牦牛肉组织蛋白酶L酶学特性的研究

以牦牛背最长肌为原料,从中提取组织蛋白酶L并对其酶学性质进行研究。结果表明,该酶水解专一性荧光底物Z-Phe-Arg-AMC的最适反应pH和温度分别为5.5和40℃,在pH5.0～6.0、40～50℃条件下酶活稳定性最高。最适酶促反应时间和底物浓度分别为30min和25μmol/L。金属离子Ca2+、Cu2+、Mn2+、K+、Fe3+、Fe2+、Zn2+均能抑制酶活。EDTA和EGTA对酶有一定的抑制作用,L-Cys和β-ME对酶起激活作用。     

鲶鱼鱼鳃中血管紧张素转换酶类似酶的性质研究

以鲶鱼的鱼鳃为原料,用硫酸铵盐析法提取一种血管紧张素转换类似酶,采用反相高效液相色谱法对温度、pH、金属离子、抑制剂和米氏常数等酶学性质进行了研究。结果显示:温度对蛋白酶活性的影响非常明显,最适反应温度是40℃,在20~40℃之间稳定性较好;最适pH为9、pH8~11之间有较好的稳定性。Na+对蛋白酶有一定促进作用,Cu2+和K+对蛋白酶有强烈抑制作用。卡托普利对蛋白酶活性有强烈抑制作用。以马尿酸-组氨酰-亮氨酸为底物,在pH9,40℃时测得Km值为0.18 mmol/L,Vmax是1.57 mmol/min。     

Enterococcus faecalis RQ15产低温中性蛋白酶的纯化及酶学性质

采用DEAE Sepharose Fast Flow和SuperdexTM 75对Enterococcus faecalis RQ15产蛋白酶进行纯化和酶学性质研究。SDS-PAGE测定该蛋白酶分子质量为32.4kD,最适作用温度35～40℃,最适pH7.5。20～40℃之间酶活较高,pH值耐受范围广泛,具有低温蛋白酶的特征。Zn2+对蛋白酶有激活作用,Ag+、Hg2+和EDTA-Na2对酶有显著抑制作用。纯酶最适作用条件下对酪蛋白底物的Km和Vmax分别为1.31×10-4mol/L和6.92×10-6mol/(L ·s)。     

海洋细菌L1-9菌株蛋白酶的初步纯化及其酶学性质研究

采用硫酸铵沉淀的方法对海洋细菌L1-9菌株产生的蛋白酶进行了初步纯化并对酶学性质进行了测定.结果表明,硫酸铵饱和度由30%升高到80%,随着浓度的增加,沉淀的蚩白酶活性逐渐增强,硫酸铵饱和度为80%时,酶活性达到最高为128.3 U/mL.而上清液的酶活性随着硫酸铵饱和度的增加而下降.对该菌株蛋白酶的酶学性质的研究结果表明:该酶最适反应温度为40℃,在50℃以下保温20min酶活仍较高,在60℃以上酶活减弱:酶反应最适pH值为7.0,酶活性在pH值5.0～7.0时比较稳定,而在4.0＞pH＞9.0时酶活性下降较快:金属离子(5mmol/L)Na+、K+能提高蛋白酶活性,Ag+、Zn2+、Cu2+、Fe3+对蛋白酶活性有抑制作用.     

小麦芽脂肪酶酶学性质以及制麦过程的酶活变化

以对硝基苯酚丁酸酯为底物,确定了小麦芽脂肪酶的酶学性质:最适温度为37℃;最适pH为8.0;4～35℃脂肪酶的热稳定性较好,35℃下保温60 min后其活力仍可保持在88.37%,45℃保温60 min后其活力保持在46.81%,55℃保温60 min酶失活;pH5.5～6.0范围内对脂肪酶的破坏力相对较小,保温60 min其活力仍可分别保持在95.11%和91.11%;Fe3+对脂肪酶有较强的抑制作用;Cu2+、Mn2+、Al3+对脂肪酶的抑制作用较小;Ca2+、EDTA对脂肪酶有较强的激活作用。小麦制麦过程中发芽第4天酶活达到最大值,为8.52 u/g,随后酶活下降;干燥会破坏部分脂肪酶的酶活,损失率为27.06%。小麦芽籽粒、胚芽、胚根中的脂肪酶酶活依次降低,分别为8.01 u/g、7.55 u/g、6.83 u/g;协定法麦汁糖化过程中,无胚芽麦芽脂肪酶的酶活比有胚芽的低,且酶的失活速度也比较大,在55 min(70℃)时,脂肪酶完全失活。     

芽孢杆菌NCB-01胞外蛋白酶酶学特性的初步研究

该实验对来自于渤海海域沉积物的芽孢杆菌NCB-01分泌的胞外蛋白酶的酶学特性进行了初步研究。结果表明,该蛋白酶的最适作用温度为60 ℃,最适pH值为8.0,在50 ℃以下及pH值7.0～9.0的范围内酶稳定性良好。该酶具有较好的金属离子耐受能力,Fe2+、K+、Na+、Mn2+、Ca2+、Mg2+对酶活均有不同程度的激活作用。丝氨酸蛋白酶特异性抑制剂（PMSF）能强烈抑制该酶的酶活性,表明该蛋白酶为丝氨酸碱性蛋白酶。非离子型表面活性剂Tween-20、Tween-80及Triton X-100和阳离子表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）对酶活均有较强的抑制作用。该酶具有良好的耐盐性。其米氏常数（Km）为1.11 mg/mL,最大反应速率（Vmax）为91.74 μg/（min·mL）,说明该碱性蛋白酶与酪蛋白的亲和力好,特异性强。     

茄子过氧化物酶的特性研究

本研究采用分光光度法,以愈创木酚为底物,对茄子组织中过氧化物酶的活性、最适底物浓度、最适pH、最适温度以及过氧化物酶的热稳定性,Na+、K+、Ca2+等金属离子对过氧化物酶反应的影响作了一定的研究。结果表明:过氧化物酶的最适底物浓度为0.4mol/L,最适pH范围为5~6,最适反应温度为30℃,80℃处理4min以上可使酶基本失活,试验中用到的多种金属离子对过氧化物酶的活性都能起到比较明显的抑制作用。     

山楂多酚氧化酶的酶学特性研究

研究山楂多酚氧化酶(PPO)的酶学特性。采用分光光度法测定PPO的酶活性,考察底物特异性、p H值、温度、热稳定性、底物浓度、金属离子以及抑制剂对PPO酶活性的影响。实验结果表明,山楂PPO的最适底物为邻苯二酚;最适p H值为6.5;最适温度为40℃;90℃热处理1.0 min或85℃处理1.5 min PPO酶活基本完全丧失;山楂PPO最适底物浓度为0.10 mol/L,PPO酶促褐变反应动力学符合米氏方程,相应的动力学参数Km=55.83 mmol/L,Vmax=98.04 U/min;Al3+对PPO酶活的抑制作用较强,Mn2+、Ca2+和Zn2+次之,Cu2+和Mg2+对PPO酶活抑制作用不明显,Fe3+对PPO酶活有一定的促进作用;四种抑制剂对山楂PPO酶活均有一定的抑制作用,且抑制效果与抑制剂浓度呈量效关系,相同浓度下抑制效果由强到弱顺序为:抗坏血酸L-半胱氨酸亚硫酸氢钠柠檬酸,抗坏血酸的抑制效果最为显著。     

米曲霉菌今野菌株所产蛋白酶性质的研究

采用(m)2SO4盐析,再透析提纯得到今野菌株的蛋白酶,该酶热稳定性好,40℃保温5小时,剩余酶活为54%,采用正交试验,得其在反应过程中所受因素影响大小为pH＞酶液浓度＞底物浓度＞温度.酶反应的最适pH为7.0,最适温度为40℃.在以酪素为底物时,该蛋白酶的Km值为6.6‰,NaCl对其有抑制作用.抑制类型为非竞争性抑制.     

三七渣固态发酵所产淀粉酶的酶学特性研究

考察了黑曲霉固态发酵三七渣所产淀粉酶的酶学特性。研究结果表明,该淀粉酶的最适温度为60℃;当温度为30~50℃时,具有较好的热稳定性,保温处理2 h后其酶活仍可保持在90%以上;其最适pH为5.0;当pH为3.0~5.0时,具有较好的pH稳定性,在4℃冷藏保存2 h后其酶活仍可保持在80%以上;Mn2+对该淀粉酶有轻微的激活作用,K+、Na+、Mg2+、Fe3+、Zn2+和Ni2+对该淀粉酶有弱抑制作用,Cu2+则对其有强抑制作用。该淀粉酶米氏常数Km值为0.64 mg·mL-1,最大反应速率Vmax为0.45 mg/min。     

海洋细菌Pseudoalteromonas flavipulchra HH407低温碱性蛋白酶的发酵条件和酶学性质研究

对一株分离自连云港海域的海洋细菌(Pseudoalteromonas flavipulchra HH407)菌株产蛋白酶的条件及酶学性质进行研究。结果表明,在发酵温度为20℃、培养基pH 值为8.0、NaCl 质量浓度为20g/L、接种量2.5% 和装液量20% 时产酶较高。甘露醇、果糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、鱼粉和酵母粉有利于蛋白酶的产生。该酶的最适作用温度为35℃,0℃时相对酶活力达21.7%。45℃条件下保温60min 后酶活力仍能保持80% 以上。酶的最适作用pH 值为10.0,pH 值为7.0～11.0 范围为时,酶活力相对比较高。酶在pH8.0～11.0 范围内稳定,最稳定的pH 值为10.0,属于低温碱性蛋白酶,Mn2+、Cu2+、Ca2+ 对其具有较强的激活作用,Hg2+ 较强地抑制其酶活力。苯甲基磺酰氟(PMSF)能完全抑制该蛋白酶,EDTA 无影响表明该酶属于丝氨酸蛋白酶。     

小麦与小麦芽阿魏酸酯酶酶活力的测定及其酶学性质研究

以阿魏酸乙酯作为底物,确定了阿魏酸酯酶的酶解工艺条件:酶解时间100 min;酶液与底物的体积比为0.75;提取液pH值6.2。针对阿魏酸酯酶酶学性质的研究表明:最适温度60℃,30～35℃范围内热稳定性较强,保温60 min后其活力可保持在80%以上;最适反应pH值5.0,在pH值5.0～5.6范围内对阿魏酸酯酶的破坏力相对较小,保温60 min其活力仍可保持在80%以上;Cu2+和Zn2+对阿魏酸酯酶有强烈的抑制作用,而ED-TA则对其有明显的促进作用。对5种小麦及其麦芽的阿魏酸酯酶酶活力进行测定:麦芽中的阿魏酸酯酶酶活均高于小麦,其中以烟2415、鲁麦21、郑麦004变化较大。     

一株海藻糖产生菌T007酶学特性的研究

对自行从土壤中筛选分离出的一株能合成海糖藻的菌株T007的酶学特性进行了研究。该酶最适反应温度为38～40℃，最适反应pH为pH6．6～7．2，Mg^2＋、K^＋对该酶有一定的激活作用，Ca^2＋、Ba^2＋、Mn^2＋对该酶有抑制作用，而Zn^2＋、Cu^2＋、Hg^2＋则可强烈地抑制该酶活力。试验证实，该菌株是在海藻糖合酶（trehalose svnthase）作用下特异性地以麦芽糖为底物转化为海藻糖的。该细胞酶在4℃保存14d酶活力仍保持稳定，-18℃保存期可延长到30d。     

皱纹盘鲍内脏β-1,3-葡聚糖酶的提取及其酶学性质研究

从鲍鱼内脏提取β-1,3-葡聚糖酶粗酶并研究其酶学性质。以昆布多糖为底物监控酶的活性。鲍鱼内脏经匀浆后,采用3倍体积0.1mol/L的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液(pH6.0)浸提12h。浸提液经离心后收集上清液,并采用60%饱和度的硫酸铵对上清液中的蛋白进行盐析沉淀得β-1,3-葡聚糖酶粗酶。研究表明,粗酶中β-1,3-葡聚糖酶的最适反应温度为40℃,酶活力在40℃以下稳定;酶的最适pH为6.0,酶活力在pH4.0～7.0范围内稳定。Mn2+能明显激活酶活力,而Cu2+、Fe3+、Hg+对酶活力有抑制作用,其中Fe3+的抑制作用最强;亮肽酶素和1,10-菲啰啉对酶活力有明显的抑制作用,而E-64对酶活力有一定的激活作用;此酶对海藻酸钠也有一定水解能力。     

云芝(Coriolus versicolor)木质素过氧化物酶(LiP)酶学性质分析

研究云芝(Coriolus versicolor)产木质素过氧化物酶(Lip)酶活力随时间的变化情况,以及温度、pH 值、金属离子及化合物对云芝LiP 酶活力和稳定性的影响,对该酶底物浓度效应和Km 值进行测定。结果表明：云芝培养12d,其酶活力最高,为72U/mL。该酶的最适温度为40℃,在30～40℃范围内稳定;最适pH 值为2.5,pH 值在2.0～3.5 较稳定;Zn2+ 对LiP 有激活作用,Na+ 对酶活力没有影响,Ca2+、K+、Mg2+、Mn2+、Cu2+ 及EDTA、SDS、β- 巯基乙醇都表现出抑制作用;Km 值为2.05 × 10-4mol/L。     

广东客家娘酒发酵过程中产β-葡萄糖苷酶酵母菌的筛选及酶学性质研究

采用七叶苷分离培养基初筛、4-硝基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷（p-NPGal）显色法复筛的方法从广东客家娘酒发酵过程中的酒糟中筛选产β-葡萄糖苷酶能力较强的酵母菌,通过26S rDNA D1/D2区基因序列分析对其进行鉴定,并对其酶学性质进行分析。结果表明,获得1株产β-葡萄糖苷酶能力较强的假丝酵母Candida apicola kj_312。该菌株所产的β-葡萄糖苷酶具有较宽的底物特异性,最适底物为对硝基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷;最适反应温度为60 ℃,在25～65 ℃范围内,相对酶活力＞50%;最适pH值为4.5,在pH值为4.0～7.0酸性范围内,相对酶活力＞80%;1 mmol/L的Ca2+、Mn2+、Zn2+和Fe2+及100 mmol/L的Ca2+、Zn2+和Fe2+能显著提高酶活力。     

韦伯灵芝漆酶的分离纯化及其性质

采用硫酸铵分级盐析、透析、聚乙二醇浓缩和高效液相色谱柱层析从韦伯灵芝TZC-1 发酵液中分离纯化得到电泳纯漆酶,其纯化倍数为37.1 倍,酶活性回收率为21.3%。活性-PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)结果表明该漆酶由一种同工酶组成,纯化漆酶经SDS-PAGE 检测显示为单一条带,其分子质量约为40kD。该漆酶催化底物ABTS 的最适反应温度为50～60℃,最适反应pH 值为4.6,在60℃以下和pH3.0～5.0 范围内保持稳定,以ABTS为底物的表观Km 值为13.8μmol/L。Fe2+ 完全抑制酶活,Al3+ 和Mn2+ 对该漆酶也有明显抑制作用,Hg+、Cu2+ 和Mg2+ 对该酶有明显激活作用,而Zn2+、Ba2+ 及K+ 对该酶活性影响不大。     

八角莲多酚氧化酶的酶学性质

以邻苯二酚为底物,研究八角莲多酚氧化酶（polyphenol oxidase,PPO）粗提液的酶学特性。结果表明,底物邻苯二酚最适浓度为1.0 mol/L,八角莲PPO的最适pH值为7.0,最适温度为30 ℃,90 ℃高温处理10 min,八角莲PPO酶活力仅剩11.92%。PPO催化的酶促褐变反应符合米氏动力学方程,相应动力学参数Km和vmax分别为0.230 7 mol/L和769.23 U/min。抗坏血酸、甘氨酸、乙二胺四乙酸、柠檬酸对酶活性具有抑制作用,十二烷基硫酸钠表现出激活作用,亚硫酸氢钠对酶活性的抑制作用强于硫代硫酸钠,Al3+和Cu2+对酶活性具有一定的激活作用,Ca2+对酶活性有一定的抑制作用,Mg2+、Fe2+和Fe3+对酶活性影响不显著。     

一种米曲霉耐盐蛋白酶的纯化及酶学性质分析

采用硫酸铵沉淀、Q-HP阴离子交换柱和Superdux 75凝胶柱等技术,从酱油大曲中纯化得到一种耐盐蛋白酶,经飞行时间质谱鉴定为钙蛋白酶RIM13,属于一种半胱氨酸蛋白酶。该蛋白酶的最适温度为50?℃;最适pH值为6.5;稳定温度为40?℃;稳定pH值为7.0;Mn2＋促进蛋白酶活力,Fe3＋、Fe2＋、Cu2＋、Ca2＋、K＋、Na＋抑制蛋白酶活力,以上金属离子对蛋白酶二级结构也产生不同程度的影响;米氏常数Km为2.43?g/L,最大反应速率Vm为103.09?mg/（L·min）。在5、10?g/100?mL和15?g/100?mL的NaCl质量浓度条件下,蛋白酶保留的酶活力分别为77.22%、54.39%以及41.15%。该蛋白酶在高盐度环境下保持较高的酶活力,因此具有潜在的工业应用价值。