时间分辨荧光免疫层析法定量检测稻谷中的镉

本研究制备了一种用于稻谷中镉检测的时间分辨荧光免疫层析定量检测卡。采用铕纳米微球作为荧光探针,标记抗Cd-EDTA的单克隆抗体,基于竞争抑制原理建立免疫层析定量方法并对其进行方法学研究。结果表明：定量检测卡的灵敏度为0.088 ng/mL,标准曲线线性范围为0.1ng/mL～5.0 ng/mL,检出限和定量限分别为0.026 mg/kg和0.064 mg/kg,对有证标准物质的正确度在81.0%~91.7%之间,对实际样本的检测与ICP-MS检测结果一致性较高。该法重复性较好,变异系数在10%以内。结果显示,该法灵敏度高、操作简便、成本低廉,因此,非常适合基层单位大量样本的快速初步筛查。     

荧光免疫层析法检测粮食谷物中重金属铅的前处理研究

基于时间分辨荧光纳米微球的重金属铅快速定量检测卡，通过对样品前处理的研究，确定了最佳提取液为0.5～1 mol/L HCl，最佳螯合剂为1～2 mmoL/L ITCBE，提高了粮食谷物中重金属铅的检测灵敏度，使得检测卡能满足粮食谷物中重金属铅快速检测的需求。并对重金属铅荧光定量检测卡的性能进行检测，其最低检出限LOD为7.428μg/kg,最低定量限LOQ为20.830μg/kg,线性范围为25～1 000μg/kg,线性范围内的添加回收率为96.43%～108.34%, 5次重复的变异系数在10%以内，其准确性和可靠性均可以满足欧盟和我国对重金属铅的分析标准的技术要求，且该方法具有简便快速、准确可靠、重复性好等特点，可用于不同粮食谷物中重金属铅的快速定量检测分析。     

基于时间分辨荧光纳米微球的伏马毒素B1快速定量检测卡的制备及应用

为了满足粮食谷物中伏马毒素B1快速定量检测的需求,以伏马毒素B1为研究对象,建立了基于时间分辨荧光纳米微球的FB1荧光快速定量检测卡,检测前无需调整样品提取液p H,并借助酶联免疫试剂盒及高效液相色谱法分析比对了该荧光定量快速检测卡在粮食谷物（大米、玉米、小麦）中的检测性能。结果表明其检测不同样品的LOD在35.37～37.17μg/kg之间,LOQ在117.9～123.9μg/kg之间,灵敏度良好;线性范围均为250～6 000μg/kg,相关系数R2在0.997 2～0.999 5之间;不同样品中6个添加水平的加标回收率为83.38%～114.66%,变异系数（CV）小于15%,准确性和重复性良好;国标液相色谱法和伏马毒素B1荧光定量快速检测卡同时检测FB1污染的不同样品,检测结果的符合度为92.53%～106.26%,CV小于10.37%;与其他常见的5种真菌毒素的交叉反应率均小于5%,且添加浓度和检出浓度的差异极显著,表明特异性良好。因此,所制备的FB1荧光定量快速检测卡能够满足粮食谷物中伏马毒素B1现场化快速定量检测的需求。     

聚集诱导发光微球免疫层析试纸条定量检测水产品中孔雀石绿

目的 建立一种用于定量检测水产品中孔雀石绿的高灵敏免疫层析检测新方法。方法 以聚集诱导发光荧光微球为标记探针,制备荧光免疫层析试纸条,通过T/C比值法构建定量检测孔雀石绿的定量标准曲线,并实现水产品中孔雀石绿的高灵敏、定量检测。结果 本方法定量检测水产品中孔雀石绿具有较高的检测灵敏度,其50%抑制率达到0.17μg/kg,最低检出限为0.05μg/kg。样本加标0.25、0.50、1.00μg/kg的平均回收率介于116.01%～122.76%,变异系数介于8.66%～11.71%(n=10),表明所建立的荧光免疫层析方法定量检测水产品中孔雀石绿具有较好的准确性、精密度。通过检测30份孔雀石绿阴性以及12份阳性的水产样本,结果表明所建立的荧光免疫层析方法无假阳性,且检测孔雀石绿含量与液相色谱-串联质谱法具有良好的一致性(线性相关系数为0.9695)。结论 本研究以聚集诱导发光荧光微球为新型标记探针,建立了一种高灵敏检测水产品中孔雀石绿的定量方法,为水产品中孔雀石绿的筛查检测提供了技术支撑。     

高灵敏度磁荧光免疫层析试纸模式构建及在呕吐毒素检测中的应用

构建基于磁荧光纳米材料的免疫层析试纸模式,弥补现在免疫层析技术的不足,为更灵敏的免疫学快速检测提供技术支撑。以呕吐毒素（deoxynivalenol,DON）为靶标,采用溶剂热法制备羧基修饰的超顺磁颗粒,碳二亚胺法将磁颗粒、绿色荧光蛋白及DON单克隆抗体进行偶联,一步法制备磁荧光抗体探针,以DON人工抗原（DON-BSA）为检测线建立磁荧光免疫层析试纸。同时用胶体金标记DON单克隆抗体,以DON-BSA为检测线建立胶体金免疫层析试纸;制备的磁荧光抗体探针具有很好的磁性、荧光特性及抗体反应性,基于该探针成功制备了DON磁荧光免疫层析试纸,该试纸回归方程为y=－0.562x＋0.921,R2=0.990,IC50为5.611 ng/mL,检出限为1.089 ng/mL;制备了DON胶体金免疫层析试纸,该试纸裸眼检测灵敏度为500 ng/mL;定量检测回归方程为y=－0.543x＋1.485,R2=0.991,IC50为65.16 ng/mL,检出限为11.94 ng/mL。DON磁荧光免疫层析试纸的灵敏度是胶体金免疫层析试纸的10.96 倍。本实验建立的磁荧光免疫层析试纸模式可以同时实现样品的富集及荧光信号检测,提高检测灵敏度,并成功用于DON的检测,为磁荧光纳米颗粒广泛应用于免疫层析领域提供参考。     

量子点荧光微球免疫法定量检测小麦中黄曲霉毒素B1

摘 要: 目的 建立量子点荧光微球免疫法快速检测小麦中黄曲霉毒素B1的方法。方法 采用量子点荧光微球作为荧光标记物,与黄曲霉毒素B1的单克隆抗体偶联,构建量子点荧光微球探针。优化缓冲液pH、抗体最小标记量、荧光探针用量和包被抗原浓度等实验条件,建立检测卡上T线和C线信号峰值面积的比值与样本中黄曲霉毒素B1浓度的关系,构建定量标准曲线。针对小麦样品,将该检测方法与时间分辨荧光定量检测方法进行比较。结果 本研究建立的荧光定量免疫层析检测方法最佳反应条件为：pH 7.5磷酸钠缓冲液,抗体标记量为20 μg,荧光探针用量为4.0 μL,抗原质量浓度使用0.40 mg/mL。小麦中黄曲霉毒素B1的定量检测线性范围为0.05 μg/kg-25 μg/kg,其线性拟合方程为Y= -0.6058X + 12.523（r2=0.9994）,检出限为0.02 μg/kg,定量限为0.05 μg/kg。加标回收率在91.50%~115.00%之间,变异系数在1.88%~4.35%之间。结论 本研究建立的荧光定量免疫层析方法快速、准确、稳定性好、可靠性高,适用于小麦中黄曲霉毒素B1的现场快速检测。     

基于时间分辨荧光快速定量检测谷物中的T-2毒素

研制开发了一种基于时间分辨荧光纳米微球的T-2毒素快速定量检测卡,并对其在谷物中的检测性能进行了研究。本研究对标记工艺、划线工艺进行了探索,通过对微球偶联时间、封闭时间等优化,确认了最佳偶联时间为30 min,最佳封闭时间为60 min;通过对NC膜的筛选、划线湿度的摸索,确认了最佳NC膜为140膜,最佳划线湿度为45%～55%。同时,对该T-2毒素快速定量检测卡进行了性能验证：该检测卡的检测限为0.480μg/kg,定量限为1.020μg/kg,添加回收定量范围为1～100μg/kg,准确度86.09%～119.57%,重复性在11.95%以内,交叉反应率<5%。具有快速定量、简单便捷、高灵敏度、高特异性、可靠性强、重复性好等优点,适合对谷物中T-2毒素进行快速定量测定。     

荧光定量免疫层析法测定鸡肉和牛奶中的氯霉素

目的建立一种荧光定量免疫层析法测定动物源性食品鸡肉与牛奶中氯霉素残留的分析方法。方法将氯霉素鼠单克隆抗体与羧基化铕微球进行偶联标记。经过荧光微球活化、探针偶联等一系列条件优化确定最佳反应体系条件,根据纸条测试线(T线)信号值与质控线(C线)信号值的比值(T/C)和样本中氯霉素浓度建立定量标准曲线。针对鸡肉和牛奶样品,对荧光免疫层析检测方法的灵敏度、准确度和精密度等进行评价,并与液相色谱-串联质谱法(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)标准仪器分析方法进行比较。结果本研究建立的荧光免疫层析检测方法对鸡肉和牛奶中氯霉素残留的检出限分别为0.041μg/kg和0.040μg/kg,定量限分别为0.079和0.100μg/kg,添加回收率在76.26%～112.92%之间,变异系数均小于15%。结论本研究建立的荧光定量免疫层析方法灵敏度高、稳定性好,且与使用仪器方法得到的检测结果一致性较高,适用于鸡肉和牛奶中氯霉素残留的现场快速检测。     

玉米赤霉烯酮时间分辨荧光试纸条的制备及特性研究

研究制备一种基于时间分辨荧光免疫层析法的玉米赤霉烯酮(ZEN)快速定量检测试纸条.采用铕纳米微球作为荧光探针,标记抗ZEN的单克隆抗体,应用竞争抑制原理建立免疫层析定量方法并对其进行方法学考核.结果表明:ZEN荧光试纸条的灵敏度为0.1 ng/mL,线性范围为0.1～5.0 ng/mL,玉米、小麦阴性样品的加标回收率在...     

量子点微球荧光免疫层析定量检测水产、畜禽肉组织中恩诺沙星

目的 建立一种快速定量检测水产、畜禽肉组织中恩诺沙星的新方法学。方法 以量子点荧光微球为新型标记探针,通过参数优化,制备获得量子点荧光微球免疫层析试纸条;进一步以T/C比值法建立定量检测恩诺沙星的新方法。结果 在最优条件下,该试纸条检测缓冲液中恩诺沙星半数抑制浓度为1.035 ng/mL,最低检测限为0.125 ng/mL;检测水产、畜禽肉组织中恩诺沙星的定量检测范围为8.75~560 μg/kg,半数抑制浓度为72.45 μg/kg,加标回收实验显示该方法定量检测组织样本中恩诺沙星的回收率在83.03~124%之间,变异系数小于15%,检测15个实际含有恩诺沙星的水产以及畜禽肉组织样本,其结果与LC/MS/MS方法检测结果高度一致;此外,加速保存实验结果显示该试纸条在室温下可保存一年。结论 本研究以量子点荧光微球为新型标记探针,构建了高灵敏定量检测恩诺沙星的新方法,实现了水产、畜禽肉组织中恩诺沙星的简单、快速、定量分析。     

水产品中氯霉素时间分辨荧光免疫层析定量检测方法

该研究旨在建立一种简单、快速、高灵敏的鱼、虾和蟹中氯霉素残留的荧光定量免疫层析检测方法,以满足水产品中氯霉素残留检测的需求。通过将氯霉素鼠单克隆抗体G375-5与羧基化铕微球进行偶联标记,氯霉素抗原和羊抗鼠二抗分别包被于硝酸纤维素膜(NC)上作为检测线(T)和控制线(C);根据T线信号值与C线信号值的比值(T/C)和样本中氯霉素浓度建立定量标准曲线;针对鱼、虾、蟹样品,对荧光免疫层析检测方法的灵敏度、准确度和精密度等进行评价,并将其在实际水产样品中与HPLC法进行结果对比。结果表明,该研究建立的时间分辨荧光免疫层析检测方法对水产品中氯霉素的定量限为0.1μg/kg,添加回收率为73.5%～114.2%,变异系数3.9%～11.5%,与国标仪器方法检测结果的一致性较高。因此,该研究所建立的时间分辨荧光免疫层析检测方法在水产品氯霉素的快速检测工作中具有较高的应用价值和应用前景。     

玉米赤霉烯酮时间分辨荧光试纸条的制备及特性研究（网络首发、推荐阅读）

研究制备一种基于时间分辨荧光免疫层析法的玉米赤霉烯酮（ZEN）快速定量检测试纸条。采用铕纳米微球作为荧光探针,标记抗ZEN的单克隆抗体,应用竞争抑制原理建立免疫层析定量方法并对其进行方法学考核。结果表明：ZEN荧光试纸条的灵敏度为0.1 ng/mL,线性范围为0.1~5.0 ng/mL,玉米、小麦阴性样品的加标回收率在93.45%~112.20%之间,对于同一个样品5次重复测定的变异系数小于15%。ZEN快速定量检测试纸条具有灵敏度高、反应时间短、准确定量、稳定性好等技术特点,适用于谷物及制品中玉米赤霉烯酮的快速定量检测。     

基于荧光微球的免疫层析法快速检测黄曲霉毒素B_1

本研究采用荧光微球纳米粒子作为免疫标记物,偶联黄曲霉毒素B_1单克隆抗体制备纳米探针,建立了决明子中黄曲霉毒素B_1的荧光微球免疫层析定量检测方法。结果表明:方法的线性范围为0.1～2.0 ng/m L,灵敏度为0.034ng/m L。该方法具有快速和简便等优点,可满足现场快速定量筛查的需求。     

利用荧光免疫层析卡测定黄曲霉毒素M1的研究

将量子点与抗黄曲霉毒素M1(AFM1)的单克隆抗体偶联,以AFM1-BSA偶联物包被于NC膜作为检测线,山羊抗鼠二抗包被于NC膜上作为质控线,构建了直接竞争检测AFM1的荧光定量免疫层析检测卡体系,在0.156μg/L~1.25μg/L范围内能够准确定量黄曲霉毒素B1,灵敏度达到0.156μg/L。     

粮食中真菌毒素快速定量检测方法应用比较研究

采用便携式真菌毒素快速定量检测仪对玉米中黄曲霉毒素B1和呕吐毒素进行定量检测,同时与酶联免疫法对比检测结果。结果显示黄曲霉毒素B1快速定量检测卡检出限为1.75μg/kg;准确性与所采用酶联免疫法无显著差异;检测结果变异系数范围在7%~11.2%之间,平均变异系数为8.7%;定量检测仪台间无显著差异。呕吐毒素快速定量检测卡检测限为0.078 mg/kg;定量检测仪台间无显著差异;采用便携式定量检测仪具有简单、快速、成本低、能实现现场操作且实时上传数据并记录监测地点位置等优势,具有较好的推广使用价值,特别适用于卫生调查、研究、筛查等现场使用。     

膜种类及前处理方式对原奶中葡萄球菌肠毒素层析试纸条检测的影响

对用于原料奶中葡萄球菌A、B、C型肠毒素现场快速检测的免疫层析试纸条进行了初步研究。研究内容主要包括层析膜和原奶预处理方法的选择及优化,通过实验,最终选择了型号为HF09002的层析膜,采用了2倍稀释的样品预处理方法,研制所得的3种免疫层析试纸条分别检测原奶中SEA的灵敏度为10 ng/mL,SEB的灵敏度为4 ng/mL,SEC的灵敏度为8 ng/mL,与3 MTM TecraTM微孔板法检测结果相比无显著性差异。     

特布他林残留酶联免疫检测方法的建立

采用自主制备的特布他林特异性抗体建立特布他林残留的间接竞争酶联免疫(ELISA)检测方法,对该检测体系的灵敏度、准确度、精密度、特异性进行测定,并将该检测方法与高效液相色谱(HPLC)法进行对比分析。结果表明:特布他林残留检测体系的检测范围为1～100ng/mL,灵敏度为0.47ng/mL,检测限为1ng/mL,回收率80%～99%,与盐酸克伦特罗、硫酸沙丁胺醇的交叉反应率分别为94.9%、93.9%,与盐酸莱克多巴胺及肾上腺素的交叉反应率小于0.01%。采用HPLC法进行沙丁胺醇残留的检测时,其检测范围为10～200μg/mL,检测限为1μg/mL,回收率为79.2%～94.8%。ELISA法与HPLC法相比,灵敏度较高、特异性强、检测结果准确度相近,但在检测结果稳定性方面逊于HPLC法。     

扇贝过敏原荧光免疫层析检测方法的构建与应用

目的 构建一种简便、快速、可降低非特异性荧光干扰的时间分辨免疫层析检测方法,实现快速检测扇贝中原肌球蛋白(tropomyosin,TM)过敏原。方法 本研究采用双抗体夹心免疫层析法,以含有铕(Eu)纳米微粒的荧光微球作为标签偶联兔抗TM多克隆抗体,制备荧光探针并对其进行表征。以4 mg/mL兔多克隆抗体作为T线,羊抗兔免疫球蛋白G (immunoglobulin g,IgG)作为C线组装免疫层析试纸条。结果 本研究组建的试纸条视觉检出限为0.05μg/mL,仪器检出限为0.01μg/mL。试纸条除对虾蟹有交叉反应外,对其他10余种物种无明显交叉反应。加标样品批内和批间变异系数分别为3.71%～7.94%和12.09%～12.80%,在不含TM的4种食物基质中加入浓度由低到高的TM,检测结果与实际加标情况相符。结论 本检测方法准确性良好、灵敏度高、特异性强,可在多种食物基质中实现对扇贝TM的快速检测。     

分子印迹固相萃取-高效液相色谱法测定植物油中11种多环芳烃

建立了同时测定植物油中11种多环芳烃的分子印迹固相萃取-高效液相色谱荧光检测方法。样品使用环己烷溶解,经分子印迹固相萃取柱净化,得到的洗脱液氮吹后使用乙腈复溶,通过PAHs专用C_(18)色谱柱分离,采用高效液相色谱-荧光检测器定量检测。结果表明:本方法在0. 5～200 ng/mL线性关系良好,11种组分加标回收率在63.5%～118.6%,相对标准偏差1.4%～18.2%,最低检出限为0.03～1.50μg/kg,定量限为0. 10～5. 00μg/kg。本方法前处理简单、快速、灵敏度高,适合植物油中多环芳烃的快速准确测定。     

呕吐毒素时间分辨荧光免疫层析法的建立与评价

构建并评价了呕吐毒素(Deoxynivalenol,DON)时间分辨荧光免疫层析法(TRFIA)。以Eu3+螯合物的纳米微球为荧光探针标记抗DON单抗,采用竞争抑制建立免疫层析定量方法,优化了微球与抗体标记量,检测的环境温度、反应时间、加样体积及缓冲体系;研究了方法的灵敏度、精密度及准确度。结果表明,每100 μL荧光微球结合纯单抗50 μg,最佳划膜浓度为1.0 mg/mL,最佳测定条件为室温(25±2)℃,10 min,加样体积100 μL,PBS (0.01 mol/L,pH7.2)的缓冲体系,方法的灵敏度为0.25 ng/mL,线性范围为0.5~25.0 ng/mL,玉米、小麦阴性样本(加标浓度200、500、1000、2000 μg/kg)平均加标回收率为91.4%~109.3%,6种典型样本经TRFIA与免疫亲和净化-高效液相色谱法(IAC-HPLC)同时测定DON含量,相关系数r达0.9754。TRFIA具有灵敏度高、速度快、定量准等技术特点,适用于谷物及制品中DON的快速定量。