淋球菌培养基,氧化酶试纸及奈瑟氏菌快速糖试验试剂盒的检…

应用新研制的淋球菌培养基（ＷＧＣ）与意大利ＧＣ（ＩＧＣ）和ＭＴＭ培养基对照进行淋球菌生长试验，其敏感性基本一致。用已知菌株对氧化酶试纸和奈瑟氏菌快速糖试验试剂盒检定，亦呈现正确反应。应用ＷＧＣ与ＩＧＣ培养基培养９０３便临床标本，培养物经革兰氏染色和氧化酶试纸作初步检定，ＩＧＣ上淋球菌阳笥４０２例，ＷＧＣ上同时阳性４００例，两者符合率为９９．５％，ＷＧＣ上４００例中，有３６６例用快速糖试验作证实试验     

应用PCR法检测新生儿肝炎综合征患者HCMV-DNA

应用PCR检测30例临床诊断为新生儿肝炎综合征（NHS）患者和14例正常新生儿尿中人巨细胞病毒DNA（HCMV－DNA）。结果阳性率分别为66．7％和14．29％，两者差异显著。HCMV可能为NHS的主要病原．同时对30例NHS患儿尿进行HCMV分离，阳性率为53．3％。PCR与病毒分离的符合率为100％，PCR方法快速、简便、灵敏、安全、特异，适用于临床诊断和研究．     

枸橼酸钙片含量的原子吸收测定方法

以氧化镧作掩蔽剂，用原子吸收法测定枸橼酸钙片的含量。结果表明，钙浓度在0－5mg/l范围内吸收度呈良好的线性关系，加样回收率为99．6％以上，重复性试验RSD为0．21％（n＝5）。     

流感嗜血杆菌的培养、检定及免疫血清的试制

用氯化血红素及辅酶I作为X、V因子来源、用心脑没液作为基础液制备的培养基，所试12个菌株6个血清型流感嗜血杯曲均生长良好，该培养基适于大量培养。应用该培养基培养新分离的三株流感嗜血杆菌，均生长良好，与b型血清产生凝集，属b型。采用死菌抗原（b～f型）及新鲜死菌加佐剂方法免疫（a型）健康家兔，获得较高抗体水平，每种抗原各制备三批血清，其抗体滴度基本上一致。     

DE_(52)柱层析在无细胞百日咳菌苗制备中的应用

在无细胞百日咳苗苗（APV）制备中，去除内毒素是非常必要的一步。目前国内外广泛应用的蔗糖密度梯度超离心法（SDGC）需持殊设备，操作繁琐．使其应用受到限制。为此．我们应用DE。。往层析取代SDGC，结果表明，用DE。。层析处理百日咳菌抗原提取物，其内毒素可减少99．9％，而抗原量丢失仅7．4％。经PAGE及SDS－PAGE显示．处理后的抗原中仍主要含有FHA及IyT两种成分，且FHA及PT均含有3～5条多肽。解毒后制得三批苗苗，动物实验显示毒性检定合格，热原检定符合日本热原质规程要求，其效优（平均22．olU／111）与SDGC处理…     

应用无血清培养中试的三批WuT3单抗的质量分析

为了对应用无血清培养中试的３批ＷｕＴ３单抗进行全面的质量分伍。我们参照国家药品监督管理局颁布的《人用鼠源性单克隆抗体制造及检定规程》进行检定。结果所有指标均符合规程要求,其中单抗蛋白含量为５．４５～５．５３ｍｇ／支,纯度＞９５％,ＩｇＧ单体纯度＞９５％,残余骨髓瘤细胞ＤＮＡ含量＜１００ｐｇ／剂量,用免疫荧光法检测单抗对正常人外周血淋巴细胞（ＰＢＩ）的反应活性为６４－６８（正常值范围为６６．６±９．８）。无菌试验、异常毒性试验、鼠源性病毒检测、支原体枉测、热原质试验均合格。在自检合格的基础上,送中…     

生物絮凝剂产生菌低成本培养基的研究

本研究旨在以废水、废渣作为替代培养基．培养表实验室筛选出的经鉴定为肺炎克雷伯氏菌（Klebsiella pneumoniae）的TG—1絮凝剂产生菌。从多种废水、废渣中选出适合TG—l菌生长且对天然碱泥有良好絮凝效果的替代培养基——酱油渣培养基。产微生物絮凝剂的优化培养条件为：酱油渣含量为200g／L,初始PH值为8,摇床转速为160r／min．培养温度为30℃。替代培养基中外加蔗糖能够促进絮凝剂的产生,但絮凝率提高幅度不大,外加氘源不能促进絮凝剂的产生。向酱油渣培养基中添加K2HPO4能够促进絮凝剂的产生,絮凝率提高5％左右。生物絮凝剂的最高絮凝率达到75％。     

伤寒沙门氏菌特异性θ诊断血清的应用

应用新的特异性θ诊断血清和传统商品血清与434株伤寒沙门氏菌地方株作玻片凝集平行试验，两者诊断符合率为100％。θ血清与0．1％酚琼脂斜面上的所有伤寒沙门氏菌呈迅速清晰的阳性凝集反应。鉴于θ血清与大多数D群沙门氏菌不凝集，因此，大大提高诊断的正确性。     

培养条件及培养基组分对粘质沙雷氏菌生长及产D-乳酸的影响

通过摇瓶实验,确定粘质沙雷氏菌发酵生产I）-乳酸的培养条件为：温度34℃,pH值6．5,种子液接种量5％,载液量为150mL／500mL,采用前期通气有氧培养至菌体对数生长后期、而后厌氧发酵产酸的两阶段培养工艺。考察培养基各组分对菌体生长及乳酸产量的影响,确定葡萄糖及酵母粉作为碳、氮源,并补充添加适量的无机氮。培养基各组分如下（g·L^-1）：葡萄糖15,酵母粉15,KH2P041．5,K2HP04·3H2O2．0,MgSO4·7H2O1．0,FeSO4·7H2O0．03,MnSO4·H2O0．005,以此培养条件及培养基配方进行摇瓶发酵,D-乳酸产量由（13．5±1．29）g·L^-1提高至（29．0±1．42）g·L^-1,提高一倍以上,光学纯度大于97％。     

以葡萄糖和木糖为双底物生物合成乙偶姻的条件优化

以木糖为唯一碳源筛选了10株乙偶姻生产菌株,对乙偶姻产量最高茵株进行16SrDNA鉴定,测序结果表明该菌株为多粘芽孢杆菌。命名为LY107。经单因素实验优化培养条件为：培养温度37℃、pH值7．0、装液量15mL／250mL、接种量5％（体积比）。采用葡萄糖一木糖（2：1,质量比,下同）为碳源模拟木质纤维素水解液发酵生产乙偶姻,经Plackett-Burman（PB）实验和RSM优化培养基组分（g·L^-1）为：葡萄糖一木糖（211）60、蛋白胨5、酵母粉16．5、硫酸锰0．05、硫酸亚铁0．005、磷酸二氢钾0．1、乙酸钠2．47。在优化培养条件和培养基组分下,乙偶姻最高产量达23．9g·L^-1,葡萄糖一木糖转化率为79．9％。     

C群和W_(135)群脑膜炎球菌发酵工艺的优化

目的优化C群和W135群脑膜炎球菌的发酵工艺,提高荚膜多糖产量。方法在5L发酵罐中,通过调整溶氧(DO)、pH值、培养温度、葡萄糖补料速率等参数,了解C群和W135群脑膜炎球菌在发酵过程中的代谢规律,优化发酵工艺,并将C群脑膜炎球菌在100L发酵罐中放大发酵。结果在发酵过程中,DO在20%～40%范围内对多糖合成无明显影响;在pH6.6左右,培养温度37℃,有利于多糖合成;发酵中间补加葡萄糖可增加多糖合成,低速补糖较高速补糖更有利于多糖合成。C群脑膜炎球菌在100L罐中放大发酵,多糖产量可达5L罐水平。结论通过参数优化,确定了C群和W135群脑膜炎球菌的最佳发酵工艺。     

丙型肝炎抗体确证试剂检测结果的分析

目的分析丙型肝炎抗体确证试剂的检测结果。方法用两种国外抗HCV确证试剂(RIBA和MP)分别对89份抗HCVEIA试剂(Ortho)检测为高值阴性或弱阳性样品进行检测,按试剂说明判定结果。并对两种确证试剂对4种丙肝分片段抗体的检出率进行比较。结果两种确证试剂RIBA和MP与Ortho试剂的总符合率分别为43.8%和47.2%,均出现了较多的不确定样品。两种试剂对丙肝NS3抗体和NS5抗体的检出率基本一致,MP试剂对丙肝核心抗体和NS4抗体的检出率显著高于RIBA试剂。结论对于不确定样品,最好结合临床症状及病人追踪检测进一步确诊。     

两种乙型肝炎病毒核酸定量试剂对315例样本检测结果的比较

目的采用国内和国外乙型肝炎病毒核酸(HBV DNA)定量检测试剂盒检测315份血清样本,比较两种试剂检测能力的差异。方法采用Abbott Architect i2000化学发光检测试剂盒检测315份样本的乙型肝炎血清学五项指标后,再用进口(简称"Roche试剂")及国产(简称"国产试剂")乙型肝炎病毒核酸定量试剂盒进行复检,比较两种试剂检测结果的一致性。结果两种试剂定性结果阳性符合率为60.6%(134/221),阴性符合率为100%(94/94),总符合率为72.4%,检测结果差异有统计学意义(P<0.01);无论对HBsAg阳性或阴性样本,Roche试剂的阳性检出率均明显高于国产试剂(P均<0.01),灵敏度为导致二者检测结果产生差异的主要原因;定量结果相关性和一致性分析表明,两种试剂定量检测结果有较好的一致性。结论不同试剂盒检测HBV DNA灵敏度差异较大,本实验国产HBV DNA定量试剂盒灵敏度较低,质量有待提高。     

磁凝集法梅毒检测试剂检测梅毒螺旋体

目的应用磁凝集法梅毒检测试剂检测梅毒特异性抗体和反应素。方法应用磁凝集法梅毒检测试剂(Tre-ponema pallidum magnetic particle agglutination,TPMPA)检测梅毒阳性血清,分析梅毒阳性血清符合率、梅毒血清抗体滴度、假阳性检出率及交叉反应。结果用TPMPA-A、TPMPA-B试剂检测26份梅毒阳性血清样品,结果均为阳性,与省血液中心和省疾控中心的检测结果的符合率为100%;应用TPMPA-B试剂检测梅毒抗体滴度结果均较用梅毒甲苯胺红不加热血清试验诊断试剂(TRUST)检测结果高2个滴度;用TPMPA-A、TPMPA-B试剂检测正常血清,结果均为阴性,与省血液中心检测结果相符;用TPMPA-A、TPMPA-B试剂检测5份风湿病患者血清和13份慢性肝病患者血清,均未出现交叉反应。结论磁凝集法梅毒检测试剂具有良好的特异性和敏感性,操作简便、省时,可初步用于检测梅毒特异性抗体和反应素。     

越南边境贸易进口水果有机磷农残检验监管

采用快速检验方法对水果样品进行初筛,对出现阳性结果的样品再用气相色谱法进一步定性和定量,用酶抑制率法快速检测产生阳性样品中,经气相色谱法验证阳性结果的符合率80%以上,气相色谱法检测22种有机磷农药残留的检出限为0.010～0.050mg/kg。加标回收率在87.7%～99.1%之间。建立了一种适合越南边贸进口水果有机磷农残检验监管的方法,能有效地对边贸进口水果进行有机磷农药残留的检验监管。     

淋病奈瑟菌外膜蛋白Ⅰ的分离提纯及鉴定

在CaCl2存在下，以CTB提取淋球菌的OMP，再以Z3，14萃取PI，然后经DEAESepharoseCl－6B层析柱提纯，获得纯PI10．97毫克。SDS－PAGE显示纯PI为单一蛋白区带，分子量为35KD，经可见光扫描，其纯度达96.21％。用ELISA间接法检测证明，纯PI保持完好的抗原活性。亚类特异性鉴定证实为WI群PIA。     

三磷酸腺苷生物发光快速微生物检测法在疫苗中间品无菌试验中的应用

目的探讨三磷酸腺苷(Adenosine triphosphate,ATP)生物发光快速微生物检测法应用于疫苗中间品无菌试验的可行性。方法测定各种培养基与疫苗培养上清液(不含细胞碎片)的本底值,并确定阳性限值;确定测试仪的检测限及线性范围;考察非细菌来源的ATP对测定值的影响;筛选适宜培养基;比较ATP生物发光法与无菌试验检测结果的一致性。结果除199培养基外,其他培养基的RLU本底值均低于205,阳性限值为500;测试仪的最低检测限为10-15mol/L,在10-15～10-6mol/L范围内,线性关系良好;采用增菌法进行试验,可不考虑非细菌来源的ATP的影响;筛选出的适宜培养基为硫乙醇酸盐流体培养基(不含琼脂);ATP生物发光法和无菌试验检测结果的阳性符合率为80%,2种方法各有1个样品另一种方法未检出。结论 ATP生物发光法操作简便,应用范围广泛,可应用于疫苗中间品的无菌试验。     

新城疫病毒一步法RT-PCR检测方法的建立及初步应用

目的建立新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)一步法RT-PCR检测方法,并进行验证及初步应用。方法根据NDV F基因序列,设计合成了1对特异性引物,建立一步法RT-PCR检测方法,并验证其特异性及敏感性;应用建立的方法对23份疑似新城疫(Newcastle disease,ND)病料进行检测,并与血凝及血凝抑制试验检测结果进行比对。结果建立的一步法RT-PCR同时检测NDV、传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)和禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)H9亚型,仅NDV为阳性,IBDV和AIV H9均为阴性;该方法最低可检出约4 pg的NDV RNA;23份疑似ND病料,一步法RT-PCR检出11份阳性,血凝及血凝抑制试验检出13份阳性,两种方法的阳性符合率为85%。结论建立了NDV一步法RT-PCR检测方法,该方法特异性良好,敏感度较高,用时较短,可从分子水平上对NDV进行早期快速诊断和流行病学调查。     

快速检测淋球菌porA和16S rRNA基因的环介导等温扩增技术的建立

目的建立快速检测淋球菌porA和16S rRNA基因的环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术,探讨其用于淋球菌感染早期诊断的可行性。方法利用Primer-ExplorerV3软件分别针对淋球菌porA及16S rRNA基因设计6条引物(2条内引物FIP、BIP,2条外引物F3、B3,2条环引物LF、LB),以淋球菌标准菌株基因组DNA为模板,进行LAMP扩增,同时,以外引物F3、B3为PCR引物,进行PCR扩增,并比较2种扩增方法的灵敏度和特异性。结果LAMP法与PCR法灵敏度相同,可检测到10个拷贝的目的基因;其针对淋球菌porA和16S rRNA基因的引物对脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌和大肠埃希菌的DNA均不能扩增。结论已成功建立了检测淋球菌porA和16S rRNA基因的LAMP技术,为淋球菌的快速检测提供了新的手段,有望成为淋球菌常规检测的简便方法。     

应用间接混合酶免疫试验方法测定麻疹抗体

以麻疹McAb（M－McAb）预先包被固相在聚苯乙烯板孔内，在此基础上，再按间接法程序查待检标本中麻疹抗体，称此方法为间接混合酶免疫试验（IMEIA）。同时与HAI试验进行比较，其符合率达100％。