荧光微球免疫层析法快速检测基围虾中环丙沙星

本研究将环丙沙星单抗与带羧基的荧光微球偶联标记,将环丙沙星抗原和羊抗鸡IgY分别包被于硝酸纤维膜上作为检测线(T)和控制线(C),然后根据其荧光信号比值(T/C)和样本中环丙沙星药物浓度之间的对应关系建立了一种简单快速、高灵敏检测基围虾样本中环丙沙星药物残留的荧光微球定量免疫层析检测方法,检测过程可在15 min内完成。结果表明,在最优条件下,基围虾样本中的环丙沙星检测范围为0～10 ng·mL^-1,检测限为0.208 ng·mL^-1,回收率为90.59%～111.70%,变异系数为4.20%～10.76%。特异性实验表明环丙沙星抗体与其他喹诺酮类药物交叉反应率较低。本方法灵敏度高、准确度高、性能稳定、特异性好,可较好地满足现场快速定量检测基围虾样本中环丙沙星药物残留的需要。     

肉眼读取-荧光微球竞争免疫层析法半定量快速检测保健食品中的西布曲明

建立一种新型的西布曲明半定量检测方法。通过在检测试纸条上设置4?条包被有抗原的检测线,和被测抗原反应后的剩余标记抗体与包被抗原的反应浓度可梯度降低,实现在单一试纸条构建多级灵敏度的免疫反应,从而建立基于波长470?nm手电筒作为激发光源、肉眼读取结果的西布曲明荧光微球竞争免疫层析半定量检测方法。对吐温-20表面活性剂含量、标记抗体量、包被抗原质量浓度、硝酸纤维膜类型和层析反应时间等参数进行优化,通过试纸条上显色条带的数量对西布曲明进行半定量。结果显示,在优化的实验条件下,该检测方法检出限为0.05?μg/mL,检测范围为0～9.00?μg/mL。该方法无需使用专门的检测仪器,可在15?min内完成检测,其结果与液相色谱-串联质谱法检测结果一致。该方法操作简便、灵敏度高、结果可靠,可用于保健食品中西布曲明非法添加物的定性和半定量筛查分析。     

荧光微球免疫层析方法定量检测水产品中4 种硝基呋喃代谢物

采用荧光微球标记抗体作为信号探针,建立荧光微球免疫层析检测方法（fluorescent microsphere immunochromatographic assays,FMICA）,并应用于水产品中4 种硝基呋喃类兽药代谢物残留量的快速定量检测。结果表明：呋喃妥因、呋喃它酮、呋喃唑酮、呋喃西林代谢物FMICA试纸条的检出限分别为0.004（以1-氨基-乙内酰脲衍生物计算）、0.01（以5-吗啉-3-氨基-2-恶唑烷酮衍生物计算）、0.008（以3-氨基-2-恶唑烷酮衍生物计算）、0.009（以氨基脲衍生物计算）μg/L;检测线性范围分别为0.005～5、0.01～10、0.01～10、0.01～10 μg/L;最佳检测时间为10 min,方法特异性良好。水产样品经衍生化处理后,经检测硝基呋喃代谢物的加标回收率在75.88%～104.81%之间,变异系数均小于15%。FMICA方法操作简单、快速、成本低,适用于水产品中硝基呋喃类兽药代谢物快速定量检测。     

荧光微球免疫层析技术定量检测河鲀毒素

建立河鲀毒素的荧光微球免疫层析检测方法。基于抗体亲和位点保护标记方法制备抗河鲀毒素抗体偶联荧光微球,方法简单稳定,所有结合分离步骤均在亲和柱中完成,避免了亲和位点被破坏而且荧光信号更强,将检测灵敏度提高至原来的8倍左右。所建立的河鲀毒素检测方法IC50为18.4 ng/m L,线性范围为2~200 ng/m L(y=-0.15ln x+0.95,R2=0.98)。检测河鲀样本的最低检出限为10μg/kg,平均相对标准偏差小于25%(n=6)。该方法适用于热加工样品的检测,整个检测过程仅需15 min,且无需使用大型设备,为河鲀餐前速测提供了一定技术手段。     

量子点微球荧光免疫层析定量检测水产、畜禽肉组织中恩诺沙星

目的 建立一种快速定量检测水产、畜禽肉组织中恩诺沙星的新方法学。方法 以量子点荧光微球为新型标记探针,通过参数优化,制备获得量子点荧光微球免疫层析试纸条;进一步以T/C比值法建立定量检测恩诺沙星的新方法。结果 在最优条件下,该试纸条检测缓冲液中恩诺沙星半数抑制浓度为1.035 ng/mL,最低检测限为0.125 ng/mL;检测水产、畜禽肉组织中恩诺沙星的定量检测范围为8.75~560 μg/kg,半数抑制浓度为72.45 μg/kg,加标回收实验显示该方法定量检测组织样本中恩诺沙星的回收率在83.03~124%之间,变异系数小于15%,检测15个实际含有恩诺沙星的水产以及畜禽肉组织样本,其结果与LC/MS/MS方法检测结果高度一致;此外,加速保存实验结果显示该试纸条在室温下可保存一年。结论 本研究以量子点荧光微球为新型标记探针,构建了高灵敏定量检测恩诺沙星的新方法,实现了水产、畜禽肉组织中恩诺沙星的简单、快速、定量分析。     

莱克多巴胺荧光微球免疫层析检测方法的建立

以荧光微球作为新型标记物,采用EDC法进行偶联,制备莱克多巴胺抗体荧光微球复合物,复合物粒度均一、性质稳定,并以之为探针建立莱克多巴胺荧光微球免疫层析检测方法,检测限为2.5ng/mL,且特异性强、检测范围宽。与胶体金免疫层析方法相比,荧光微球免疫层析方法的灵敏度更高,新型的荧光微球可以提高免疫层析方法的灵敏度。     

基于荧光微球的免疫层析法结合免疫磁珠分离技术快速定量检测鼠伤寒沙门氏菌

为了建立一种能快速、灵敏、特异检测鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium,ST)的方法,本研究以荧光微球(FM)为标记物建立了荧光微球免疫层析检测法(FM-ICA),将羧基化的磁性微球与抗体偶联制备了抗-ST免疫磁珠(IMB),并将FM-ICA与IMB联合用于富集和检测三种食品样本中的ST。在优化条件下,FM-ICA检测的线性范围为3.16×10~6~2×10~9 CFU/m L,回收率为80%~120%,变异系数均小于5%。当菌液浓度大于1×10~8 CFU/m L时,结果显示与同属沙门氏菌的交叉反应;而当菌液浓度小于或等于1×108CFU/m L时,常见的12株非目标菌检测结果为阴性,特异性较好。FM-ICA+IMB联合检测三种模拟食品时的回收率为38%~55%,其中,西红柿对回收率影响较小,鸡蛋和猪肉影响较大。然而,联合检测的灵敏度可达到1×10~5 CFU/m L,比单一FM-ICA方法提高了30倍,同时,整个检测过程可在2 h内完成。本检测方法的建立对于快速筛查鼠伤寒沙门氏菌具有重要意义。     

聚集诱导发光微球免疫层析试纸条定量检测水产品中孔雀石绿

目的 建立一种用于定量检测水产品中孔雀石绿的高灵敏免疫层析检测新方法。方法 以聚集诱导发光荧光微球为标记探针,制备荧光免疫层析试纸条,通过T/C比值法构建定量检测孔雀石绿的定量标准曲线,并实现水产品中孔雀石绿的高灵敏、定量检测。结果 本方法定量检测水产品中孔雀石绿具有较高的检测灵敏度,其50%抑制率达到0.17μg/kg,最低检出限为0.05μg/kg。样本加标0.25、0.50、1.00μg/kg的平均回收率介于116.01%～122.76%,变异系数介于8.66%～11.71%(n=10),表明所建立的荧光免疫层析方法定量检测水产品中孔雀石绿具有较好的准确性、精密度。通过检测30份孔雀石绿阴性以及12份阳性的水产样本,结果表明所建立的荧光免疫层析方法无假阳性,且检测孔雀石绿含量与液相色谱-串联质谱法具有良好的一致性(线性相关系数为0.9695)。结论 本研究以聚集诱导发光荧光微球为新型标记探针,建立了一种高灵敏检测水产品中孔雀石绿的定量方法,为水产品中孔雀石绿的筛查检测提供了技术支撑。     

胶体金免疫层析法快速定量检测猪肝中喹乙醇残留

本文研究了胶体金免疫层析试纸条快速定量检测猪肝中喹乙醇残留的方法。利用胶体金免疫层析技术,制备了喹乙醇胶体金试纸条,检测了其特异性,并建立了T/C比值法进行定量检测猪肝中喹乙醇的残留。制备的试纸条可以在15min内完成定性和定量检测,与卡巴氧、乙酰甲喹和3-甲基-喹噁啉-2-羟酸几乎无交叉反应。当肝中喹乙醇质量浓度在1~200ng/mL范围内,试纸条有较好的线性关系,最低检测限为6.83ng/mL。阴性加标实验结果表明,喹乙醇浓度在25、50、100ng/mL时,试纸条的回收率在90.9%~105.0%之间。     

胶体金免疫层析法快速定量检测猪肝中喹乙醇残留

本文研究了胶体金免疫层析试纸条快速定量检测猪肝中喹乙醇残留的方法。利用胶体金免疫层析技术,制备了喹乙醇胶体金试纸条,检测了其特异性,并建立了T/C比值法进行定量检测猪肝中喹乙醇的残留。制备的试纸条可以在15min内完成定性和定量检测,与卡巴氧、乙酰甲喹和3-甲基-喹噁啉-2-羟酸几乎无交叉反应。当肝中喹乙醇质量浓度在1²00ng/mL范围内,试纸条有较好的线性关系,最低检测限为6.83ng/mL。阴性加标实验结果表明,喹乙醇浓度在25、50、100ng/mL时,试纸条的回收率在90.9%¹05.0%之间。      

Gold nanoparticle-based lateral flow assay for detection of staphylococcal enterotoxin B

The lateral flow assay (LFA), a rapid, sensitive, and reproducible technique, was successfully applied to detect staphylococcal enterotoxin B (SEB). The assay was based on a double-antibody sandwich format on a porous nitrocellulose membrane. When SEB-containing samples were applied to the LFA-device, the toxin initially reacted with polyclonal antibody (Pab)-coated colloidal gold particles and then reacted with the fixed Pab on the membrane. These reactions resulted in a red line at the detection zone, with intensity proportional to the SEB concentration (under 100 ng/ml). With this method, 1 ng/ml of SEB can be detected in less than 5 min and was highly reproducible. Signal can be amplified to 10 pg/ml by silver enhancement. This assay also showed no cross-reaction with other SEs, such as SEA, SEC, SED and SEE. The assay was significantly faster than the ELISA or real-time PCR assay and should facilitate early and rapid SEB detection in clinical and food samples.     

Nanozyme-based lateral flow assay for the sensitive detection of Escherichia coli O157:H7 in milk

Lateral flow assay (LFA) has been applied in many fields due to its relative ease of use and cost-effectiveness. However, it has low sensitivity and its applications are limited. Probe materials play a significant role in improving the detection efficiency and sensitivity of LFA. In this study, by using concave palladium-platinum (Pd-Pt) nanoparticles as a nanozyme probe, we developed a sensitive LFA based on the sandwich format for qualitative and quantitative detection of Escherichia coli O157:H7. The sensitivity of the LFA was improved by applying the 3,3′,5,5′-tetramethylbenzidine (TMB) substrate onto the test line where the nanozyme was accumulated in the presence of analytes. The nanozyme showed high catalytic performance toward TMB and greatly enhanced the signal intensity of the test line. The sensitivity of the nanozyme-based LFA was 9.0 × 10² cfu/mL in milk, which was 111-fold higher than that of traditional colloidal gold-based LFA. The proposed method has remarkable potential in the detection of various pathogens in real samples.     

A novel extraction method for peanut allergenic proteins in chocolate and their detection by a liposome-based lateral flow assay

In this study, conditions for extracting the major peanut allergen (Ara h1) from chocolate were optimized, and the extracted samples were analyzed by a lateral flow assay (LFA) using liposomal nanovesicles. The optimal conditions using peanut-spiked chocolate were found to be extraction with a mixture of phosphate buffered saline and hexane for 30 min at 35 °C. After centrifugation, the buffer portion was treated with insoluble poly(vinylpolypyrrolidone) to remove phenolic compounds, and then analyzed by the LFA. The entire analysis, including sample preparation and LFA, could be easily completed within 2 h, and the detection limit was 158 g of peanuts/g of chocolate.     

时间分辨荧光免疫层析法定量检测稻谷中的镉

本研究制备了一种用于稻谷中镉检测的时间分辨荧光免疫层析定量检测卡。采用铕纳米微球作为荧光探针,标记抗Cd-EDTA的单克隆抗体,基于竞争抑制原理建立免疫层析定量方法并对其进行方法学研究。结果表明：定量检测卡的灵敏度为0.088 ng/mL,标准曲线线性范围为0.1ng/mL～5.0 ng/mL,检出限和定量限分别为0.026 mg/kg和0.064 mg/kg,对有证标准物质的正确度在81.0%~91.7%之间,对实际样本的检测与ICP-MS检测结果一致性较高。该法重复性较好,变异系数在10%以内。结果显示,该法灵敏度高、操作简便、成本低廉,因此,非常适合基层单位大量样本的快速初步筛查。     

侧向层析免疫试纸法快速检测蔬菜中的腐霉利

目的建立基于胶体金标记的侧向层析免疫试纸快速检测新技术检测多种蔬菜中腐霉利的分析方法。方法利用喷膜仪以0.5μL/cm的喷速将1 mg/mL的羊抗鼠抗体、1 mg/mL的腐霉利包被原喷到NC膜上。再通过静电吸附的方式将腐霉利单克隆抗体标记到胶体金表面,制备成偶联物滴加到标记垫上。最后依次将样品垫,标记垫、划好的NC膜以及吸水垫粘贴到底板上,两者之间均有2 mm的重叠,使标记垫处于样品垫之下、NC膜之上的位置,组装好完整的试纸条,测试过程中在样品垫上滴加样品,观察C、T线位置显线情况进行判定。结果该方法不受蔬菜中本身复杂成分以及背景颜色的影响,能够对蔬菜中腐霉利进行特异性识别鉴定, 10 min便可获得检测结果。结论该方法测试的结果与仪器法检测结果一致,检测灵敏度满足国标限量要求。     

纳米酶侧流免疫层析法快速检测食品中肠炎沙门氏菌

目的 基于氧化铈修饰的金纳米棒(CeO2 modified Au nanorod, AuNR@CeO2)纳米酶构建纳米酶侧流免疫层析法(lateral flow immunoassay, LFIA), 并用以检测食品中肠炎沙门氏菌。方法 采用模板法制备AuNR@CeO2纳米酶, 对纳米酶的酶促活性进行考察。将AuNR@CeO2标记抗体作为信号探针进一步构建试纸条, 优化其关键参数, 并利用AuNR@CeO2纳米酶的酶促活性, 催化放大试纸条的比色信号, 最后将其用于奶粉中肠炎沙门氏菌的检测。结果 成功制备了AuNR@CeO2纳米酶, 在最优条件 下(即：2% BSA+0.05% Tween-20的样品垫缓冲体系、0.8 mg/mL的T线抗体质量浓度和4 μL的探针使用量), 该试纸条可以实现目标菌的特异性检测, 检出测限 低至103 CFU/mL, 信号放大后灵敏度提高了10倍, 在人工污染奶粉样品中也表现出良好的检测效果 检出限低至103 CFU/mL。结论 本研究所制备的试纸条无需复杂仪器和专业人员即可实现目标物的检测, 且具有易操作、便携、快速的特点, 通过更换抗体类型便可用于各类食品有害物质的检测。     

QD-Infinity免疫荧光定量法快速测定玉米中呕吐毒素的适用性研究

目的建立QD-Infinity免疫荧光法快速测定玉米中呕吐毒素含量的方法,为玉米中呕吐毒素现场筛查提供快速、有效的检测/监测手段。方法通过测定玉米质控样、阴性玉米的添加回收率,与高效液相色谱(high performance liquid chromatography, HPLC)法测定天然玉米进行比较,对QD-Infinity免疫荧光测定法的准确度、精密度及其检出限与定量限进行全面评估。结果玉米质控样中呕吐毒素含量测定值均在其理论值范围内;回收率结果为109.77%、107.83%和111.01%,变异系数分别为9.77%、7.83%、11.01%;与HPLC法相比,测定26份玉米结果的相对偏差在1.20%～5.78%之间;该方法的检出限与定量限分别为10μg/kg、32μg/kg。结论 QD-Infinity免疫荧光法是一种有效、实用的分析方法,能用于玉米中呕吐毒素的定量检测。     

Development of a quantitative lateral flow immunoassay for the detection of aflatoxins in maize

An immunoassay-based lateral flow device for the quantitative determination of four major aflatoxins in maize has been developed. The one-step assay has performance comparably with that of other screening methods, as confirmed by the intra- and the inter-day precision of the data (RSD 10–22%), and can be completed in 10?min. Quantification was obtained by acquiring images of the strip and correlating intensities of the coloured lines with analyte concentration by means of a stored calibration curve carried out by diluting aflatoxins in the extract from a blank maize sample. Limit of detection (1?µg?kg^–1) and dynamic range (2–40?µg?kg^?1) allows the direct assessment of aflatoxin contamination in maize at all levels of regulatory relevance. All reagents are immobilized on the lateral flow device. In addition, very simple sample preparation, using an aqueous buffered solution, has been demonstrated to allow the quantitative extraction of aflatoxins. Twenty-five maize samples were extracted with the aqueous medium and analyzed by the developed assay. A good correlation was observed (y?=?0.97x?+?0.07, r ^2?=?0.980) when data was compared with that obtained through an official method. The developed method is reliable, rapid and allows for application outside the laboratory as a point-of-use test for screening purposes.