液相色谱法与氨基酸分析仪法测定人乳中水解氨基酸的比较研究

目的研究氨基酸自动分析仪法和液相色谱法测定人乳中水解氨基酸含量的比较。方法采用液相色谱柱前衍生和氨基酸分析仪测定人乳中水解氨基酸,液相色谱法选用C18+柱和AQC进行衍生,氨基酸分析仪采用阳离子交换柱和柱后茚三酮衍生。结果两种方法的方法学参数无明显差异,所测结果差异均在4.65%以内。结论两种方法均可采用,可作为互相验证的方法。     

柱前衍生RP-HPLC测定杨树花中氨基酸含量

【摘要】目的 建立一种采用柱前衍生-反相高效液相色谱法检测杨树花中游离氨基酸和水解氨基酸含量的方法。方法 以异硫氰酸苯酯进行柱前衍生, 采用高效液相色谱法检测杨树花中游离氨基酸和水解氨基酸含量。结果 21种氨基酸线性范围为0.0019～2.7000 μmol?mL－1, R2均＞0.9990; 21种游离氨基酸的平均加样回收率在88.25％～100.04%之间、RSD 为0.57％～2.73％(n=6), 水解氨基酸的平均加样回收率在90.21％～100.01％之间、RSD 为0.52％～2.32％(n=6)。结论 该方法稳定、快速、精密度高、线性范围宽, 适合杨树花中游离氨基酸和水解氨基酸的含量测定。     

氨基酸分析仪和HPLC测定食品中牛磺酸的研究比较

分别采用不同的仪器及方法:氨基酸分析仪茚三酮柱后衍生和高效液相色谱丹磺酰氯柱前衍生,建立对食品中牛磺酸测定的方法,比较了两种方法的检出限、定量限以及回收率等,结果表明两种仪器方法各有优点,适应在不同情况下对食品中牛磺酸进行测定。     

反相高效液相色谱法测定白屈菜种子中挥发油 成分分析及氨基酸含量

目的研究白屈菜种子中挥发油的化学成分并建立一种反相高效液相色谱法对白屈菜种子中游离氨基酸和水解氨基酸含量进行测定。方法采用气质联用的方法对白屈菜种子中的挥发油成分进行分析,采用反相高效液相色谱法,以异硫氰酸苯酯为衍生试剂进行柱前衍生,采用梯度洗脱的方法,检测白屈菜种子中游离氨基酸和水解氨基酸含量。结果挥发油中共鉴定出化学成分27个,其中亚油酸的含量最高可达到65%左右。氨基酸的检测浓度线性范围为0.0020~0.2700 mmol/L,r均≥0.9991。21种游离氨基酸的平均加样回收率在87.88%~100.10%之间,RSD在0.62%~2.58%之间(n=6);水解氨基酸的平均加样回收率在91.79%~100.03%之间,RSD在0.48%~1.97%之间(n=6)。结论白屈菜种子种中挥发油的主要成分为不饱和脂肪酸,本文建立的氨基酸测定方法经方法学验证适合白屈菜种子中游离氨基酸和水解氨基酸的含量测定。     

树头发的氨基酸含量分析

采用异硫氰酸苯酯(PITC)柱前衍生,反相高效液相色谱法即PICO-TAG方法对树头发的氨基酸含量进行测定,得出树头发的氨基酸色谱图。结果表明:除色氨酸被水解破坏而未检出外,树头发具有16种氨基酸,9种必需氨基酸,其氨基酸的总含量达179.652μg/mg,总必需氨基酸含量为63.546μg/mg,必需氨基酸含量占总含量的35.37%,该测定结果为树头发的药用开发提供参考。     

烟草中游离氨基酸的分析方法及研究方向

游离氨基酸是烟草中的重要化合物,对烟草香味物质的形成有着重要的作用。烟草游离氨基酸的分离和定量鉴定方法主要有：9－芴氯甲酸甲酯作为预柱衍生试剂的高压液相色谱法、氯甲酸乙酯作为衍生试剂的毛细管气相色谱法以及氨基酸自动分析仪法。其中,氨基酸自动分析仪更适合分离和鉴定烟草游离氨基酸。同时指出,对低焦油混合型卷烟－白肋烟进行氨基酸分析,以期找出最佳工艺,可以更有效地提高我国混合型卷烟的质量。     

液相色谱法与氨基酸分析法测定食品中甘氨酸的比较研究

建立对食品中游离甘氨酸经提取、净化等处理后,邻苯二甲醛衍生,经高效液相色谱测定分析,并将该方法与氨基酸分析仪测定甘氨酸的方法进行比较研究。通过对市售的液体乳、含乳饮料(品)类和植物蛋白饮料(品)类中游离甘氨酸分别应用两种方法进行测定,结果表明,氨基酸分析仪法测定甘氨酸具有测定结果稳定准确、检出限低和操作简单的特点,而液相色谱法(荧光检测器)测定甘氨酸检测时间快,检出限也能满足常规检测的需要,因此,在实际应用中,两种方法均可采用,可作为互相验证的方法。     

反相高效液相法测定发酵豆粕中的17种氨基酸含量

采用异硫氰酸苯酯(PITC)柱前衍生反相高效液相色谱法测定豆粕和发酵豆粕中17种氨基酸含量,以氨基酸 C18色谱柱为分析柱,采用紫外检测器,35 min内能够很好的分离17种氨基酸。氨基酸峰面积与氨基酸浓度之间的线性关系较好,加标回收率较高。试验结果表明本方法操作简单、灵敏度高,适用于豆粕和发酵豆粕中氨基酸的测定。     

6种葡萄籽中水解氨基酸和游离氨基酸含量测定及比较

以异硫氰酸苯酯为柱前衍生试剂,采用Thermo Acclaim~(TM) 120 C_(18)色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相A为pH 6.5的乙酸钠缓冲溶液,流动相B为甲醇—乙腈—水(体积比20:60:20),在流速1.0mL/min,梯度洗脱,柱温30℃,检测波长254nm的条件下,建立了高效液相色谱法测定葡萄籽中水解氨基酸和游离氨基酸的含量。结果表明,在试验浓度范围内,17种氨基酸的R~2均0.999 0;水解氨基酸的加样回收率为92.0%～104.6%,RSD为0.83%～4.07%;游离氨基酸的加样回收率为95.2%～102.4%,RSD为1.06%～3.98%。同时,6种葡萄籽中水解氨基酸的含量为130.46～163.24 mg/g,游离氨基酸的含量为2.04～5.13mg/g;用于酿造白葡萄酒的雷司令、赛美容和贵人香3种葡萄籽中游离氨基酸含量较高,用于酿造红葡萄酒的黑皮诺、蛇龙珠和赤霞珠3种葡萄籽中水解氨基酸含量较高。该方法稳定可靠,可用于葡萄籽中水解氨基酸和游离氨基酸的含量测定。     

柱前衍生反相高效液相色谱法测定狭叶红景天中氨基酸含量

目的建立柱前衍生反相高效液相色谱法(reversed-phase high-performance liquid chromatography,RP-HPLC)测定狭叶红景天中游离及水解氨基酸种类及含量。方法以异硫氰酸苯酯为柱前衍生化试剂;色谱柱采用Ultimate Amino Acid氨基酸柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相A为80%(V:V)的乙腈-水溶液,流动相B为7%(V:V)的乙腈-CH_3COONa溶液(pH=6.5);检测波长为254 nm。结果 21种氨基酸在0.0019~2.700mmol/L内呈良好的线性关系(r~20.9990)。游离氨基酸平均回收率在97.80%~116.82%之间,RSD在1.93%~2.47%之间(n=6);水解氨基酸平均回收率在99.26%~111.23%之间,RSD在1.70%~2.23%之间(n=6)。结论柱前衍生RP-HPLC法灵敏、准确,具有良好的重复性和稳定性,适合对狭叶红景天中氨基酸含量的测定。     

现行黄曲霉毒素液相色谱检测法的比较与评价

目的 综合评价检测黄曲霉毒素的几种现行液相色谱-荧光法。方法 采用均质(涡旋)、超声辅助液液萃取技术对样品中的黄曲霉毒素进行提取, 免疫亲和柱和多功能柱净化。并采用不同的检测技术[三氟乙酸(TFA)柱前衍生法、光化学柱后衍生法、碘和溴柱后衍生法、大体积流动池直接检测及光化学柱后衍生串联大体积流动池]对玉米质控样品中黄曲霉毒素进行了分析。结果 各方法的检测结果均较理想, 可满足常规样品的检测要求。结论 超高压液相色谱-大体积流动池检测法在有效提高工作效率的同时, 大量减少了有毒有害试剂的使用量, 且具有最高的检测灵敏度, 可满足GB 2761-2011中对各类样品中黄曲霉毒素的限量要求。采用乙腈-水或甲醇-水体系均能达到较好提取黄曲霉毒素的目的。免疫亲和柱的净化效果较多功能柱好。     

高效液相色谱法检测食品中17种游离氨基酸

目的使用异硫氰酸苯酯衍生-高效液相色谱法对食品中17种游离氨基酸进行检测。方法对17种游离氨基酸及其苯胺硫甲酰基衍生物稳定性的分析,研究游离氨基酸的最佳衍生条件。同时,对盐沉淀法和C_(18)固相萃取(solid phase extraction, SPE)小柱法2种样品除杂方法的加标回收率进行测定。结果胱氨酸加热干燥5h后,回收率为68.46%±4.01%,热稳定性差;其它16种氨基酸加热1～5h后回收率均在90%～110%之间,热稳定性较好。胱氨酸的苯胺硫甲酰基衍生物,6h后回收率仅为11.04%±1.65%,稳定性差;其它氨基酸的苯胺硫甲酰基衍生物24 h后回收率均大于90%,比较稳定。另外,前处理中使用C_(18) SPE除杂时,样品中游离氨基酸的加标回收率均大于70%,而使用水杨酸和三氯乙酸除蛋白后苯胺硫甲酰基衍生物降解严重。结论除胱氨酸外,其余16种氨基酸的热稳定性均较好,且生成的苯胺硫甲酰基衍生物比较稳定,可以通过异硫氰酸苯酯衍生进行定量分析。相比于水杨酸和三氯乙酸沉淀法, C_(18) SPE柱是游离氨基酸除杂方法的首选,而无机盐影响异硫氰酸苯酯与氨基酸衍生,因此此方法不适用于含盐样品的衍生。     

盐酸水解方法对鸡肉中氨基酸含量的影响

摘 要: 目的 研究盐酸水解过程中, 水解时间和添加巯基乙醇和苯酚保护剂对鸡肉中18种氨基酸含量的影响, 确定获得鸡肉氨基酸最高含量的盐酸水解方法。方法 以30个鸡胸肌(3种鸡、每种10个)为实验对象, 设计6个水解时间, 研究盐酸水解时间对鸡肉样品中18种氨基酸含量的影响, 确定获得氨基酸最高含量的盐酸水解时间。在上述研究的基础上, 随机选择6个鸡胸肌(3种鸡、每种2个)为实验对象, 设置3个水解时间, 研究巯基乙醇和苯酚对鸡肉样品中18种氨基酸含量的影响, 最终确定获得鸡肉中18种氨基酸最高含量的盐酸水解方法。结果 缬氨酸(valine, Val)和异亮氨酸(isoleucine, Ile)的最佳水解时间为24或26 h, 两水解时间无显著性差异(P>0.05); 其余16种氨基酸的最高含量均在22 h; Ile的含量在盐酸水解法水解24 h显著高于20 和22 h(P<0.05), 但在苯酚+盐酸水解法水解22h含量最高; 天冬氨酸(aspartate, Asp) 的含量在巯基乙醇+盐酸水解法水解22 h显著高于20 和24 h(P<0.05), 但在盐酸水解法水解22h含量最高; 甘氨酸(glycine, Gly)、丙氨酸 (alanine Ala)、酪氨酸(tyrosine, Tyr) 和苯丙氨酸 (phenylalanine, Phe)的含量在苯酚+盐酸水解法水解22 h显著高于20 h(P<0.05), 但水解22与24 h之间无显著性差异(P>0.05), 其中, Gly在苯酚+盐酸水解法水解22 h含量最高, Ala在盐酸水解法水解22 h含量最高, Tyr和Phe在巯基乙醇+盐酸水解法水解22 h含量最高; Val在盐酸水解法水解24 h含量最高, 脯氨酸(proline, Pro)和赖氨酸 (lysine, Lys)在苯酚+盐酸水解法水解22 h含量最高, 亮氨酸 (leucine, Leu) 在巯基乙醇+盐酸水解法水解22 h含量最高; 其余氨基酸在不同水解方法及水解时间中均无显著性差异(P>0.05), 但都在盐酸水解法水解22 h时含量最高。结论 巯基乙醇和苯酚对鸡肉中的含硫氨基酸无保护作用, 获得鸡肉中18种氨基酸最高含量的盐酸水解方法是盐酸水解法水解22 h。     

响应面法优化浙贝母氨基酸提取工艺及含量测定

采用响应面法优化浙贝母氨基酸提取条件,建立柱前衍生-超高效液相色谱法(ultra-performance liquid chromatography,UPLC)测定浙贝母鳞茎中14种氨基酸含量方法,比较不同产地栽前与栽后浙贝母鳞茎氨基酸含量差异性。采用6 mol/L HCl 8 mL,超声30 min,在110℃下水解20 h提取浙贝母鳞茎中氨基酸,以异硫氰酸苯酯(phenyl isothiocyanate,PITC)柱前衍生化,UPLC检测,使用ACQUITY UPLC BEH C 18色谱柱(2.1 mm×150 mm,1.7μm),流动相A为0.1 mol/L乙酸钠溶液(冰醋酸调pH=6.5)-乙腈(体积比97∶3),B为乙腈-水(体积比4∶1),梯度洗脱,检测波长为254 nm,流速0.2 mL/min。14种氨基酸线性关系良好(r≥0.9992),平均加样回收率为95.12%~105.53%,RSD<3%,表明该方法准确可靠。不同产地栽前栽后浙贝母氨基酸含量具有一定差异。该方法确定了提取浙贝母氨基酸的最优条件,可用于浙贝母鳞茎中氨基酸的含量测定。     

常用炮制方法对巴戟天中游离氨基酸成分的影响

目的：建立氨基酸柱前衍生反向色谱测定法,分析比较巴戟天不同炮制品中氨基酸的差异,为其质控体系提供依据。方法：以水为溶剂,超声法提取巴戟天中的氨基酸,以异硫氰酸苯酯（PITC）柱前衍生,检测波长254nm,Sinergi 4u fusion-RP色谱柱（Phenomenex,250mm×4.6mm,4μm）,柱温35℃,测定氨基酸的含量。结果：4～5年生巴戟天生品中含有14种游离氨基酸,酒蒸氨基酸总量较生品增加约14.8%,盐蒸和甘草制氨基酸总量基本不变,盐炒氨基酸总量减少约12.4%,酒炒氨基酸总量减少约43.9%。结论：本法操作简便、灵敏度高,结果准确、可靠。巴戟天生品酒蒸后游离氨基酸总量显著增加,盐蒸和甘草制者基本不变,盐炒和酒炒者均显著降低,提示不同炮制方法对巴戟天游离氨基酸含量影响有显著差异,其机制值得深入研究。     

氨基酸分析测定及衍生化方法

该文综述氨基酸分析方法进展和分类,并对柱前衍生化RP-HPLC分析氨基酸方法及常用衍生化方法进行比较和探讨。     

柱前衍生/超高效液相色谱法测定纺织品中的甲醛

建立了一种柱前衍生/超高效液相色谱分析方法,对纺织品中的甲醛进行了测定,并对衍生条件、衍生产物的提取条件和色谱分离条件进行了优化。该方法线性关系良好,线性相关系数为0.9999,线性范围为0.05～83.2mg/L,平均回收率为99.30%～101.11%,检出限为0.01mg/L(S/N=3)。该方法的准确度和精密度均较高,完全满足甲醛测试的要求。采用该方法对市售样品进行了测试,并与比色法的测试结果进行了对比,结果表明两种方法的测试结果无显著性差异。     

柱前衍生反相高效液相色谱法测定新疆特色食品馕中氨基酸含量

目的建立柱前衍生反相高效液相色谱法(reversed-phase high performance liquid chromatography,RP-HCLP)测定新疆特色食品馕中17种氨基酸含量的检测方法。方法通过优化酸水解参数,并以6-氨基喹啉-N-羟基琥珀酰亚胺基甲酸酯为衍生试剂,用乙腈为流动相A,水为流动相B,磷酸盐缓冲液溶液为流动相C进行梯度洗脱,柱温37℃条件下用AccQ-Tag色谱柱(3.9 mm×150 mm, 4μm)进行分离,采用反相-高效液色谱法荧光检测器(激发波长250 nm、发射波长395 nm)进行测定。结果当取样量为100 mg、水解液加入体积为10 mL、水解温度为115℃、水解时间为24 h时,水解效果最好。17种氨基酸线性回归方程的相关系数在0.9985以上(n=3),检出限为0.011~0.058mg/L,回收率为81.6%~116.2%,相对标准偏差为0.41%~6.94%(n=3)。结论该方法操作简单、灵敏度高、线性关系和回收率好,适用于新疆特色食品馕中氨基酸含量的测定。     

Determination of sulfur-containing amino acids in food products

To define the most accurate method for determination of sulfur-containing amino acids in foods, the possibility was tried of using a method suggested by Moore. The method is based on preliminary oxidation of cystine and methionine by performic acid and transformation of these substances to acid hydrolysis resistant cysteic acid and methionine sulphone. Model experiments and use of foods (wheat flour, grade II, and protein part of chicken egg) demonstrated that exposure of proteins to performic acid brings about oxidation of sulfur-containing amino acids to the hydrolysis-resistant forms which may be defined by chromatography with a greater accuracy. Experiments without preliminary oxidation by performic acid showed that foods experience an appreciable destruction (by 30-60%) of cystine and methionine. Therefore, it is advisable that during studies into amino acids contained by proteins, additional hydrolysis may be performed with preliminary oxidation of the samples by performic acid, which enables the determination of the content of methionine and cystine with a greater accuracy.     

活性炭静态吸附草鱼蛋白水解物中氨基酸特性的研究

研究了6种活性炭对草鱼蛋白水解物中氨基酸的吸附情况。发现AK-220型活性炭的静态吸附量最大,且吸附可使酶解液颜色和风味有良好改善;AK-220对芳香氨基酸（AAA）的吸附能力明显优于其对支链氨基酸（BCAA）的吸附程度,同时还可吸附一定数量的肽分子。