苯胺嘧啶类杀菌剂嘧霉胺人工抗原的合成与鉴定

[目的]合成嘧霉胺完全抗原并加以鉴定。[方法]对嘧霉胺的结构进行设计,合成N-(4,6-二甲基嘧啶基-2-基)-1,4-苯二胺,通过与琥珀酸酐合成引入羧基得到嘧霉胺的半抗原。用混合酸酐法将半抗原与牛血清白蛋白(BSA)偶联制备免疫原,用活泼酯法将半抗原与卵清蛋白(OVA)偶联制备包被原。[结果]半抗原的结构经~1H NMR以及HPLC-MS确证。经紫外光谱分析,计算得出半抗原与牛血清白蛋白和卵清蛋白的结合比分别为14∶1和8∶1。[结论]通过嘧霉胺半抗原的合理设计,建立快速有效的嘧霉胺ELISA检测方法。     

T-2毒素人工抗原的制备

在蒸气浴条件下,T-2毒素与琥珀酸酐(HS)反应合成了T-2HS,薄层层析显示,目标半抗原合成成功;然后通过碳二亚胺法将半抗原与载体蛋白偶联制备人工抗原,采用紫外扫描及SDS-PAGE鉴定。结果显示,T-2HS能与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)结合生成T-2毒素抗原。紫外扫描分析表明,T-2毒素与牛血清白蛋白的偶联比为6.66∶1、与卵清蛋白的偶联比为10.11∶1,表明此完全抗原能够用于免疫动物。为进一步制备T-2毒素抗体奠定了基础。     

溴氰菊酯人工抗原及多克隆抗体制备

以二溴菊酸和4-[(4-硝基苯)氧基[苯甲醛为原料经4步反应合成了溴氰菊酯半抗原1-氰基[4-(4-氨基苯)苯基]甲基-2,2-二甲基3-(2',2'-二溴乙烯基)环丙烷羧酸酯;用重氮化法将溴氰菊酯半抗原分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)相偶联制备免疫抗原和包被抗原,紫外吸收法估算偶联比分别为11:l和8:1;以BSA偶联物作免疫抗原免疫日本大耳白兔制备溴氰菊酯多克隆抗体,间接非竞争ELISA法测定两个抗血清效价分别为100000和80000,间接竞争ELISA法测定抗体特异性结果表明所制备的抗体测定溴氰菊酯的IC50值为0.16 mg/L,与其他供试农药的交叉反应率均≤1%.制备的溴氰菊酯人工抗原和多克隆抗体为研究建立溴氰菊酯农残免疫快速测定方法奠定了基础.     

烟嘧磺隆人工抗原的合成与鼠源多克隆抗体的制备

为了制备烟嘧磺隆的多克隆抗体、建立烟嘧磺隆残留的免疫分析方法,以2-氨基磺酰基-N,N-二甲基烟酰胺(ASDM)和琥珀酸酐为原料合成半抗原,采用活泼酯法制备人工抗原并免疫小鼠。结果表明:经紫外可见吸收光谱扫描和聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定,人工抗原合成成功,半抗原与卵清蛋白(OVA)、牛血清白蛋白(BSA)的偶联比分别为10.5∶1和26.9∶1。5次免疫后小鼠抗血清的效价均达到1∶16 000以上,以ASDM-BSA为免疫原的小鼠产生了抑制烟嘧磺隆的多克隆抗体,建立的间接竞争ELISA方法对烟嘧磺隆的检测范围是1ng·mL-1~10μg·mL-1。为进一步建立更为高效、灵敏和方便的烟嘧磺隆ELISA检测方法提供了参考。     

氰戊菊酯免疫分析关键试剂人工抗原的合成与应用效果

以氰戊菊酸、间苯氧基苯甲醛为原料,利用酰氯与伯胺的活泼反应,合成了一种含有3个碳原子长度连接臂的氰戊菊酯半抗原,并通过核磁共振鉴定;用活泼酯法将合成的氰戊菊酯半抗原分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联制备免疫抗原和检测抗原,紫外-可见连续光谱扫描结果显示,所制备的人工抗原的图谱具有载体蛋白和半抗原的特征峰叠加现象,表明偶联成功;人工抗原的免疫结果显示,以BSA偶联物免疫小鼠后获得抗血清效价分别为160 000、140 000和110 000,间接竞争ELISA(酶联免疫吸附分析)测定抗体IC50(半数抑制浓度)值为35.1 μg/L,与其他供试农药的交叉反应率均＜1%,为氰戊菊酯抗体研制及免疫分析检测技术研究提供了关键试剂.     

一种新型溴氰菊酯农药半抗原的合成及应用效果

利用化学方法合成了一种溴氰菊酯新型半抗原,并通过核磁共振鉴定;用活泼酯法和EDC法将溴氰菊酯半抗原分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联制备免疫抗原和包被抗原,紫外吸收法鉴定表明吸收峰出现在305nm,发生了红移,计算偶联比分别为7:1和6:1;免疫小鼠后获得抗体的效价为64 000,IC<,50>为0.16μg/mL.研究为研制溴氰菊酯农药残留免疫速测试剂,建立免疫速测技术奠定了基础.     

毒死蜱人工抗原的合成及多克隆抗体制备

由毒死蜱与3-巯基丙酸在碱性条件下反应,合成了毒死蜱半抗原。然后通过碳二亚胺法将毒死蜱半抗原分别与牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清白蛋白(OVA)共价偶联,得到了免疫抗原和包被抗原。用免疫抗原免疫兔子获得了高效价的多克隆抗体,抗血清效价达到了1:160000。通过试验确立了毒死蜱标准曲线,检测限为0.5μg.L-1,抑制中浓度I50为18.2μg.L-1,检测线性范围为1.8～1000μg.L-1。     

双酚A人工抗原的合成与表征

双酚A经过重氮化引入羧基,再经碳化二亚胺法与牛血清白蛋白偶联,成功合成了双酚A人工抗原,为其免疫分析方法的建立打下了基础.产物经红外和紫外光谱分析确证.     

邻苯二甲酸酯类半抗原的设计合成与抗原制备

4-硝基邻苯二甲酸分别与正丁醇和2-乙基己醇发生酯化反应,再经Fe粉还原,制备两种邻苯二甲酸酯类(PAEs)半抗原——4-氨基邻苯二甲酸二丁酯(Ⅱa)和4-氨基邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯(Ⅱb),再将半抗原Ⅱb与戊二酸酐进行酰胺化反应,制备出第3种PAEs半抗原4-戊二酸单酰胺邻苯二甲酸(2-乙基己)酯(Ⅱc),产品结构经熔点、1HNMR和MS表征。将半抗原Ⅱa~c分别与牛血清载体蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联,制备得到6种PAEs人工抗原Ⅲa~c和Ⅳa~c,并用紫外吸收光谱进行分析表征。     

4-甲基苯酚多克隆抗体的制备及应用

针对4-甲基苯酚(4-MP)的结构特点及半抗原设计原则,选择对羟基苯丙酸(34-HPA)作为半抗原,通过活化酯法与牛血清白蛋白(BSA)偶联合成人工免疫原,免疫3～4 m的雄性大白兔,制得多克隆抗体效价为1∶204 800。同时采用混合酸酐法合成半抗原-卵清蛋白(OVA)偶联物作为包被原,以4-MP为竞争的抗原,建立间接竞争ELISA检测方法。实验结果表明,理想工作条件为:包被原浓度1.05μg/mL,抗体稀释倍数1∶12 800,酶标二抗稀释倍数1∶1 000,0.1%明胶封闭1.5 h,竞争时间与酶标二抗反应时间均为1.0 h。4-甲基苯酚在δ1.0×10-2～1.0×103的范围内呈线性相关,得标准曲线方程y=-12.76x+66.66,最低检测限δ0.02,板内差异为7.0%,板间差异为8.4%。     

西维因人工抗原的合成新方法

用对硝基苯氯甲酸酯活化萘酚并与6-氨基己酸反应,合成了完全保留氨基甲酸酯结构的半抗原6-(1-萘氧基甲酰胺基)己酸(CNH),并采用活化酯法与载体蛋白共价连接制备了突出西维因结构特征的抗原. 用正交实验选择活化酯法的最佳实验条件,并进一步详细考察了半抗原与载体蛋白结合率随外界条件的改变,从而制得不同结合比的抗原. 用紫外和红外对制得的抗原进行了鉴定.     

磺胺二甲嘧啶完全抗原的制备及鉴定

目的制备磺胺二甲嘧啶(Sulfadimidine,SM2)完全抗原,并进行鉴定。方法采用重氮化偶联法制备SM2免疫抗原(SM2-BSA)和检测抗原(SM2-OVA),定性和定量分析偶联后的完全抗原,并制备SM2单抗。结果经1%琼脂糖凝胶电泳和10%SDS-PAGE分析表明,完全抗原SM2-BSA和SM2-OVA偶联成功;SM2与载体蛋白BSA和OVA的分子结合比分别为23∶1和17∶1;SM2-BSA和SM2-OVA的蛋白浓度分别为3.24和2.29 mg/ml;完全抗原SM2-BSA能刺激小鼠产生高效、特异的抗SM2抗体;SM2单抗与OVA和BSA无交叉反应。结论已成功制备了完全抗原SM2-BSA和SM2-OVA,为下一步建立灵敏度更高、特异性更强、操作更简便的免疫学检测方法奠定了基础。     

环境荷尔蒙邻苯二甲酸二甲酯的人工全抗原合成与表征

4-硝基邻苯二甲酸经过酯化、还原和与牛血清白蛋白偶联,成功合成了邻苯二甲酸二甲酯人工抗原,为其免疫分析方法的建立提供了条件。产物经红外光谱、紫外光谱和核磁共振鉴定分析确定。     

Characterization and comparison of fumonisin b(1)-protein conjugates by six methods

In order to generate an antibody against a small hapten molecule, the hapten is cross-linked with carrier protein to make it immunogenic. In this study, the hapten (Fumonisin B(1), FB(1)) was coupled to ovalbumin (OVA) and bovine serum albumin (BSA), respectively by a short cross-linker reagent (glutaraldehyde, GA). To develop a technique for detecting the conjugation, the hapten-protein conjugates (FB(1)-OVA and FB(1)-BSA) were characterized thoroughly by ultraviolet (UV) spectroscopy, Fourier transform infrared (FT-IR) spectroscopy, gel electrophoresis and matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF-MS), respectively. The molecular weights of FB(1)-BSA and FB(1)-OVA were 74,355.301 Da and 48,009.212 Da, respectively determined by the method of MALDI-TOF-MS. The molecular coupling ratios were 11 and 5 in FB(1)-BSA and FB(1)-OVA, respectively. In this experiment, MALDI-TOF-MS was selected as the most efficient method to evaluate the cross-linking effect and calculate the molecular coupling ratio.     

环境荷尔蒙类物质2,4-二氯酚人工抗原的合成与表征

以环境荷尔蒙类物质2,4-二氯酚、对氨基苯甲酸等为起始原料,经重氮化反应合成了2,4-二氯酚半抗原。再经过混合酸酐法与载体蛋白BSA,成功合成了2,4-二氯酚人工抗原,为其免疫分析方法的建立提供了条件。产物经红外光谱、紫外光谱和核磁共振鉴定分析确定。