面包酵母和耐高温酵母在谷胱甘肽合成过程中作为ATP再生菌株的比较

分别考察了面包酵母、耐高温酵母合成ATP的最适条件和重组大肠杆菌合成谷胱甘肽的最适条件 ,比较了面包酵母和耐高温酵母作为ATP再生菌株对谷胱甘肽合成的影响 .结果表明 :由耐高温酵母构建的ATP再生 谷胱甘肽合成耦合体系 ,与用面包酵母构建的耦合体系相比 ,其谷胱甘肽产量提高 4 3.6%以上 ;与直接添加ATP相比 ,其谷胱甘肽产量提高 14.5%以上 .     

提高耦合系统ATP再生效率促进谷胱甘肽合成的研究

利用重组Escherichia coliΔadd/ade(pBV03)和Saccharomyces cerevisiaeWSH2构建了一个生物合成谷胱甘肽(GSH)的种间耦合系统。在该耦合系统中,一方面,大肠杆菌腺苷脱氨酶和腺嘌呤脱氨酶的缺失完全切断了E.coliΔadd/ade(pBV03)中不可逆转化腺苷(Ado)生成次黄嘌呤(Hx)的途径;另一方面,利用脯氨酸限制性培养降低了酿酒酵母WSH2中ADE的活性,进一步降低了耦合系统中从Ado到Hx的不可逆转化。以上两方面大大降低了耦合系统中从Ado到Hx的不可逆转化,从而保证更多的底物Ado被S.cerevisiaeWSH2用于再生ATP,最终耦合系统中ATP再生的效率大大提高。反应6 h后,该耦合系统GSH的合成量达到13.68mmol/L,为对照的5.14倍。     

面包酵母生物合成ATP的影响因素及机理初探

在对面包酵母生物合成ATP的影响因素研究的基础上,初步探讨了生物合成ATP的反应机理.研究结果表明在反应体系中直接添加终体积分数为0.5%的甲苯,可显著提高面包酵母细胞膜通透性.Mg2 对ATP的合成影响很大,当Mg2 抖浓度为40 mmol/L时,ATP合成量达到最大值,为9.02 mmol/L.在面包酵母生物合成ATP的过程中,当葡萄糖磷酸化和腺苷磷酸化反应竞争时,葡萄糖磷酸化快于腺苷磷酸化,在体系中其它需能反应结束后ATP才开始大量积累.在面包酵母经糖酵解途径生物合成ATP的前期,NAD的再生主要通过形成甘油和乙醇来实现,而在生物合成ATP的中期和快速合成期,NAD的再生主要是通过形成乙醇来实现.     

面包酵母中谷胱甘肽对面团流变性质的影响

研究了酵母中谷胱甘肽对面团流变性质的影响．对３ 种酵母在发酵过程中胞内、胞外谷胱甘肽的含量进行了测定,发现这种影响的程度主要与胞外的谷胱甘肽含量相关．     

ATP再生系统及其应用

构建ＡＴＰ再生系统是提高生物合成酶反应经济性的一个有效措施。本文讨论了ＡＴＰ再生系统的两种形式自耦合反应系统与种间耦合反应系统在生产ＧＭＰ、ＡＴＰ、ＩＭＰ、ＧＳＨ和ＣＤＰ胆碱中的应用，提出了构建ＡＴＰ再生系统的必要条件并分析了该系统目前存在的问题，以期为国内同行开展类似研究提供参考。     

重组大肠杆菌生产谷胱甘肽合成酶系的摇瓶发酵条件

研究了重组大肠杆菌E.coli Ⅱ-1 摇瓶发酵生产谷胱甘肽合成酶系的工艺条件,确定了E.coli Ⅱ-1 的最适产酶条件.最佳发酵培养基组成（g/L）为葡萄糖10, 蛋白胨5, 酵母膏2.5, K     

基于ATP再生体系快速检测乳品中微生物

基于焦磷酸（pyrophosphoric acid,PPi）再生三磷酸腺苷（adenosine triphosphate,ATP）建立乳品中微生物快速检测方法。通过单因素试验优化PPi再生ATP反应条件,并考察方法的灵敏度、准确度、精密度和稳定性。结果表明,PPi再生ATP最佳反应条件为腺苷酰硫酸（adenosine phosphosulfate,APS）浓度10 μmol/L,ATP硫酸化酶（ATP sulfurylase,ATPS）活力0.15 U/mL、反应pH7.8。在最佳的ATP再生条件下偶联生物发光法,对ATP标准品、大肠杆菌、铜绿假单胞菌的检测限分别为10－17mol/mL、102CFU/mL和102CFU/mL。工作曲线在102～107CFU/mL范围内线性关系良好,对乳品基质的回收率为81.33%～97.78%,变异系数为14.24%～22.17%,与国标平板计数法对比显示两种方法检测结果相关性良好,相关系数为0.96。本方法快速、简单、灵敏、稳定,适用于乳品中微生物快速监测。     

前体氨基酸和三磷酸腺苷对重组大肠杆菌生产谷胱甘肽的影响

在摇瓶培养中考察了谷胱甘肽的前体氨基酸及三磷酸腺苷对重组大肠杆菌生产谷胱甘肽的影响，发现两者均能显著促进胞内谷胱甘肽的积累。利用正交试验得出了谷胱甘肽产量最大的较优发酵条件组合∶初始ｐＨ６．７；酵母膏８ｇ／Ｌ；混合前体氨基酸５ｍｍｏｌ／Ｌ和三磷酸腺苷２．０ｇ／Ｌ，并进行了实验验证。初步考察了在重组大肠杆菌流加培养中连续流加前体氨基酸、三磷酸腺苷和氨苄青霉素的影响，发现胞内谷胱甘肽含量虽有所提高，但菌体生长却受到明显抑制。     

四川泡菜发酵过程中大肠杆菌消长规律的定量系统评价

目的探究四川泡菜发酵过程中大肠杆菌的消长规律。方法根据相关关键词在CNKI数据库中检索相关文献。对检索结果 13篇文献的50批次四川泡菜发酵过程中大肠杆菌消长数据进行定量系统评价。结果四川泡菜发酵过程中,大肠杆菌在数量上大体呈现为前升后降的动态变化模式;尽管乳酸菌生长及发酵产酸总体上对大肠杆菌产生抑制作用,但发酵过程中的多种参数和因素对大肠杆菌的消长具有显著影响。此外,泡菜发酵中,大肠杆菌数量的峰值与初始值之间有显著的正向相关关系;而发酵温度与泡菜发酵中大肠杆菌消失时间之间呈现反向相关关系。结论本研究可为进一步探讨四川泡菜发酵对大肠杆菌的抑制机制及风险评估提供参考。     

食品中大肠杆菌0157: H7的几种检测方法的比较

目的 评估平板分离培养法、免疫磁珠分离(IMS)法、VIDAS全自动酶标免疫测试系统、BAX全自动病原菌检测系统及环介导等温扩增(LAMP)技术在食品中检验肠出血型大肠埃希菌0157:H7的特异性、敏感性.方法 使用平板分离培养法、免疫磁珠分离法、VIDAS法、BAX法及LAMP法对人工制备的染菌猪肉样本进行检测,并对这几种方法进行比较.结果 BAX法和LAMP法的检出率最高,分别是89.1％和85.9％,免疫磁珠法和VIDAS法检出率次之,分别是75.0％和78.1％,传统分离培养法为43.8％.结论 BAX法和LAMP法具有快速、高效、特异性好、敏感性高的特点,可快速筛选食品中可能存在的肠出血型大肠埃希菌0157∶H7.     

从头合成赤松素大肠杆菌工程菌的构建

赤松素是高价值芪类保健营养品白藜芦醇的类似物,具有预防心血管疾病、抗癌和治疗关节炎等与其相对应的多种生物活性。本研究采用基因工程手段创制出一种从头生物合成赤松素的方法,以缓解目前赤松素供求不足的问题。把带有苯丙氨酸解氨酶(PAL),肉桂酸辅酶A连接酶(4CL)和赤松素合酶(STS)编码基因的组成型表达载体转化高产L-苯丙氨酸大肠杆菌ATCC31884,并通过PCR鉴定后,获得重组工程菌株。工程菌进行摇瓶培养,对培养液进行高效液相色谱检测,确定工程菌具有生物合成赤松素的能力。随后通过对工程菌在不同培养时间产物生成量的比较,结果表明,赤松素在发酵12 h后增长缓慢,24 h培养液中的赤松素含量最高,为0.32 mg/L,而其中间体肉桂酸的积累最高达到52.92 mg/L。这表明,大肠杆菌工程菌能在不添加任何前体物的情况下,利用自身代谢从头合成赤松素,但中间体肉桂酸的转化能力不足,有待下一步实验进行改善。     

酿酒酵母生产谷胱甘肽的培养条件的研究

本实验对酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)CS10515产谷胱甘肽的培养条件进行了初步研究,确定了其最佳培养基组成为:葡萄糖为5%、酵母膏1.2%、硫酸铵0.6%、硫酸镁0.02%、磷酸二氢钾0.1%;当发酵液初始pH为6.0、装液量50%～60%、振荡速度300r/min时,经过24h振荡培养后,谷胱甘肽的产量为90.20mg/L。     

Influence of Pulsed Electric Field on Escherichia coli and Saccharomyces cerevisiae

Heat sterilization destroys the color, smell, taste, and nutrients of food. Pulsed electric field can effectively kill microorganisms for many foods at room temperature without compromising sensory and nutritional quality. The effect of pulsed electric field on the sterilization rates of Escherichia coli and Saccharomyces cerevisiae was investigated. The fundamental mechanism of pulsed electric field sterilization on S. cerevisiae was briefly discussed. The inactivation of E. coli and S. cerevisiae increased as the electric field strength and treatment time increased. Pulsed electric field treatments at 35 kV/cm and 90 μs reduced S. cerevisiae and E. coli by 5.30 and 5.15 log numbers, respectively. The inactivation of E. coli and S. cerevisiae was not remarkable at increased conductivity and the same electric field strength. Concaves and holes in S. cerevisiae cell surface, protoplast deletion, overflow of substances from cells, and denatured DNA were observed. These results supported the hypothesis of “membrane perforation” to explain the mechanism underlying pulsed electric field sterilization.     

乳糖诱导大肠杆菌产褐藻胶裂解酶的条件优化

本文研究了使用乳糖替代IPTG（异丙基硫代半乳糖苷）诱导褐藻胶裂解酶在重组大肠杆菌中表达的可行性,通过摇瓶实验,分别对诱导终浓度、诱导温度、诱导时机、诱导时间等方面进行了单因素实验并利用响应面对条件进行了优化设计,并使用Ni-NTA亲和柱对粗酶液进行了纯化得到纯酶。结果表明,诱导乳糖终浓度22 mmol/L,诱导温度29℃,诱导22 h,酶活可达到8.552 U/m L。说明乳糖可以作为基因工程菌的高效诱导剂。      

Screening of Some Essential Oil Constituents as Potential Inhibitors of the ATP Synthase of Escherichia coli

Many novel bacterial targets and natural inhibitors of enzymes are currently being considered to overcome antibiotic resistance of Escherichia coli. Hence, in this study, 20 essential oil constituents were screened for their potential inhibitory effect on E. coli ATP synthase. This enzyme is involved in the hydrolysis of ATP into ADP and inorganic phosphate (Pi). First, E. coli membrane ATP synthase was isolated via cell lysis. A spectrophotometric method was optimized to quantify the released phosphate from ATP hydrolysis in order to follow the enzymatic activity. The method was validated by determining the kinetic parameters of this reaction (K_m = 144.66 μM and V_max = 270.27 μM/min), and through the inhibition assays of ATP synthase using three reference inhibitors, thymoquinone (half maximal inhibitory concentration [IC₅₀] = 50.93 μM), resveratrol (maximum inhibition of 40%), and quercetin (IC₅₀ = 29.01 μM). Among the studied essential oil components, α‐terpinene was the most potent inhibitor (IC₅₀ = 19.74 μM) followed by β‐pinene, isoeugenol, eugenol, and estragole.     

重组大肠杆菌产谷氨酰胺转氨酶的发酵条件优化

以谷氨酰胺转氨酶生产菌株重组大肠杆菌BL21（DE3）/mtg为研究对象,对工程菌的发酵产酶条件进行了优化。首先通过单因素实验法,对培养基碳、氮源种类及浓度、培养温度、初始p H、装液量、接种量、诱导时机、诱导浓度、诱导温度及诱导时间进行了优化;随后采用Plackett-Burman设计从中筛选出3个关键影响因子:初始p H、培养温度及诱导温度;最后通过Box-Benhnken设计建立上述3个因子对谷氨酰胺转氨酶比酶活的响应面模型。结果表明,最佳发酵条件为:葡萄糖5 g/L,酵母粉28 g/L,蛋白胨14 g/L,培养温度34℃,初始p H7.0,装液量50 m L（250 m L三角瓶）,接种量5%,诱导时机4 h,IPTG浓度0.6 mmol/L,诱导温度25℃,诱导时间14 h。在该条件下,优化后的谷氨酰胺转氨酶比酶活达1.507 U/mg,为未优化前的1.56倍。      

固定化重组大肠杆菌产1,3-丙二醇发酵条件的研究

利用海藻酸钙将重组大肠杆菌JM109(pHsh-dhaB-dhaG-dhaF-yqhD)固定化,并对影响重组菌固定化细胞发酵的营养因子进行研究。实验结果表明,该重组菌固定化细胞发酵的适宜培养基组成为:甘油80 g/L、酵母膏5.0 g/L、VB120.05 g/L以及KH2PO47.5 g/L;在此培养条件下,1,3-丙二醇产量、转化率及生产能力分别可达61.5 g/L、76.8%和2.57 g(L.h),与游离细胞相比,重组菌固定化细胞对底物甘油和产物1,3-丙二醇的耐受力明显提高,且1,3-丙二醇产量明显提高。