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从抗CD20Fab′表达载体上利用PCR方法扩增并修饰其重键恒定区CH1C-末端的DNA序列,然后将修饰后的CH1DNA序列重组到原Fab′表达载体中,构建成抗CD20抗体片段F(ab′)2表达载体。将该载体转化缩主大肠杆菌16C9,实现了抗CD20抗体片段F(ab′)在工程菌中的可溶性分泌表达。经分离纯化获得具有与抗原CD20特异结合的F(ab′)2在工程菌中的可溶性分泌表达。经分离纯化获得具有与抗原CD20特异结合的F(ab′)2活性片段。竞争性免疫荧光实验的结果表明:抗CD20F(ab′)2片段具有比Fab′更强的竞争性抑制亲本鼠源性单克隆抗体H147与Daudi细胞表面CD20相结合的能力;用MTT法检测所得到的数据说明:F(ab′)2与Fab′更为有效地抑制在体外培养的Daudi细胞的生长。 相似文献
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在构建SDF-1原核表达系统的基础上,探索对其活性表达产物分离纯化的技术路线。将从小鼠骨髓组织克隆出的SDF-1a成熟肽基因插入原核表达质粒pET101/D-FOFO,用以转化大肠杆菌B1221Star^TM菌株,经SDS-PAGE进行诱导表达。SDS-PAGE和Western Blot检测证实:其表达产物在约11.6kD处有明显条带显示,其大小与预测的重组SDF-1a/His分子量一致。采用Ni^2 -Resin固相亲和层析法对由该系统表达的C端带6Xhis标签的重组SDF-1a/His进行分离纯化,纯度达92%。体外活性检测结果表明:重组小鼠SDF1a/His对T细胞有明显趋化和促生存作用;能有效诱导Jurkat细胞ERK磷酸化。 相似文献
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分离纯化造血干祖细胞具有十分重要的理论和应用价值。本文利用吸附免疫微球的单克隆抗体分离系统,对不同来源造血组织的CD34+细胞进行纯化分离,经流式细胞仪检测,其纯度可达95—99%。在外源性生长因子的刺激下,CD34+细胞可形成大量各系造血集落,而CD34-组分则几乎不含造血集落形成细胞。进一步的研究则是利用免疫荧光激活的流式细胞分选系统,将CD34+细胞群分为CD34+CD38+和CD34+CD38-两个亚群,并比较正常人骨髓、脐带血、外周血来源的亚群细胞造血性能。结果表明,不同细胞亚群造血性能不均一,同一亚群不同来源的细胞也同样具有不均一性,从而为造血干细胞的基因治疗、建库、移植等提供了理论依据。 相似文献
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新型基因工程抗CD20抗体片段F(ab')2的构建、表达和活性测定 总被引:1,自引:0,他引:1
《高技术通讯》2001,11(9):13-17
从抗CD20Fab'表达载体上利用PCR方法扩增并修饰其重链恒定区CH1C-末端的DNA序列,然后将修饰后的CH1DNA序列重组到原Fab'表达载体中,构建成抗CD20抗体片段F(ab')2表达载体.将该载体转化宿主大肠杆菌16C9,实现了抗CD20抗体片段F(ab')2在工程菌中的可溶性分泌表达.经分离纯化获得具有与抗原CD20特异结合的F(ab')2活性片段.竞争性免疫荧光实验的结果表明抗CD20F(ab')2片段具有比Fab'更强的竞争性抑制亲本鼠源性单克隆抗体HI47与Daudi细胞表面CD20相结合的能力;用MTT法检测所得到的数据说明F(ab')2比Fab'更为有效地抑制在体外培养的Daudi细胞的生长. 相似文献
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从抗CD2 0 Fab’表达载体上利用PCR方法扩增并修饰其重链恒定区CH1C 末端的DNA序列 ,然后将修饰后的CH1DNA序列重组到原Fab’表达载体中 ,构建成抗CD2 0抗体片段F(ab’) 2 表达载体。将该载体转化宿主大肠杆菌 16C9,实现了抗CD2 0 抗体片段F(ab’) 2 在工程菌中的可溶性分泌表达。经分离纯化获得具有与抗原CD2 0 特异结合的F(ab’) 2 活性片段。竞争性免疫荧光实验的结果表明 :抗CD2 0 F(ab’) 2 片段具有比Fab’更强的竞争性抑制亲本鼠源性单克隆抗体HI4 7与Daudi细胞表面CD2 0 相结合的能力 ;用MTT法检测所得到的数据说明 :F(ab’) 2 比Fab’更为有效地抑制在体外培养的Daudi细胞的生长 相似文献
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γ-硅酸二钙陶瓷的生物活性和细胞毒性研究 总被引:2,自引:0,他引:2
对溶胶-凝胶法合成的硅酸二钙粉体通过冷等静压成型,在1450℃下无压烧结,制备出高纯度的,γ-硅酸二钙(γ-Ca2SiO4)陶瓷,并对γ-Ca2SiO4陶瓷的体外(in vitro)生物活性和细胞毒性进行了研究.实验结果表明,该陶瓷具有优良的生物活性,在模拟体液(SBF)中浸泡72h后陶瓷表面沉积类骨碳酸羟基磷灰石层(CHA);材料溶解释放的钙、硅离子对成纤维细胞无毒副作用,在适当浓度下还能促进细胞增殖;该陶瓷还能支持骨髓间质干细胞(BMSCs) 的贴壁、黏附和铺展.因此,γ-Ca2SiO4陶瓷是一种生物活性优良和无细胞毒性的新型生物活性陶瓷材料. 相似文献
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构建了野生型和突变型CD59重组质粒,建立了高效真核表达系统,探讨了W40位点的生物学活性。采用基因点突变技术使CD59W40基因位置缺失(突变1,M1)及C39W40K41→W39W40W41(突变2,M2),重叠延伸PCR(overlap extension PCR)定点诱变扩增突变基因,重组入真核表达质粒pIRES,利用阳离子脂质体(Lipfectamine2000)将重组质粒转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO)进行表达。酶切鉴定及序列测定证实成功构建了pIRES-MICD59、pIRES—M2CD59和pIRES-WTCD59,突变基因约500bp。G418筛选出了CHO转染细胞的稳定细胞克隆,免疫荧光、ELISA检测筛选MICD59、M2CD59和WTCD59蛋白高表达株,连续传代30代有高表达;补体溶细胞反应显示与野生型CD59相比,突变型M1CD59失去对补体的抑制功能,而M2CD59抗补体活性略增高。证实CD59的W40位点对其功能具有重要作用,封闭此位点可提高补体活性,有望用于肿瘤治疗。 相似文献
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