脂联素、肿瘤坏死因子α和铁蛋白测定在2型糖尿病伴脂肪肝中的应用

寻找和确立能反映2型糖尿病患者肝内脂肪浸润程度并能进行疗效考核的血清学指标,以利能在控制血糖代谢情况下同时观察肝内脂肪沉积的改善情况.选择经腰椎3断面CT扫描示有明显肝内脂肪沉浸的23例2型糖尿病患者分作单纯罗格列酮治疗组11例(女6例,男5例)和罗格列酮、二甲双胍联合治疗组12例(男女各6例),治疗剂量为罗格列酮4 mg,天,联合治疗组加以二甲双胍2 g/天,疗程24周.在治疗前后均分别测定空腹血糖、糖基血红蛋白、胰岛素、胰岛素抵抗指数和脂联素、瘦素、肿瘤坏死因子 a(TNF-a)、铁蛋白等相关指标,进行统计学指标比较和观察.经24周治疗后,两治疗组的空腹血糖和糖基血红蛋白均有明显下降,尤其是联合治疗组疗效更佳.在肝内脂肪含量方面,单纯罗格列酮组和联合治疗组均见肝内脂肪含量百分比下降(43.3±25.8 vs 29.1±18.7,P＜0.01;43.4±21.8 vs 22.0±16.7,P＜0.01).相关的脂联素和TNF-a却与肝内脂肪含量变化密切相关.两治疗组均有明显改善(脂联素为11.96±7.3 vs 20.61±12.0 ng/mL和12.76±6.7 vs 25.81±12.8ng/mL.TNF-a为6.92±2.5 vs 5.89±1.9 pg/mL和6.81±2.14 vs 5.45±20 pg/mL,P＜0.01).尤其联合治疗组治疗前后血清铁蛋白的浓度有显著改善.(铁蛋白为345±116 vs 288±71 ng/mL和362±194 vs 258±109 ng/mL,分别为＜0.05和＜0.01).结果表明(1)应用增敏胰岛素类药物罗格列酮和二甲双胍治疗2型糖尿病患者时,除能控制血糖代谢和增加胰岛素敏感外,同时有改善肝内脂肪浸润的疗效.尤以联合治疗效果更好.(2)脂联素和TNF-a是反映肝内脂肪浸润的有效指标,与肝内脂肪浸润程度相关,可作疗效考核之用.(3)铁蛋白水平同样能反映肝内脂肪浸润程度,且方法简便和普及,在排除其他有关因素外亦可供肝内脂肪浸润程度的监测之用.     

血清3,5,3’-三碘甲腺原氨酸(T_3)酶联免疫检测试剂盒

以T_3抗体包被微孔,经处理的T_3生物素化,辣根过氧化物酶标记链亲合素(SA),四甲基联苯胺(TM)为底物,建立了T_3生物素-亲合素酶联免疫分析(T4-BA-ELISA)试剂盒的制备方法。本试剂盒的灵敏度为0.2ng/mL,批内变异因数<8.3％,批间变异因数<10.5％,回收率为98.3％～107.3％,正常参考值范围为1.4～3.8ng/mL,本试剂盒具有操作简便、灵敏、快速的特点,适于临床检测和科研应用。     

铁蛋白时间分辨荧光免疫试剂盒的研制

铁蛋白是人体内第二个含铁量最丰富的含铁蛋白。铁蛋白所含铁可因机体的需要而被动员和利用。人体血清中含有微量铁蛋白,它反映肝脏贮铁量,体内贮铁总量和机体营养状态,是检测缺铁及铁负荷过多疾病的有效指标。检测血清中铁蛋白有利于诊断缺铁性贫血,血清铁蛋白也是肿瘤标志物之一。铁蛋白与其他有关检测配合,可提高恶性肿瘤的检出率。采用双抗夹心二步法检测血清中铁蛋白的浓度,是将一株抗体包被于微孔板上,另一株配对抗体与DTTA- Eu连接作为示踪剂,标准品或样品中铁蛋白先与固相抗体反应,再加入示踪剂。增强液将铕离子解离到液相,与增强液中组分形成高效荧光螯合物。荧光强度与血清中铁蛋白浓度成正比。试剂盒的测量范围为2～1 000 ng/mL;灵敏度<0.05 ng/mL;批间、批内变异系数均<5%;其测量结果与Wallac试剂盒的测量结果有较好的相关性,相关系数r=0.96。     

血清TgAb和TPOAb水平对Graves甲亢患者131I治疗后甲减发生的影响

为评价血清甲状腺球蛋白抗体（TgAb）和甲状腺过氧化物酶抗体（TPOAb）水平对甲亢患者¹³¹I治疗后甲减发生的影响,收集2008年1月至2012年2月在本院就诊并行¹³¹I治疗的甲亢患者160例,治疗后随访1～3年。按血清TgAb和TPOAb水平将所有患者分为4组：A组TgAb＜60.00 U/mL,TPOAb＜60.00 U/mL;B组TgAb≥60.00 U/mL,TPOAb＜60.00 U/mL;C组TgAb＜60.00 U/mL,TPOAb≥60.00 U/mL;D组TgAb≥60.00 U/mL,TPOAb≥60.00 U/mL。分析血清TgAb和TPOAb水平对甲减发生的影响。结果发现,患者总甲减发生率为34.4%,各组间¹³¹I治疗后甲减发生率有差异（P=0.034＜0.05）,且C组和D组甲减发生率均较A组高,差异有统计学意义（P分别为0.041＜0.05和0.005＜0.01）;Logistic回归分析提示,血清TgAb水平（Wald=4.145,P=0.042＜0.05）和TPOAb水平（Wald=6.850,P= 0.009＜0.01）是¹³¹I治疗后甲减发生的重要影响因素。综上可知,治疗前血清TgAb和TPOAb水平增高是甲亢患者¹³¹I治疗后甲减发生的危险因素,对于治疗前血清TgAb或/和TPOAb水平增高（尤其是两者水平同时显著增高）的患者,¹³¹I剂量应适当减小以降低甲减发生率。     

磺胺二甲嘧啶抗体的制备及酶联免疫分析方法的建立

应用人工合成免疫原免疫动物、杂交瘤融合技术制备出抗磺胺二甲嘧啶的单抗及多抗.抗体亲和常数均大于1.0×108 L/mol.利用多抗2510建立酶联免疫分析方法.该方法测量范围为0.1～30 ng/mL,灵敏度为0.08 ng/mL,批内变异<15%,批间变异<21%.不同样品回收率在80.5%～137.8%之间,稀释实验测定值与稀释度呈线性相关,相关系数为0.997.     

血管抑素的131I标记及其对裸鼠A549肺肿瘤的作用

采用一步法从人血浆中分离血管抑素(Angiostatin,AS),并用L-Lysine Sepharose 4B作亲和层析纯化;将提纯的AS用Iodogen固相法进行131I标记,分析131I-AS的标记率、比活度,并评价其体外稳定性;32只荷A549肺肿瘤的裸鼠随机分为4组,腹腔注射131I-AS(含11.1 MBq131I,AS为12.5 mg/kg)1、31I 11.1MBq、AS 12.5 mg/kg和生理盐水0.3 mL,1次/周,治疗4周,观察28 d内肿瘤体积的变化。结果显示,131I-AS标记率为77.8%~86.7%,比活度为1.28~3.96 TBq/g,放化纯度为98.6±0.26%。标记产物-20℃存放7 d,放化纯度降至72%;治疗28 d后,131I-AS组1、31I组、AS组和生理盐水组小鼠肿瘤的体积分别是(1 956±98)(、5 284±123)(、3 948±115)(、7 350±153)mm3。以上结果提示,131I-AS能较强地抑制小鼠体内移植肿瘤的生长,其抑制作用优于单纯应用等浓度的AS及131I,131I-AS在治疗肿瘤中有潜在的应用前景。     

北五味子的辐射防护效应及其机理

口服北五味子(Schizandra Chinensis Baill)醇溶性部分能使受半致死剂量全身照射的治疗组小鼠存活率达到80％,死亡小鼠平均存活期从10.5天延长到15天。预防组的存活率达到68.4％。醇溶性部分也能调整受照射小鼠的神经活动。在受~(60)Co约1070rad全身照射小白鼠的预防组或治疗组中,北五味子煎剂均能提高肝、脑和肌肉的抗氧化能力,治疗组高于预防组。五味子素粗晶及五味子乙素,无论在体内外都能提高肝及脑对脂类过氧化作用的抗氧化能力。     

CACPPA的99Tcm标记及其动物实验研究

在pH8.5～9.5的水溶液中,采用氯化亚锡还原法制备99Tcm-CACPPA,TLC和HPLC检测其标记率和放化纯均大于90%.小鼠体内分布表明,心肌最高摄取率为18.17±2.67%ID/g;小鼠血药动力学研究表明99Tcm-CACPPA的血液清除快,T1/2α为1.11min,T1/2β为20.08min,清除速率为0.407mL/min.99Tcm-CACPPA的体内外血浆蛋白结合率高,pH7.00和pH7.40时分配系数分别为10.98和11.45;代谢干预研究结果表明,葡萄糖胰岛素组心肌摄取升高,与对照组相比,差异具有显著性意义.     

血糖浓度对荷瘤小鼠18F-FDG体内分布的影响

为探讨血糖浓度对荷瘤小鼠18F-FDG体内分布的影响,取35只皮下接种艾氏腹水癌(EAC)一周后的小鼠禁食20h,随机分为对照组(n=11)与糖负荷组(n=12),分别给予蒸馏水和50%葡萄糖0.5mL灌胃,另有两组分别给予10%葡萄糖(5只)和30%葡萄糖(7只)0.5mL灌胃,1h后测血糖并尾静脉注射18F-FDG,再1h后放血处死,计算各组织SUV及肿瘤SUVc。糖负荷组荷瘤小鼠血糖浓度(11.98±3.01mmol/L)较对照组(3.95±1.11mmol/L)显著升高(P<0.01);糖负荷组小鼠的肿瘤、脑、脾、血SUV及肿瘤与肌肉摄取比(1.34,0.86,0.48,0.09,1.38)显著低于对照组(3.02,2.62,0.80,0.16,5.38)(P<0.01),心、肌肉SUV及肿瘤与脑、心与血摄取比(8.31,1.05,1.58,103.00)显著高于对照组(1.57,0.64,1.20,9.73)(P<0.01);肺、肝、肾SUV及肿瘤SUVc在两组间无显著差异(P>0.05)。肿瘤、脑、脾、血SUV及肿瘤与肌肉摄取比与血糖浓度呈显著性负相关,r分别为:-0.76,-0.92,-0.78,-0.48,-0.63(P<0.01);心、肌肉SUV及肿瘤与脑、心与血摄取比、肿瘤SUVc与血糖浓度呈显著性正相关,r分别为:0.85,0.43,0.51,0.85,0.45(P<0.01)。结果表明,血糖浓度变化显著影响荷瘤小鼠肿瘤及正常组织对18F-FDG的摄取。     

碘标延胡索乙素及其小鼠体内分布

本文通过131I标记延胡索乙素(THP)以探讨其在小鼠体内的分布代谢.采用氯胺-T法对THP进行131I标记;以三氯甲烷萃取,聚酰胺薄膜为介质、正己烷:三氯甲烷:甲醇:醋酸=2:3:0.5:0.055(V/V)为展开剂,测定标记物的标记率和放化纯;KM小鼠尾静脉注射131I-延胡索乙素(185 kBq/只,n=6),分别于注射后5、10、30、60、120、240、1440 mim取各脏器、及脑部额叶、顶叶、枕叶、海马、纹状体、丘脑和血,称重、计数,计算每克组织百分注射剂量率(%ID·g-1),结果表明,131I-延胡索乙素标记率达76%,纯化后其放化纯为97.3%,7和20天后分别为95.4%、96.8%;动物实验显示131I-延胡索乙素在小鼠体内广泛分布,主要经肝和肾进行代谢,5min时%ID·g-1分别为14.35、6.55,脂肪和肠也有较高分布,5min时ID·g-1分别为3.05、3.91;脑组织中5-10min即达峰值,各脑区均有分布,其中以顶叶、额叶和小脑略高,2h后脑中基本代谢完毕.由此可见,碘标延胡索乙素标记物稳定,体内主要经肝肾代谢,脂肪及脑内各区域也有较高分布,可用于进一步的微量示踪研究.     

18FDG-PET/CT评价顺铂联合吲哚美辛及其衍生物对Lewis肺癌治疗效果的实验研究

为评价吲哚美辛及其衍生物组胺吲哚美辛对鼠Lewis肺癌的治疗效果,建立40只Lewis肺癌昆明小鼠腋下移植瘤模型,并随机分为四组:顺铂(DDP)治疗组、顺铂+吲哚美辛(DDP+Indomethacin IN)治疗组、顺铂+组胺-吲哚美辛(DDP+His-IN)治疗组及生理盐水对照组。各组小鼠于治疗前后各行PET/CT显像及取眼眶血0.2 mL,留取肿瘤组织进行组织学检测。结果显示,治疗后不同治疗组与生理盐水对照组比较靶本比均有显著性差异(P<0.05),各组治疗后TNF-α含量均升高,以DDP+His-IN组更为显著;抑瘤率未见明显差异(P>0.05)。表明IN、His-IN与DDP联合用药抗肿瘤效果好,尤其DDP与His-IN联合应用抗肿瘤效果更佳;另外,T/B比值变化能较早反映化疗药物的抗肿瘤效果。     

血清BAP和PSA测定在前列腺癌骨转移诊断中的价值

我们分析、比较了骨源性碱性磷酸酶(BAP)和前列腺特异抗原(PSA)对前列腺癌骨转移的诊断意义,并探讨了二者在前列腺癌骨转移分级中的应用价值。对68例前列腺癌病人进行骨显像,根据骨显像结果及临床表现分为骨转移组与非骨转移组。骨显像依Soloway分级标准分为五级(M0—M4)。对所有病人进行血清BAP与PSA检测,各组之间BAP值及PSA值比较采用t检验。对转移级别的升高与BAP值之间进行相关分析。结果显示骨转移的级别升高与BAP呈正相关。(r=1.1083,P<0.01)。PSA仅在M0与M1—M3之间有显著差异。BAP对前列腺癌骨转移最佳检测范围为25—35u/L,阳性预测率为96.6%,阴性预测率为75%。BAP与PSA值分别为35u/L和20ng/mL时,骨转移阳性预测率为97.5%。BAP与PSA值分别为25u/L和20ng/mL时,阴性预测率达73.9%。由此我们得出:1.BAP预测前列腺癌骨转移比PSA有效,并且BAP对前列腺癌骨转移的分级有诊断价值;2.BAP与PSA联合应用可提高前列腺癌病人骨转移的阳性预测率。     

~(125)I-6-酮-前列腺素F_(1α)放射免疫分析试剂盒的研制

研制了~(125)I标记的PGI_2稳定的代谢产物6-酮-PGF_(1α)RIA试剂盒。以碳化二亚胺法将6-酮-PGF_(1α)与BSA联接免疫家兔制备抗血清,其效价为1:32000,平衡常数为6.26×10~9L/mol,与其它前列腺素的相对百分交叉反应<1%。用氯胺T法制备~(125)I-组织胺-6-酮-PGF_(1α)标记物,比放射性活度>14.8MBq/μg(400μCi/μg),最高结合率>80%,二月内无脱碘现象。放免测定按常规法,最低检出值为2,2pg/管,检出率为97.2～102.3%,精密 度为6.62%,批内和批间C.V.分别为7.17、8.41%,Cerceo“效点系统”评分为31分,属优良。直接测定健康成人血浆6-酮-PGF_(1α)浓度为22.9±6.3pg/mL。     

液闪法研究63Ni-NiCl2在大鼠体内的吸收、分布及排泄

采用液体闪烁计数法研究了63Ni-NiCl2在大白鼠体内的吸收、分布以及排泄。结果显示:63Ni-NiCl2在大白鼠体内的血药时间-浓度曲线符合二房室开放模型,吸收速率常数Ka=6.18/h,分布相半衰期T1/2(α)=0.79 h,消除相半衰期T1/2(β)=40.68 h,清除速率常数CL=0.42 mL.kg-1.h-1,达峰时间Tpeak=0.53h,达峰浓度Cmax=14.99 GBq/L,表观容积分布Vd=0.016 L/kg;在所测的12种组织中均有63Ni-NiCl2放射性摄取;在灌胃0.25 h时,肠、胃、腹膜后脂肪放射性摄取较高,3 h时,肠、胃、肝放射性摄取较多,生殖腺放射性摄取最少,24 h肝肺放射性摄取偏高;24 h内粪尿排出给药量的83.26%,其中经过尿液排出54.86%,经过粪便排出28.41%。     

110Agm在大亚湾表层沉积物上的吸附和解吸

为了解放射性核素110Agm在大亚湾水域中的迁移和运输,采用批次法研究了4个大亚湾表层沉积物在天然海水中对110Agm的吸附和解吸行为.在吸附反应体系中,Ag+的质量浓度为1.3 ng/mL,110Agm的放射性浓度为10.0 Bq/mL,海水的pH为8.20,盐度为32.0,固液比为1.0 mg/mL时,在短时间(约40 s)内,110Agm的吸附率即达到28.6%.说明大亚湾表层沉积物对110Agm存在一个快速吸附过程;在吸附时间1 h以内吸附率变化很小,4个沉积物的平均吸附率为30.0%;从1 h～5 d,吸附率可上升至64.4%;5 d以后吸附趋于平衡,吸附分配比平均为1.86×103 mL/g,与解吸实验达到平衡时的吸附分配比1.90×103 mL/g相同.在固液比为4～250 mg/L时,110Agm的吸附分配比随固液比的增加而减小,在250～1 000 mg/L内,随固液比的增加而增加,当固液比大于1 000 mg/L时,分配比基本上保持一个恒定值.     

沉默乏氧诱导因子-1α和生存素基因联合放疗对裸鼠移植人肝癌的抑瘤效应

为探讨RNA干扰(RNA interference,RNAi)乏氧诱导因子-1α(Hypoxia induced factor1α,HIF-1α)和生存素(Survivin)基因联合X射线照射对裸鼠移植人肝癌细胞SMMC-7721的抑瘤效应,肿瘤局部注射脂质体包裹的靶向HIF-1α和/或Survivin基因的RNA干扰质粒后,接受5Gy X射线照射。观察各组裸鼠治疗后不同时间肿瘤体积和平均存活时间,以免疫组化染色法检测肿瘤组织Survivin、HIF-1α、增殖细胞核抗原(Proliferation cell nuclear antigen,PCNA)表达和肿瘤间质微血管密度,以TUNEL法检测肝癌细胞凋亡。结果表明,治疗开始后第9-21天,双干扰联合放疗组裸鼠肿瘤体积显著小于单干扰联合放疗组,且平均生存时间明显延长。治疗结束后1天,双干扰联合放疗组裸鼠肿瘤组织Survivin、HIF-1α、PCNA表达和肿瘤间质微血管密度明显低于对照组和放疗组,双干扰联合放疗组移植瘤凋亡细胞百分数较其它组明显升高。结果提示,双干扰联合放疗可有效地抑制裸鼠移植人肝癌细胞增殖和血管生成,促进细胞凋亡,其抑瘤效应明显优于放疗和单干扰联合放疗。     

淫羊藿素对人角质形成细胞HaCat辐射损伤的保护作用

研究淫羊藿素对人角质形成细胞HaCat的放射防护作用。将HaCat细胞分成正常对照组、单纯淫羊藿素组、单纯照射组以及照射+淫羊藿素高/中/低剂量组。以6 MV X射线(剂量率为0.5 Gy/min),给予照射组和各个加药照射组细胞20 Gy的单次照射。所有药物处理组均于照射前6小时给予不同浓度的淫羊藿素处理,细胞照射后1小时,采用DCFH-DA探针检测细胞内活性氧水平、6小时使用实时荧光定量PCR法测定炎症因子mRNA表达水平、24小时采用硫代巴比妥酸法检测胞内丙二醛水平、48小时CCK-8法检测细胞的增殖能力、Annexin V-PI双染检测细胞凋亡、酶联免疫吸附法测定炎症因子分泌水平。结果表明,HaCat细胞经20 Gy的X射线照射后,细胞生存率下降,细胞凋亡率升高。给予淫羊藿素处理,可以刺激其增殖,提高细胞生存率,降低细胞凋亡比例。照射后细胞内活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)的含量显著升高,淫羊藿素处理可以降低两者的含量,保护细胞。同时受到照射的HaCat细胞炎症因子IL-1β、IL-6以及TNF-α表达和分泌的量显著升高,淫羊藿素可以抑制这些因子的表达,减少其分泌。实验结果证明,淫羊藿素对HaCat细胞存在明显的放射保护作用,具有促进增殖、抑制凋亡、抗氧化和抗炎的能力,有望成为防护放射性皮肤损伤的中药防护剂。     

133Xe气体放射性浓度的绝对测定

本文描述了133Xe放射性气体源的制备和测量系统,研究了内充气正比计数管绝对测量133Xe放射性活度的方法和技术.扣除放射性杂质后,用长度补偿法确定了参考时刻下所测133Xe源的放射性浓度为42.86(1±0.82%)Bq/mL.     

pEgr-IFNγ基因-放射治疗对荷瘤小鼠抑瘤效应的研究

探讨pEgr-IFNγ基因-放射治疗小鼠体内抗肿瘤作用的适宜照射剂量和质粒注入量。观察不同剂量X射线照射及瘤内不同量pEgr-IFNγ重组质粒注入,基因-放射治疗在接种B16黑色素瘤小鼠体内抑瘤效应的差异,并用酶联免疫吸附法(ELISA)法检测各组小鼠外周血IFNγ含量。结果表明,质粒注入后接受20Gy X射线照射组照后3—27d,肿瘤生长速率明显低于2Gy和10Gy照射组(p<0.001),且小鼠平均生存时间明显延长(p<0.001)。质粒注入量为20μg或30μg的联合治疗组照后3—27d,肿瘤生长速率明显低于注入量为10μg的联合治疗组(p<0.05—0.001),且平均生存时间明显延长(p<0.01)。基因-放射联合治疗组受照射后第1天和第3天外周血IFNγ含量明显高于单纯基因治疗组均为(p<0.05)和对照组,分别为(p<0.01,p<0.05)。结果显示,pEgr-IFNγ基因-放射治疗小鼠体内抗肿瘤作用的适宜照射剂量为20Gy,质粒注入量为20μg;联合治疗组可能通过诱导瘤内IFNγ基因表达增强,使血液中的IFNγ浓度升高,进而增强机体免疫功能和抗肿瘤能力。     

99Tcm-MIBI心、肝时相显像对门脉性肝硬化门-体分流诊断的研究

通过心、肝时相显像对门脉性肝硬化门-体分流诊断的研究,验证门-体分流值的临床意义.方法是对10例正常者及36例门脉性肝硬化患者采用99Tcm-MIBI直肠给药,分别在15-240min内的7个不同时相获取H/L比值及SI,以便对肝硬化所致的门-体分流及程度进行分析.结果显示正常组与肝硬化A、B、C组H/L比值有极显著性差异(t分别为15.87、11.76、16.11,P＜0.001),SI与H/L比值有良好匹配性.肝硬化Child-pugh分级之间均有显著性差异(P＜0.001).C组6例患者所测的SI与手术中所测的门静脉自由压具有良好的相关性(r=0.926,P＜0.001).以上结果说明该方法可客观反映门脉性肝硬化门-体分流的程度,有助于肝硬化的分级及门脉压力的了解,可为临床提供有价值的诊断依据.