HPLC-Methode zur Bestimmung von vitamin C in Milch, Molke und Molkegetr?nken

Zusammenfassung Es wird eine lonenpaar-HPLC-Methode zur Bestimmung vonl-Ascorbinsäure undl-Dehydroascorbinsäure in Milch, Molke und Molkegetränken beschrieben. Nach der Trennung an einer C₁₈-Umkehrphasensäule erfolgt der Nachweis vonl-Ascorbinsäure mittels UV-Detektors bei 248 nm,l-Dehydroascorbinsäure wird als Chinoxalinderivat fluorimetrisch bei 350 nm Anregungs- und 430 nm Emissionswellenlänge erfaßt.

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An HPLC-method for the determination of vitamin C in milk, whey and whey beverages

Summary A method is described for the estimation ofl-ascorbic acid andl-dehydroascorbic acid in milk, whey, and whey drinks by paired-ion reversed-phase HPLC using a C₁₈-column.l-ascorbic acid is detected UV-spectrophotometrically at 248 nm,l-dehydroascorbic acid is determined spectrofluorometrically with excitation at 350 nm and emission at 430 nm, after derivatisation into a quinoxaline fluorophor.

     

Einflu? wasserl?slicher Orthophosphate auf die UV-Absorptionskurve derl -Ascorbins?ure

Zusammenfassung Es wurde auf Grund der Untersuchungen festgestellt, daß mit dem Anwachsen des pH-Wertes der Lösungen auch das Absorptionsmaximum derl-Ascorbinsäure ansteigt. Diese Regelmäßigkeit wird gestört, wenn der pH-Wert 8,2 überschreitet.Das Absorptionsmaximum nimmt von den primären zu den tertiären Phosphaten zu. Eine Ausnahme bilden tertiäre Phosphate des Natriums und Kaliums.Die Ergebnisse erlauben den Schluß, daß die Anwesenheit von Phosphaten in biologischen Materialien in verschiedenem Grade die Regelmäßigkeit der Absorptionskurve vonl-Ascorbinsäure beeinflussen, wodurch fehlerhafte Mcßergebnisse entstehen. Beim Vergleich des Absorptionsmaximums einer wäßrigenl-Ascorbinsäurelösung beobacht man beim Zusatz von Phosphaten eine wesentliche Steigerung dieses Maximums, mit Ausnahme beim Zusatz primärer Monophosphate.

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Influence of water soluble phosphates on the spectrophotometric curves of thel-ascorbic acid

Summary The investigations present the influence of water soluble phosphates on the picture of spectro-photometric curves of thel-ascorbic acid.The results authorize us to say that with the increase of the value of pH in the solutions, the absorption maximum ofl-ascorbic acid increases as well.The lowest pH of 4.85–5.00 are observed in water solutions of dihydrogen monophosphates withl-ascorbic acid. In those cases the value of the absorption maximum rises slightly in comparison with the basic solution ofl-ascorbic acid on an average of 0.020.The solutions of monohydrogen monophosphates with L-ascorbic acid, having pH 7.2–8.2 increase the absorption maximum of the curve on an average of 0.195.The regularity of the increase of absorption maximum simultaneously to the increase of the value of pH is deranged at the pH level of about 11. This irregularity appears in case of neutral monophosphates of sodium. The irregularity manifests itself in the complete loss of parabolic character by the curve ofl-ascorbic acid, which is a proof of an easy oxidation of this acid in a strong alkaline medium.

     

Charakterisierung derl -Ascorbins?ureoxidase (EC 1.10.3.3.) aus Weizenmehl

Zusammenfassung Die Isoenzyme derl-Ascorbinsäu-reoxidase, isoliert und getrennt nach [1], zeigen eine maximale Aktivität gegenüberl-Ascorbinsäure im pH-Bereich 5,4–6,0 and bei Temperaturenoptima von 30, 39 and 40°C. Cu²⁺ inaktiviert die Reaktion. In diesen Punkten entspricht das Enzym anderen unterschiedlicher Herkunft. Neu ist der aktivierende Effekt von NaCl mit einem Aktivitätsoptimum bei 0,6 mol.

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Charakterisation ofl-ascorbic acid oxidase (EC 1.10.3.3.) from wheat flour

Summary The Isoenzymes ofl-Ascorbic Acid Oxidase, isolated and separated according to [1] exhibit a maximum activity withl-Ascorbic Acid in the pH range 5,4–6,0 with temperature optima of 30, 39 and 40°C. Cu²⁺ inactivates the reaction. In this property the enzyme corresponds to other enzymes of different origin. The activating effect of NaCl with optimum activity near 0,6 mol concentration has not been described previously.

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Wir danken dem Forschungskreis der Ernährungsindustrie e.V. und der AIF für die finanzielle Unterstützung eines Teils der Arbeit

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Experimentelle Unterlagen aus der Dissertation von S. Roeung, Universität Bonn, 1978     

Isolierung und Charakterisierung derl -Ascorbins?ureoxidase (EC 1.10.3.3) aus Weizenmehl

Zusammenfassung Weizenmehl (Caribo, 0,55% Asche) wurde mit 0,4 m-NaCl-Lösung extrahiert, diel-Ascorbinsäureoxidase mit (NH₄)₂SO₄ gefällt und das Konzentrat aufgetrennt mit der Dünnschichtisoelektrischen Focussierung an Polyacrylamid- bzw. Dextrangel. 8–12 aktive Fraktionen (Isoenzyme) werden festgestellt, die eine hohe Spezifität fürl-Ascorbinsaure gegenüberd-Isoascorbinsaure aufweiseri (im Mittel nur 7% Fremdaktivität). Die Molekulargewichte liegen zwischen 165 000 and 175 000 (bestimmt durch Dextrangel-Dünnschichtchromatographie). In frischem Mehl liegt die Aktivität bei 28 mgl-Ascorbinsäure pro kg Mehl in 30 min, nach 30 Tagen ist die Aktivität auf 5% abgesunken, nach 60 Tagen nicht mehr nachweisbar.

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Isolation and Characterisation ofl-ascorbic Acid Oxidase (EC 1.10.3.3) from Wheat Flour

Summary Wheat flour (Caribo, 0.55% ash) is extracted with 0.4 M-NaCl-solution, the L-ascorbic acid oxidase precipitated with (NH₄)₂SO₄ and this concentrate separated by thinlayer isoelectric focussing on polyacrylamid-and dextrangel. 8–12 active fractions (isoenzymes) are detected with a high specifity forl-ascorbic acid in respect ind-isoascorbic acid activity). The molecular weights are 165,000–175,000 (determined by dextran gel-thin layer chromatography). In fresh flour the activity is near 28 mgl-ascorbic acid per kg flour in 30 min, after 30 days the activity has diminished to 5%, after 60 days no activity is detectable.

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1. Mitteilung

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Wir danken dem Forschungskreis der Ernährungsindustrie e. V. and der AIF für die finanzielle Unterstützung der Arbeit

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Experimentelle Unterlagen aus der Dissertation von S. Reoung, Universität Bonn, 1978     

The influence of wine additives on colour and colour quality of young red wine

Summary Zweigelt 1987, a typical Austrian wine treated with wine additives such as sulphur dioxide,l-ascorbic acid and sorbic acid was stored for 77 days. All characteristic wine components were analysed during the storage period. Only changes in colour could be detected. The changes in the amount of anthocyanins and anthocyanidin chlorides were analysed. The results show that Zweigelt 1987 mixed with wine additives such asl-ascorbic acid or sorbic acid resulted in a larger loss in colour than untreated wine. The changes could be measured photometrically but they were invisible to the naked eye. Appropriate use of wine additives did not appear to deterioriate the ruby colour of young red wine during the period tested.

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Der Einfluß von Wein-Zusatzstoffen auf Farbe und Farbqualität von jungem Rotwein

Zusammenfassung Österreichischer Wein Zweigelt 1987, welcher für die Versuchsreihe unter authentischen Bedingungen hergestellt worden war, wurde mit Weinbehandlungsmitteln wie Schwefeldioxid, Sorbinsäure undl-Ascorbinsäure versetzt. Die Wechselwirkungen der Farbe des Rotweines mit den zugesetzten Chemikalien wurden während einer Lagerzeit von 77 Tagen studiert. Die Anthocyane und Anthocyanidinchloridmengen wurden bestimmt. Die Ergebnisse zeigen, daß Zweigelt 1987, der mitl-Ascorbinsäure bzw. Sorbinsäure versetzt worden war, etwas größere Farbverluste zeigte als unbehandelter Wein. Abschließend wurde festgestellt, daß die Farbveränderungen zwar photometrisch meßbar sind, aber mit freiem Auge nicht erkannt werden. Eine Verwendung dieser Weinbehandlungsmittel in richtiger Dosierung führt zu keiner Verschlechterung der Farbqualität bei jungem Rotwein über den untersuchten Zeitraum.

     

Einflu? einiger organischer S?uren auf UV-Absorptions-Kurve der L-Ascorbins?ure

Zusammenfassung Es wurde zu 1%igen wäßrigen Lösungen organischer Säuren wie Propionsäure, Äpfelsäure, Citronensäure, Bernsteinsäure, Essigsäure, Weinsäure, Oxalsäure und Trichloressigsäurel-Ascorbinsäure hinzugefügt und die erhaltenen UV-Absorptions kurven mit der der reinenl-Ascorbinsäure verglichen. Hierbei wurde ein Einfluß der organischen Säuren auf die Absorptionskurven festgestellt.Die Verschiebung des Maximums derl-Ascorbinsäure ist abhängig von dem Absorptionsmaximum des Lösungsmittels und auch von dem Rückgang der Dissoziation derl-Ascorbinsäure.Durch Säuren mit mehreren Carboxylgruppen wird die Absorption verringert, annähernd proportional zur Größe der Dissoziationskonstante mit Ausnahme der Oxalsäure, bei der es wahrscheinlich zu einer zusätzlichen Polarisation kommt.Zaklad Biochemii WSWF i Katedra Chemii Ogólnej AM, Pozna, ul. Grunwaldzka 6.     

Gaschromatographisch-massenspektrometrische Untersuchungen zur Kinetik der Redoxreaktionen vonl -Ascorbins?ure undl -Dehydroascorbins?ure in Weizenmehlteigen

Summary A gaschromatographic/mass spectrometric method for separation and determination ofl-ascorbic acid (l-AA) and the different isomeric forms ofl-dehydro ascorbic acid (l-DAA) and 2,3-diketogulonic acid (l-DKG) in wheat doughs is described. Doughs with addedl-AA resp.l-DAA were included in the investigation. In all doughs thel-DAA was in its monomeric 3,6-anhydro-2-hydrate form. 2,3-DKG was not detectable.[/p]We confirm recent statements in the literature about the kinetics of the oxidation ofl-AA tol-DAA in doughs with addedl-AA. The loss of total ascorbic acid (l-AA+l-DAA) after dough making was approx. 30%. Only a small quantity ofl-AA was formed in doughs upon addition ofl-DAA. In this case the loss of total ascorbic acid was approx. 70%.[/p]From that and from investigations on doughs with 14C-labeledl-AA and measurements of the available thiol groups in doughs we conclude thatl-AA/l-DAA at least partially doesn't react like a redox system but thatl-DAA forms intermolecular condensation products with amino groups of proteins. These may contribute to improved baking quality.Zusammenfassung Es wird eine gaschromatographisch-massenspektrometrische Methode beschrieben, mit derl-Ascorbinsäure (l-AS) und die verschiedenen isomeren Formen derl-Dehydroascorbinsäure (l-DAS) und der 2,3-Diketogulonsdure (2,3-DKG) in Weizenmehlteigen getrennt und quantitativ bestimmt werden können. Teige mit Zusatz vonl-AS bzw.l-DAS wurden analysiert. Die L-DAS lag in allen Fällen in der monomeren bicyclischen 3,6-Anhydro-2-Hydrat-Form vor; 2,3-DKG war nicht nachweisbar. Bei Teigen mit Zusatz vonl-AS konnten die Angaben der Literatur über die Kinetik der Oxidation derl-AS zurl-DAS bestätigt werden. Der Verlust an Gesamtascorbinsäure (l-AS +l-DAS) lag nach dem Anteigen bei ca. 30%. In Teigen mit Zusatz vonl-DAS wurde nur wenigl-AS gebildet, der Verlust an Gesamtascorbinsäure lag in diesem Fall bei ca. 70%. Hieraus und aus Untersuchungen an Teigen mit 14C-markierterl-AS und Messungen des verfügbaren Thiolgehalts in Teigen schließen wir, dal-AS/l-DAS zumindest teilweise nicht als Redoxsystem reagiert, sondern daß diel-DAS mit Aminogruppen der Proteine intermolekulare Kondensationsprodukte bildet, die zur backverbessernden Wirkung beitragen dürften.[/p]     

Glutathion-Dehydrogenase (EC 1.8.5.1) aus Weizenmehl. Reindarstellung und Eigenschaften

Zusammenfassung Glutathion: Dehydroascorbinsäure Oxydoreduktase (EC 1.8.5.1) wurde durch Fällung mit (NH₄)₂SO₄ und lonenaustauscher-Chromatographie an CM-Sephadex und DEAE-Cellulose gereinigt. SDS-PAG-Elektrophorese ergab ein Molekulargewicht von 24200 Dalton. Die Aminosäurezusammensetzung wurde ermittelt. Das Enzym verhält sich spezifisch gegenüber dem H-Donator Glutathion und es reduziert dasl-threo-Diasteromere. Das Enzym wird durch Jodessigsäure und N-Äthylmaleinimid gehemmt. Eine Sättigungskinetik wurde nur für den H-Acceptor, aber nicht für das Glutathion beobachtet.

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Glutathathione-dehydrogenase of wheat flour. Purification and properties

Summary Glutathione: dehydroascorbic acid oxidoreductase (EC 1.8.5.1) has been purified to essential homogeneity by precipitation with (NH₄)₂SO₄, and ion-exchange chromatography on CM-Sephadex and DEAE-cellulose. The molecular weight is 24200 Dalton as determined by SDS-PAG-electrophoresis. The amino acid composition was analysed. The enzyme ist specific for glutathione as H-donor and it reduces thel-threo-diasteromer faster than thel-erythro- andd-erythro-dehydroascorbic acid. The enzyme is inhibited by iode acetic acid and N-ethyl-maleinimide. Zero-order kinetics was only observed for the hydrogen-acceptor but not for glutathione.

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Abkürzungen GSH-DH (Glutathion-Dehydrogenase) - GSH (reduziertes Glutathion) - Asc (Ascorbinsäure) - DHAsc (Dehydroascorbinsäure) Wir danken der AlF und dem Forschungskreis der Ernährungsindustrie für die finanzielle Unterstützung der Arbeit