基于油酸诱导的高产三萜灵芝菌丝体发酵条件优化

本文对油酸促进灵芝菌丝体高产灵芝三萜发酵条件进行了优化,旨在提高灵芝三萜的产量。实验进行了碳源、氮源等单因素的筛选,利用CCD实验设计对培养基进行优化,以及对发酵条件单因素进行了优化。实验结果表明,促进灵芝菌丝体高产灵芝三萜的最优条件为:培养基成分为可溶性淀粉3.4%、鱼蛋白胨0.72%、KH2PO40.3%、Mg SO40.15%、VB10.005%(m/v),p H5.5,在发酵培养第0 d加油酸4.38%(v/v);装液量为100 m L,接种量为10%(v/v),发酵天数为9 d,胞内三萜产量达到(282.67±3.77)mg/100 m L。该方法不仅大幅度提高了三萜产量,对于灵芝的工业化生产也有重要意义。      

四种基因定量方法对实时荧光PCR与微滴式数字PCR检测霍乱弧菌基因表达量的分析

基因表达量测定对基因功能解析和探索生命机理具有重大意义,目前实时荧光PCR和微滴式数字PCR技术是进行基因表达量测定的有效方法。本文以低温处理的霍乱弧菌sfs、vcc、Rec A、hly及16S r RNA基因为研究对象,分别用实时荧光PCR和微滴式数字PCR技术对低温处理前后霍乱弧菌的上述基因表达量进行测定,实时荧光PCR实验数据分别采用??CT和ge Norm法进行分析,微滴式数字PCR实验数据分别采用相对定量和绝对定量法进行分析,获得处理组基因表达量相对于对照组的变化倍数;使用多维尺度法来分析四种基因定量方法的数据。结果表明,在本实验条件下,四种基因定量方法的分析结果存在差异;16S r RNA基因表达量发生了变化,不适合作为内参基因;微滴式数字PCR能更直观的给出基因表达量变化的结果,并且基因表达差异相对定量分析的准确度更高。     

超声波提取灵芝菌丝体中灵芝酸的研究

目的:利用超声波对灵芝菌丝体中灵芝酸的提取工艺进行研究。方法:以单位灵芝菌丝体中灵芝酸的提取量为指标,采用单因素分析和正交实验,对影响灵芝菌丝体中灵芝酸提取的乙醇浓度、超声波浸提时间、浸提pH和料液比四个因素进行研究。结果:乙醇浓度100%,超声波浸提时间90min,pH2·5,加12倍量乙醇浸提为最佳工艺条件,所提取灵芝酸含量达46·7mg·g-1。结论:采用超声波提取技术可以较大幅度提高灵芝酸的提取得率,大大缩短提取时间。      

超声波提取灵芝菌丝体中灵芝酸的研究

目的:利用超声波对灵芝菌丝体中灵芝酸的提取工艺进行研究。方法:以单位灵芝菌丝体中灵芝酸的提取量为指标,采用单因素分析和正交实验,对影响灵芝菌丝体中灵芝酸提取的乙醇浓度、超声波浸提时间、浸提pH和料液比四个因素进行研究。结果:乙醇浓度100%,超声波浸提时间90min,pH2·5,加12倍量乙醇浸提为最佳工艺条件,所提取灵芝酸含量达46·7mg·g-1。结论:采用超声波提取技术可以较大幅度提高灵芝酸的提取得率,大大缩短提取时间。     

超声波法提取灵芝菌丝体总三萜的工艺

采用超声波浸提法从灵芝菌丝体中提取总三萜,以熊果酸作为标准品,采用分光光度计法测定其含量.以正交试验设计优化工艺条件,在85%的乙醇溶液中浸泡2 h,150 W功率下超声提取30 min,从灵芝菌丝体中提取的总三萜最多.     

灵芝菌丝体中灵芝酸的体外抑菌作用

采用杯碟法试验灵芝菌丝体中灵芝酸对革兰阴性菌(大肠杆菌)、革兰阳性菌f金黄色葡萄球菌),以及芽孢杆菌(枯草芽孢杆菌)的体外抑菌作用.结果表明,灵芝酸组分对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的生长有较明显的抑制作用,而对枯草芽孢杆菌的抑制作用相对较弱;该灵芝酸对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为12.5 mg/mL;而对枯草芽孢杆菌的最小抑菌浓度为50 mg/mL.此外,该灵芝酸的抑菌成分在40℃和60℃下(处理2 h)较稳定,但在80℃和100℃温度下,热稳定性较差.     

不同生长阶段保加利亚乳杆菌关键蛋白酶基因表达变化规律

乳酸菌自身不能直接利用外源蛋白质,必须通过蛋白水解体系水解外源蛋白质,生成供菌体正常生长需要的短肽和游离氨基酸。该研究选择6株保加利亚乳杆菌(KLDS1.0207、1.0501、1.1007、1.9201、1.9203、1.0208)进行脱脂乳发酵,在mRNA转录水平上,应用实时荧光定量PCR技术,探讨保加利亚乳杆菌的蛋白水解体系中关键蛋白酶基因(prtB、oppD、pepC、pepF、pepQ、pepX、pepT)在菌体不同生长阶段表达的动态变化。结果表明,所有菌株生长曲线均呈S型。随着菌体在脱脂乳中的不断生长,蛋白水解活力极显著增强(P<0.01),7个目的基因相对表达量呈现总体上调。6株菌的prtB和oppD基因在对数期的相对表达量极显著高于对照组(4h)(P<0.01)。对数期的胞内肽酶基因(pepC、pepF、pepQ、pepX、pepT)的表达量与对照组(4 h)相比,呈极显著上调(P<0.01),但菌株KLDS 1.0207的pepQ基因在对数期下调,而稳定期上调。由此可见,蛋白水解活力较高的菌株,其生长和产酸特性也较高;发现在脱脂乳中培养保加利亚乳杆菌,其关键蛋白酶基因的表达量呈时间依赖性,且菌株间各蛋白酶基因表达量有较大差异。     

补料方式对灵芝菌丝体液态深层发酵合成灵芝三萜的影响

在50 L发酵罐中采用4种补料培养方式对灵芝菌丝体液态深层发酵合成灵芝三萜进行比较。结果表明,通过补料可以明显地促进灵芝菌丝体的生长和灵芝三萜的合成,同时,不同的补料方式对菌丝体生长和灵芝三萜合成有不同的影响。采用指数补料方式可获得较高的菌丝体干质量,并提高灵芝三萜含量,与传统的发酵方式相比,采用此补料策略取得了较好的效果。发酵终点灵芝菌丝体干质量达到17.68 g/L,灵芝三萜含量达到4.58 g/100 g干菌丝体,分别比分批发酵提高了65.70%和100.88%。     

不同品种灵芝固态发酵菌丝体多糖和三萜含量的比较

以多糖和三萜含量为指标,探讨了8种灵芝菌株固态发酵菌丝生物活性物质含量的差异。结果表明,不同菌株间固态发酵菌丝得率、多糖和三萜含量的差异较大,紫芝菌丝得率最高,达到了21.66%;云芝单位菌丝体多糖含量最高,为8.16%;赤芝和树舌灵芝单位菌丝体三萜含量最高,分别为1.13%和1.08%。8种灵芝菌株中紫芝单位培养基的多糖产量最高,达到了0.996%,赤芝单位培养基的三萜产量最高,为0.173%,因此紫芝适合于固态发酵生产灵芝多糖,而赤芝适合于固态发酵生产灵芝三萜。     

基于实时荧光PCR对肉制品中羊肉的精确定量

该研究将实时荧光定量PCR技术(real-time fluorescence quantitative PCR,r PCR)与微滴式数字PCR技术(micro-droplet digital PCR,dd PCR)相结合,利用dd PCR建立拷贝数和羊肉质量的函数关系,确立了基于r PCR定量检测羊肉含量的方法。特异性实验结果表明,除绵羊和山羊外,非目标物种DNA未出现特异性扩增;灵敏度实验结果表明,该方法的最低检出限为0. 01 ng/μL;通过对已知成分的混合样品和市售样品的检测表明,该方法能够对含量在5%以上的羊肉进行准确定量。因此,该方法在肉制品中羊肉含量检测和掺假鉴别方面具有较好应用潜力。     

草菇β-木糖苷酶活性及其编码基因xyl的转录表达研究

本研究首先对草菇β-木糖苷酶编码序列Xyl进行了生物信息学分析,然后以对硝基木糖苷为底物测定了不同菌株中的木糖苷酶活性,并进一步比较了木糖苷酶基因xyl在草菇不同菌株中的相对表达量。结果表明:Xyl属于糖苷水解酶第43家族,由534个氨基酸残基组成,预测分子量为58.82ku,等电点为4.99;系统进化树分析表明,Xyl的氨基酸序列与木腐菌相似性较高,最高值达到61%,且草菇与木腐菌黄孢原毛平革、毛韧革菌等亲缘关系较近,但与同为草腐菌的灰盖鬼伞遗传距离较远;草菇不同菌株的β-木糖苷酶活性测定结果显示,Vb1的β-木糖苷酶活性最高,0229的β-木糖苷酶活性与A8之间无显著性差异;Real-time PCR结果显示,Vb1的xyl基因相对表达量也最高,三个菌株的xyl基因相对表达量依次为Vb1>A8>0229。      

诱变酒酒球菌中抗酸候选基因ATPase和FtsH的表达差异分析及功能验证

为研究胁迫条件下具有不同表达趋势的抗酸候选基因ATPase和FtsH是否可以提高菌株的抗酸性,利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)测定诱变酒酒球菌抗酸菌株b1和酸敏菌株b2中ATPase和FtsH在pH 4.8(最适条件)和pH 3.0(胁迫条件)ATB培养基中的相对表达量,分析其表达趋势;从b1中克隆ATPase...     

灵芝菌丝体中灵芝酸T、R和S的HPLC测定方法的建立和应用

采用YMC C18柱（250mm×4.6mm,5μm）,以0.5%冰醋酸溶液（A）-甲醇（B）为流动相梯度洗脱（0²0min,85%B→100%B;20³0min,100%B）,检测波长在245nm,流速1mL/min,柱温为30℃的条件下,用HPLC考察灵芝酸T、灵芝酸S、灵芝酸R在不同灵芝菌丝体中的含量差异。结果表明,不同种类的灵芝菌丝体中三种灵芝酸成分的含量存在显著的差异,p=0.0003,而且此方法操作简便,稳定性和重复性良好,适用于同时快速检测灵芝菌丝体中三种灵芝酸含量。      

受PVY诱导的烟草NtERD1的基因分离与表达分析

通过抑制差减杂交和cDNA芯片法从受PVY诱导的烟草抑制差减杂交文库中筛选得到一段长为745 bp的基因EST片段,经Blast同源性比对分析,该序列与植物脱水诱导早期应答基因(ERD)在核苷酸和氨基酸水平上高度同源。ORfinder分析表明,该序列包含一个492 bp的开放读码框,编码163个氨基酸。氨基酸Blastp比对显示,该氨基酸序列与其他植物脱水诱导早期应答蛋白具有很高的同源性。所以筛选得到的这个新基因属于烟草脱水诱导早期应答基因,被命名为NtERD1(GenBank登录号为GU144573)。实时荧光定量PCR分析表明,NtERD1在PVY接种早期上调表达,因此NtERD1受PVY侵染诱导,可能对烟草抗病毒具有重要作用。     

不同地区牦牛肉中FABP基因Real-time PCR表达差异分析

为了研究不同地区牦牛肉品质的差异,本实验从大通、九龙、河南、迪庆、红原五个地区采集4岁公牦牛肌肉样品,提取总RNA,在逆转录聚合酶的作用下生成c DNA,以逆转录产物为模板,利用Real-time PCR检测牦牛肌肉中脂肪酸结合蛋白基因的表达水平。将迪庆地区牦牛作为对照组,肌肉中脂肪酸结合蛋白基因的c DNA实时荧光定量的2-ΔΔCt值设定为1,则大通、九龙、河南、红原地区的牦牛肌肉中脂肪酸结合蛋白基因的c DNA实时荧光定量的2-ΔΔCt值分别为4.18、2.94、9.95、10.73,从而得出不同地区牦牛肌肉中脂肪酸结合蛋白基因的相对表达水平,在分子水平上更加准确地评估不同地区牦牛肉品质。实验结果表明,红原和河南地区的牦牛肉品质最优,而迪庆地区牦牛肉品质较差。      

不同地区牦牛肉中FABP基因Real-time PCR表达差异分析

为了研究不同地区牦牛肉品质的差异,本实验从大通、九龙、河南、迪庆、红原五个地区采集4岁公牦牛肌肉样品,提取总RNA,在逆转录聚合酶的作用下生成c DNA,以逆转录产物为模板,利用Real-time PCR检测牦牛肌肉中脂肪酸结合蛋白基因的表达水平。将迪庆地区牦牛作为对照组,肌肉中脂肪酸结合蛋白基因的c DNA实时荧光定量的2-ΔΔCt值设定为1,则大通、九龙、河南、红原地区的牦牛肌肉中脂肪酸结合蛋白基因的c DNA实时荧光定量的2-ΔΔCt值分别为4.18、2.94、9.95、10.73,从而得出不同地区牦牛肌肉中脂肪酸结合蛋白基因的相对表达水平,在分子水平上更加准确地评估不同地区牦牛肉品质。实验结果表明,红原和河南地区的牦牛肉品质最优,而迪庆地区牦牛肉品质较差。     

过度煎炸油脂对大鼠糖脂代谢及相关基因表达的影响

取24只生长状况相同的Wistar雄鼠随机分成3组,每天分别灌胃1.5 mL正常油脂、过度煎炸油脂,对照组灌胃等量的生理盐水。4周后眼眶取血,6周后腹部主动脉取血,用于各项生化指标的检测;取肝脏组织进行基因表达状况的检测。结果显示:干预4周后,与对照组相比,正常油脂组血脂含量均有所升高,过度煎炸油脂组基本与对照组持平;干预6周后,正常油脂组甘油三酯高于对照组,而过度煎炸油脂组甘油三脂、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇水平均明显低于对照组(P0.01)。血糖水平在对照组、正常油脂组、过度煎炸油脂组呈逐渐增高趋势。qPCR结果表明:短期食用过度煎炸油脂即会导致大鼠肝脏组织ACC、ACOX1基因显著下调(P0.05或P0.01),这说明过度煎炸油脂中的毒性物质能通过影响脂肪酸正常的合成和代谢,造成机体脂肪酸合成代谢紊乱。同时Insig1基因明显下调(P0.01),说明过度煎炸油脂会对机体糖代谢产生一定影响。     

基于vvhA基因检测创伤弧菌实时荧光PCR方法的建立

为建立创伤弧菌(VV)的快速检测方法,根据vvhA基因序列设计合成引物和探针,建立实时荧光PCR方法。结果显示:所建立的方法能特异扩增出VV标准阳性菌株,而对其它14种菌株没有扩增;该方法的灵敏度为15CFU/mL;稳定性和重复性试验结果表明,同一样品重复检测4次Ct值(循环阈值)的变异系数均小于2%;利用该检测方法对采集的156份样品进行检测,共计检出2份VV阳性样品,与行标法(SN/T 1870—2007)检测结果一致。该检测方法灵敏度高、特异性强,具有良好的实用性。     

环境条件对温和气单胞菌群体感应基因luxI/luxR表达的影响

以大菱鲆源温和气单胞菌群体感应调控基因luxI/luxR为研究对象,采用实时荧光定量PCR技术从转录水平上探究环境条件对该基因表达的影响,以期确定环境因素对群体感应系统的调节作用.结果表明:在适当低温(15℃)及弱碱(pH=8)环境条件下,luxI/luxR基因表达水平最高;而在高渗透压胁迫环境条件下,2种基因的表达水...     

常见肉类中鸭源性成分荧光PCR检测方法的建立

目的通过筛选引物、探针体系,优化PCR反应条件,建立常见肉品中鸭源性DNA的荧光PCR检测方法。方法针对线粒体基因设计50对引物探针,以鸭DNA为模板,利用PCR和荧光PCR方法筛选引物探针并确定反应条件,进行灵敏度、特异性和稳定性试验,最终确定荧光定量PCR方法的引物、探针及反应条件。结果当样本含量为0.1%时,本方法仍可特异、灵敏地检出鸭肉成分,检测Ct值可稳定在20以下。结论建立了常见肉品中鸭源性DNA的荧光PCR检测方法,可用于肉类制品中鸭源性成分的鉴定。