β-伴大豆球蛋白的水解研究

采用Nagano法从豆粕中分离β-伴大豆球蛋白并酶解制备水解肽,以单因素试验和正交试验确定酶解最佳条件,通过高效液相法分析β-伴大豆球蛋白水解肽的分子量分布,比较并检测了β-伴大豆球蛋白水解肽和大豆分离蛋白水解肽的体外抗氧化效果。结果显示:在20g/L的底物浓度下的最佳条件为酶和底物比10000U/g,温度55℃,pH7.5,水解时间4h,水解度为72.7%,明显高于酶解大豆分离蛋白51.4%的水解度,且水解时间更短。β-伴大豆球蛋白水解肽主要为130～1000u的短肽,占肽总量的86.3%,均一性极高。β-伴大豆球蛋白水解肽对O2-.和.OH均有清除作用,清除.OH的能力明显高于大豆分离蛋白水解肽,即β-伴大豆球蛋白的水解肽对大豆肽清除.OH的作用贡献更大。     

碱性蛋白酶对β-伴大豆球蛋白抗原性的影响

选用碱性蛋白酶处理大豆分离蛋白,间接竞争ELISA法测定水解物中β-伴大豆球蛋白的抗原性,响应面法优化降低β-伴大豆球蛋白抗原抑制率的最佳工艺条件。结果表明,碱性蛋白酶可以显著降低β-伴大豆球蛋白的抗原性,在一定程度上,水解度与β-伴大豆球蛋白抗原抑制率呈负相关关系。碱性蛋白酶在酶解时间40 min、加酶量3 000 U/g、温度55℃、p H 8.5条件下,β-伴大豆球蛋白抗原抑制率为33.48%,比大豆蛋白降低了64.16%。SDSPAGE结果显示,β-伴大豆球蛋白基本被酶解成小分子量肽段。     

油莎豆粕抗氧化肽的制备及其稳定性研究

采用碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶对油莎豆粕蛋白质进行复合酶解制备油莎豆粕抗氧化肽,以DPPH自由基清除率为指标,确定制备油莎豆粕抗氧化肽的最佳条件。此外,评价了油莎豆粕抗氧化肽的体外抗氧化活性和稳定性。结果表明,制备油莎豆粕抗氧化肽的最适条件为碱性蛋白酶：木瓜蛋白酶=1∶1,酶的质量分数5%、底物质量浓度46 mg/mL、酶解温度61.7℃、酶解pH 6.7、酶解时间2.5 h,在此条件下,DPPH自由基清除率为88.45%。油莎豆粕抗氧化肽的体外抗氧化活性优良,当油莎豆粕抗氧化肽为5 mg/mL时,DPPH·清除率达88.69%、·OH清除率为42.57%、O■清除率为39.17%、ABTS自由基清除率达87.98%,还原能力为0.2627。油莎豆粕抗氧化肽具有热稳定性及冻融稳定性,在酸性和中性条件下稳定,但不耐受碱性条件,经胃肠消化后,活性下降比较明显。     

超声辅助酶解高温豆粕制备抗氧化产物

以高温豆粕为原料,采用超声辅助酶解法制备抗氧化产物。通过单因素和响应面试验优化,确定超声波辅助酶解处理高温豆粕的最佳工艺条件。超声波同步纤维素酶酶解,最佳条件为超声功率300?W、超声时间20?min、底物质量浓度8.36?g/100?mL、纤维素酶添加量666?U/g、酶解pH?4.1,得到的初步产物中可溶性多肽质量分数为（18.51±0.36）%,可溶性多糖质量分数为（10.83±0.32）%。然后将其水解物进一步用碱性蛋白酶水解,最佳条件为蛋白酶添加量61?900?U、酶解pH?9、酶解时间3?h、酶解温度56.4?℃,其产物可溶性多肽质量分数为（25.47±0.81）%,可溶性多糖质量分数为（13.22±0.49）%。按照最佳工艺条件对超声复合酶解处理后的高温豆粕产物进行乙醇沉淀、DEAE-Cellulose52离子交换层析以及SephadxeG-25凝胶色谱层析分离纯化,同时,对分离纯化后的各产物进行抗氧化活性检测,最终获得高温豆粕抗氧化产物,得率为2.18%,并且当产物质量浓度为1?mg/mL时,其铁离子还原力和超氧阴离子自由基清除能力分别为（0.495±0.042）mmol/g和（17.02±0.22）U/g。     

半固态酶解法制备豆粕肽工艺的优化

为优化豆粕酶解工艺，得到分子质量适中，易于消化吸收的豆粕肽。以豆粕为原料，比较胰蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、角蛋白酶在半固态酶解过程中，对豆粕的水解度、豆粕肽得率、豆粕肽的分子质量和苦味值的影响差异。采用酶解效果较好的胰蛋白酶进行单因素实验，选取影响因子较强的3个条件(液固比、豆粕量、温度)进行响应面试验，优化制备工艺。结果表明:用胰蛋白酶酶解，加酶量40 mg/g，酶解时间36 h，液固比1 mL/g，豆粕量30 g，温度50 ℃，在此条件下制得的豆粕肽的得率较高(18.87%)。     

大豆活性肽酶解制备的工艺条件研究

以大豆分离蛋白为原料,选用碱性蛋白酶和风味蛋白酶,分别从酶解pH 值、酶解温度、酶用量和底物质量分数因素研究其对单酶酶解大豆分离蛋白的影响。并通过Minitab 软件,利用响应曲面试验优化双酶酶解工艺条件。结果表明,其最佳酶解条件为酶解pH7.7、碱性蛋白酶用量为110mg/g 底物、风味蛋白酶用量为90mg/g底物、酶解温度56℃、底物质量分数8%、酶解时间7h,所得的大豆活性肽的分子量主要集中在1000D 以下。     

大豆球蛋白的水解研究

采用Nagano法从豆粕中分离大豆球蛋白,利用大豆蛋白改性酶解大豆球蛋白制备水解肽,以单因素试验和正交试验确定酶解最佳条件,通过高效液相法分析大豆球蛋白水解肽的分子量分布。结果显示:在20 g/L的底物浓度下的最佳条件为酶和底物比10 000 U/g,温度55℃,pH8.0,水解时间4 h。优组合条件下的水解度为69.6%。大豆球蛋白水解肽主要为130 u～1 000 u的短肽,占肽总量的86.5%,说明大豆球蛋白水解肽的均一性极高。     

枯草芽孢杆菌和中性蛋白酶协同发酵豆粕方法的研究

采用枯草芽孢杆菌和中性蛋白酶协同发酵处理豆粕,利用菌体生长时分泌的酶系及外加酶系共同作用处理豆粕,酶解产生有利于微生物生长的营养,同时也能弥补微生物产生酶的不足,能够进一步稳定发酵工艺和产品质量,将豆粕中的大分子蛋白降解成小分子肽,提高蛋白质水解度,以原料中的肽含量为考察指标,通过单因素试验与响应面分析试验,确定出最佳工艺参数:枯草芽孢杆菌接种量2.7%、中性蛋白酶添加酶量304 U·g~(-1)、料水比1︰1.7(g/mL)、处理温度45℃、处理时间47 h,得到肽含量为182.15 mg·g~(-1)的酶解豆粕。     

复合酶双向酶解豆粕蛋白制备呈味肽研究

该文以肽得率和感官评分为指标,研究了中性蛋白酶和复合蛋白酶复配双向酶解豆粕蛋白制备呈味肽的工艺条件,并在单因素实验的基础上采用响应面法对此工艺进行优化。结果表明:复合酶双向酶解豆粕蛋白制备呈味肽的最佳工艺为:酶解温度50℃、酶解pH 6.69、酶解时间4 h;在此条件下做验证试验,测得豆粕酶解液的肽得率为21.51%,感官评分为4.8。     

高收率低苦味值大豆低聚肽的制备

以大豆分离蛋白为原料,以酶解收率为指标对最优的酶解工艺进行研究。在单酶水解的基础上,用复合碱性蛋白酶,中性蛋白酶,胰蛋白酶进行水解,通过正交试验确定了复合酶的最佳水解条件为:碱性蛋白酶/中性蛋白酶/胰蛋白酶加酶1∶2∶3,温度50℃,酶解时间4.5h,在此最佳条件下,酶解收率为86.76%,大豆低聚肽含量为93.49%,苦味值比单酶水解明显降低。     

响应面法优化复合酶酶解制备可口革囊星虫胶原蛋白抗氧化肽工艺研究

以可口革囊星虫为原料提取胶原蛋白,以总抗氧化能力和超氧阴离子清除率为考察指标,通过单因素实验和响应面法优化复合酶酶解制备可口革囊星虫胶原蛋白抗氧化肽工艺条件。结果表明,选用酶筛选试验中多肽抗氧化活性较高的木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶和酸性蛋白酶进行单酶和复合酶试验,最佳方案确定为木瓜蛋白酶与中性蛋白酶复合酶解。在单因素实验基础上确定复合酶添加量（U/g）、酶解温度（℃）、酶解pH、酶解时间（h）为自变量,通过响应面法优化并参考实际因素,确定复合酶酶解的最优条件是:复合酶添加量8135 U/g、酶解温度51.6 ℃、酶解pH6.4、酶解时间4.2 h,在此条件下酶解制备的胶原肽总抗氧化能力为(1.333±0.021）μmol/mL,超氧阴离子清除率为78.75%±0.94%。     

多酶复合水解法生产高水解度大豆寡肽的工艺优化

为提高大豆蛋白的水解度,生产低分子量大豆寡肽,采用碱性蛋白酶、风味蛋白酶和中性蛋白酶对大豆分离蛋白进行水解,并采用中心组合试验和Box-Behnken试验对复合酶的组成和酶解工艺进行了优化。研究结果表明:复合酶的最佳组成为碱性蛋白酶38.4%、风味蛋白酶27.2%、中性蛋白酶34.4%。最佳水解条件为pH 8.79、温度50.46℃、底物浓度10%g/ml,在此条件下酶解6 h,大豆分离蛋白的水解度可达28.7%,寡肽收率高达83.56%,所得大豆寡肽产品中肽含量高达81.3%,数均分子量低至850,各理化指标均符合国标GB/T22492-2008对一级大豆寡肽产品的质量要求。     

响应面法优化豆粕肽制备工艺

以豆粕为原料,从酶的筛选入手,考察中性蛋白酶、复合风味蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶对豆粕肽得率的影响差异,通过单因素实验和响应面试验优化制备工艺。结果表明:以复合风味蛋白酶为酶解酶,酶解温度50℃,酶解pH 6.5,酶解时间7 h,加酶量1%,底物质量浓度4 g/100 mL,可以制备得率较高【(12.42±0.06)%】且口感更优的豆粕肽。本研究结果为豆粕资源开发及功能性肽产品的应用奠定了理论基础。     

复合酶法制备鸡肉蛋白抗氧化肽模型研究

以酶解产物对O2-·的清除率为指标,分析中性蛋白酶和未瓜蛋白酶的协同作用,确定制备鸡肉蛋白抗氧化肽的最佳复合酶解工艺,并对复合酶解过程进行酶促动力学特性研究.结果表明:复合酶解制备抗氧化肽最佳工艺为两酶混合同时加入,pH6.7,温度57℃,底物浓度6.9%,时间5h,酶用量为中性蛋白酶4943u/g、木瓜蛋白酶5988u/g,该条件下鸡肉蛋白抗氧化肽对O2-·的清除率为57.50%,显著高于各单酶水解效果.在此基础上由实验数据推导出描述复合酶制备鸡肉蛋白抗氧化肽水解过程的动力学方程,为鸡肉蛋白开发抗氧化肽提供理论依据.     

低值小杂鱼酶解产物清除DPPH自由基能力的研究

以中性蛋白酶为水解酶,以酶解产物对DPPH自由基清除率为指标,利用正交试验优化制备具有体外抗氧化活性的蛋白肽的酶解条件。结果表明,在中性蛋白酶的加酶量为15 mg/g、温度45℃、底物浓度5%、酶解3 h后,得到的酶解液对DPPH自由基清除率能达到85.46%。利用中性蛋白酶对低值鱼进行酶解可得到具有DPPH自由由基清除能力的活性肽。     

大豆肽功能饮料加工工艺研究

以大豆为主要原料研究含肽功能饮料的加工工艺。以大豆肽含量为指标,通过单因素试验和正交试验L9(33)研究了蛋白酶的种类、酶解时间和蛋白酶浓度等因素对大豆肽含量的影响。试验结果表明:影响大豆肽含量因素的主次顺序依次是酶的种类酶解时间酶的浓度,显著性分析表明,酶的种类差异显著(P0.05),说明酶的种类对大豆肽含量影响较大。蛋白酶酶解豆浆的最佳工艺条件为:碱性蛋白酶,加酶量为0.2%(质量分数),50℃,pH7.5,酶解时间5 h。在最佳工艺条件的基础上调配大豆肽功能饮料,最佳配方为:白砂糖35 g/L,葡萄糖16 g/L,碘盐0.6 g/L,氯化钾0.1 g/L,单甘酯0.8 g/L,CMC 0.8 g/L,香精适量。     

复合酶提取洋葱多糖的工艺研究

以洋葱为原料,采用复合酶(纤维素酶、木瓜蛋白酶和中性蛋白酶)酶解法提取洋葱多糖。考察复合酶用量、时间、温度、pH值、料液比等因素对洋葱多糖的纯度和收率的影响。通过单因素试验与正交试验优化复合酶提取洋葱多糖的工艺。结果表明:复合酶用量为0.3%,酶解温度为50℃,酶解时间为75 min,缓冲溶液pH值为6.0,料液比为1∶35(g/mL)时,多糖收率为18.75%,纯度达62.00%。     

Plackett-Burman和Box-Behnken试验优化苦荞蛋白酶解制备抗菌肽的工艺

用中性蛋白酶酶解苦荞蛋白制备抗菌肽,以抑菌率和肽质量浓度为响应值,在底物质量分数、加酶量、pH值、酶解温度和酶解时间5个单因素试验基础上,采用Plackett-Burman试验选出其中影响显著的因素,再以肽质量浓度为评价指标,用Box-Behnken试验优化抗菌肽制备工艺。最佳工艺为:底物质量分数3.22%、加酶量4 000 U/g、pH 6.86。在此条件下,苦荞蛋白酶解产生的肽质量浓度为32.41 mg/mL(预测值为32.12 mg/mL),对大肠杆菌抑菌率为(27.88±2.78)%,对金黄色葡萄球菌的抑菌率为(94.56±0.74)%。结果表明,优化中性蛋白酶酶解苦荞蛋白制备抗菌肽工艺合理。     

中性条件下大米蛋白的酶法增溶工艺研究

为改善大米蛋白(RP)溶解性,对中性条件下RP酶法增溶工艺进行研究。在对中性蛋白酶、碱性蛋白酶、酸性蛋白酶、菠萝蛋白酶和木瓜蛋白酶5种酶单因素实验基础上,研究RP的复合酶解。结果表明:单酶水解以中性蛋白酶效果最好,在底物质量分数20%、酶用量1%、酶解温度50℃、酶解时间4 h条件下,所得速溶大米蛋白(IRP)溶解度为79. 01%,水解度为6. 79%。复合酶解以中性蛋白酶和木瓜蛋白酶复配效果最好。综合考虑溶解度、水解度和功能性质等要求,RP适宜的酶解条件为:底物质量分数20%,中性蛋白酶和木瓜蛋白酶复合酶解,酶用量各0. 5%,酶解温度50℃,酶解时间4 h。复合酶解所得IRP具有较好的溶解度(63. 58%)、乳化活性(27. 60 m~2/g)和乳化稳定性(29. 61 min),在pH 5～8范围内具有良好的溶解性(溶解度54. 39%～68. 34%)。此外,IRP中游离氨基酸和肽含量显著增加,其营养价值明显改善,更易于消化吸收。研究表明,复合酶解是RP增溶改性的有效途径,所得IRP的溶解性、乳化性均有明显改善。     

酶法制备豆粕抗氧化蛋白肽的研究

研究复合酶制备豆粕抗氧化蛋白肽的条件,采用响应曲面实验设计,优化酶解工艺,并采用高效液相色谱法对多肽酶解液进行分离纯化及抗氧化性能的测定。结果表明:胰蛋白酶与碱性蛋白酶的比例为2∶1,制备豆粕抗氧化蛋白肽的最佳酶解条件为:温度60℃,时间1.5h,底物浓度8%,酶用量0.4AU/g,得到蛋白肽含量14.08mg/g。高效液相色谱法分离出3个组分,且组分1的抗氧化效果好于其他组分。