凝乳酶活达到516.12 U/g,比出发菌株提高了29.0%。     

产胆固醇氧化酶类芽孢杆菌的复合诱变育种

以已筛选出的产胆固醇氧化酶的类芽胞杆Paenibacillus sp.X5作为出发菌株,经过紫外线和60Co诱变处理,最后得到一株突变Paenibacillus sp X534,最终酶活达300U/L,其酶活为出发菌株的2倍。     

己酸菌筛选新途径及工艺参数正交试验

采用加大琼脂用量制成固体斜面培养基，以稀释分离，真空培养的方法进行己酸菌分离纯化，并采用正交试验法对己酸菌的生长繁殖条件进行了探讨，其影响因素依次为酒度,pH值，培养时间，培养温度及热处理温度，优化因子为pH6，酒度2％，热处理温度80℃，培养温度30℃，培养时间6d。     

窖泥中高产己酸功能菌的分离筛选及代谢功能的研究

窖泥是己酸功能菌繁衍栖息的场所。该研究从原酒车间老窖泥中分离筛选得到了高产己酸的复合功能菌株,命名为HJ31~#,该复合菌多数为革兰氏阴性杆菌。经条件优化及代谢功能研究,该复合功能菌的最适培养条件为培养温度34～36℃,最佳初始pH值为6.00～7.95,厌氧培养。在最适条件下,复合功能菌株HJ31~#的己酸产量均可达到1000 mg/100 mL以上。     

紫外诱变选育高产蛋白酶枯草芽孢杆菌

紫外线辐射是目前最为广泛的物理诱变因子之一,其引起菌体DNA结构变化的形式很多,如DNA链的断裂、碱基的破坏等,但最主要的作用是使同链DNA的相邻嘧啶间形成胸腺嘧啶二聚体,阻碍碱基间的正常配对,从而引起微生物突变或死亡.以实验室保存的枯草芽孢杆菌为出发菌株,利用紫外诱变的方法,以获取可高效发酵生产蛋白酶的突变株.通过大量筛选及连续传代实验,确定了一株突变性状能稳定遗传的突变株,其蛋白酶产量较出发菌株有大幅度提高.     

醋酸菌的分离提纯与诱变育种

实验以研究陕西农家醋醅、自制果醋的醋酸菌为出发点,采用碳酸钙培养基透明圈法分离醋酸菌.将6个HC值较大的单菌落接入平板分离纯化,经革兰氏染色及产醋酸定性试验,最后得到了A,B2株醋酸菌.将这2株菌经紫外诱变,产酸量分别提高18％和4.9％;经甲基磺酸乙酯(EMS)诱变,产酸量分剐得到提高.     

窖泥高产己酸菌分离鉴定及培养条件优化的研究

浓香型白酒的主体香味物质是己酸乙酯,己酸菌是重要的功能菌种。该研究从优质窖泥中分离获得了高产己酸菌株,命名为JZZ,该菌是革兰氏阳性杆菌,经形态学和16S rDNA序列鉴定,属于克氏梭菌（Clostridium kluyveri）。通过培养条件考察,该己酸菌最适培养条件为接种量5%,装样量90%,培养温度37 ℃,pH值为6.5。在最适培养条件下,菌株JZZ的己酸产量均可达到4.36 mg/mL。     

高产抗菌脂肽Fengycin芽孢杆菌的诱变育种和发酵条件优化

为了提高Fengycin产量,以芽孢杆菌YA-215为出发菌,通过复合诱变（紫外诱变、ARTP-LiCl诱变）育种来获取高产Fengycin突变体。通过单因素实验和响应面试验等确定最佳发酵工艺优化。结果表明,复合诱变选育获得一株高产Fengycin突变株UA397,全基因组测序结合16S进化样本分析显示为暹罗芽孢杆菌。其最佳发酵工艺条件为：蔗糖25 g/L、蛋白胨30 g/L、发酵温度37.7℃、发酵时间37.8 h、接种量5.01%。在此发酵条件下,暹罗芽孢杆菌UA-397的Fengycin产量为517.09 mg/L,是野生型在未进行发酵条件优化时Fengycin产量113.02 mg/L的4.575倍。研究结果为抗菌脂肽Fengycin应用于食品、医药和生物防治等领域奠定了产量基础。     

优良己酸菌分离培养及冷干保藏条件研究

以大曲酒窖窖泥为材料,对己酸菌进行了分离纯化,并对己酸菌菌种的真空冷冻干燥保藏方法进行了研究,初步确定了菌种冻干保藏的预冻温度及保护剂浓度。比较了己酸菌不同保存方式的保藏效果,实验表明采用冷冻干燥保藏法长期保藏菌种效果良好。     

产豆豉纤溶酶高产菌株的筛选及诱变育种

从豆豉中筛选出1株产纤溶酶的菌株DC33,鉴定为芽孢杆菌属,经过紫外线、^60Co、硫酸二乙酯（DES）、亚硝基呱（NTG）诱变筛选得到突变株DCDU7,其产酶活力为644．77U／mL,是出发菌株的2．4倍。对DCDU7菌株进行了10代的培养,结果表明该突变株具有稳定的遗传性能。     

枯草芽孢杆菌淀粉酶高产菌株的复合诱变研究

该研究以实验室保存的枯草芽孢杆菌为出发菌株,利用紫外和硫酸二乙酯（DES）复合诱变的方法,从大量突变菌株中获取可高效发酵生产淀粉酶的菌株。又通过连续传代实验,确定了该突变菌株突变性状能稳定遗传。结果表明,菌株D-2具有较高的的淀粉酶活力,其淀粉酶活力可达N6．599U／mL,较出发菌株提高到4倍。并在连续培养5代后,仍具有较好的遗传稳定性。该文探讨了一种高效的发酵生产淀粉酶菌株的选育方法,为下一步菌种生长条件优化打下了基础。     

己酸菌的筛选及发酵特性研究

在浓香型白酒生产中,己酸菌是窖泥中的重要功能菌,影响着白酒的品质。本研究通过对老窖泥进行富集培养,分离筛选出1株高产己酸的己酸菌,经16S rDNA鉴定为速生梭菌(Clostridium celerecrescens),命名为E-6。并研究培养时间、培养温度、乙醇添加量对菌株的生长和发酵特性的影响。结果表明,E-6产己酸的最佳培养温度为34℃,乙醇添加量为2 mL/100 mL,此条件下培养10 d左右己酸产量可达到9.4 g/L。     

高产酸及耐酸性干酪乳杆菌的诱变筛选

为筛选高产酸及耐酸的干酪乳杆菌菌株,以干酪乳杆菌LC2W为出发菌株,分别对其进行紫外（Ultraviolet,UV）、亚硝基胍（Nitrosoguanidine,NTG）和硫酸二乙酯（Diethyl sulfate,DES）诱变以及人工胃液处理。结果显示,通过0.3 g/L的亚硝基胍处理30 min和紫外线照射30 s后得到的诱变菌株LC2W-NTG-12,LC2W-UV-11表现出高产酸及耐酸性能。相同条件下,出发菌株LC2W和突变菌株LC2W-NTG-12,LC2W-UV-11经24 h发酵后的滴定酸度分别为76.6°T和112.7°T,98.2°T,突变菌株产酸能力分别提高了47.13%、28.20%。当用p H为1.5的酸液处理2 h后,出发菌株和诱变菌株LC2W-NTG-12,LC2W-UV-11的致死率分别为76.44%、52.06%、56.36%,诱变菌株耐酸能力分别提高了24.38%、20.08%。而用0.16%DES处理30 min得到的诱变菌株LC2W-DES-33发酵后的酸度仅比出发菌株提高了14.10%,诱变效果并不明显。说明亚硝基胍诱变可有效提高干酪乳杆菌的产酸及耐酸性能。      

常压室温等离子体诱变选育高产核黄素枯草芽孢杆菌

该研究以BS120作为出发菌株,通过常压室温等离子体诱变(atmospheric and room temperature plasma,ARTP)技术进行诱变处理,第一轮以40 mg/L 8-氮鸟嘌呤为筛选拮抗物进行筛选,得到核黄素产量和得率分别提升61. 60%和58. 12%的菌株BSG1。第二轮诱变以300 mg/L寡霉素为筛选拮抗物进行筛选,筛选获得菌株BSG3,核黄素产量和得率较BS120分别提升83. 59%和78. 76%。将核黄素操纵子表达质粒pMX45转入BSG3中,得到菌株BSG5,核黄素产量达到(4 467. 08±99. 47) mg/L,得率为(42. 56±1. 25) mg/g葡萄糖,较BS120分别提高140. 94%和120. 52%,展现了良好的核黄素发酵性能和遗传稳定性。     

紫外诱变芽孢杆菌选育木聚糖酶高产菌株

以枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）和蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus）为出发菌株，采用紫外诱变的方法获得了2株木聚糖酶高产菌株，酶活分别是原来的17．50倍和17．20倍。选取酶活最高的菌株进行发酵条件的研究。     

窖池高产己酸菌营养液的制备及培养条件优化

从优质老窖泥中分离出高产酸己酸菌,确定影响己酸生成和己酸菌生长的各因素并通过单因素试验确定最佳发酵条件,温度为35℃、接种量10%、pH6.5～7.5、容积系数90%,在此条件下制备己酸菌液并与老窖池中过滤的混合菌过滤液按照1∶1的比例混合培养作为窖池营养液,通过正交试验确定营养液最佳培养基成分及含量为乙醇浓度1.5%,乙酸钠浓度0.25%,硫酸铵浓度0.05%,磷酸氢二钾浓度0.15%,硫酸镁浓度0.01%,经过7 d无氧发酵培养,己酸产量达到5.7 g/L。本研究为窖池养护液的制备及培养等提供了理论基础。     

窖泥中己酸菌的分离纯化及产酸性能研究

针对三井酒业窖泥中的己酸菌进行了多批次分离纯化及其产己酸性能研究,共得到6株不同菌落形态的己酸菌,其中4#菌株产酸能力突出,可作为试验菌株应用于窖池养护及人工窖泥的生产,用以提高浓香型白酒品质。