超高效液相色谱-质谱法测定母乳中12 种低聚糖

建立母乳中12种低聚糖超高液相色谱-串联三重四极杆质谱的定性及定量测定方法。母乳样品脱脂除蛋白后经液相分离,通过质谱检测,最优梯度洗脱条件为：流动相A为10mmol/L的甲酸铵溶液,流动相B为乙腈;流速0.3mL/min;柱温50℃;0～10min,95%～75%B;10～15min,75%B;15～20min,75%～65%B;20～21min,65%～10%B;21～24min,10%B;24～25min,10%～95%B;25～35min,95%B。12种低聚糖标准品标准曲线在设定质量浓度范围内线性良好（R2＞0.98）,加标回收率在80.00%～120.00%之间,重复性和仪器精密度（均用相对标准偏差表示）均小于10%。     

不同阶段母乳中10种游离低聚糖的检测及含量分析

目的检测不同阶段母乳中10种游离母乳低聚糖(human milk oligosaccharides,HMOS)的含量,并比较其在不同阶段母乳中的变化。方法分别采集产后0~7 d(初乳)、产后8~15 d(过渡乳)、产后16~180 d(成熟乳)的母乳,采用荧光标记HMOS,通过超高效液相色谱-荧光检测法和标准曲线定量10种HMOS。采用Person相关比较不同泌乳时间与HMOS含量的相关性,3个泌乳阶段的组间差异采用单因素方差分析。结果在选定的色谱条件下,10种HMOS可完全分离并定量。10种HMOS中,2'岩藻糖乳糖(2'FL)、3'唾液酸乳糖(3'SL)、6'唾液酸乳糖(6'SL)、乳糖-N-四糖(LNT)、乳糖-N-新四糖(LNn T)、乳糖-N-五糖I(LNFP-I)与泌乳时间存在负相关关系,3'岩藻糖乳糖(3'FL)与泌乳时间存在正相关关系,上述7种HMOS在不同阶段母乳中差异有统计学意义(P0.05),而α-四糖(P_I)、乳糖-N-五糖V(LNFP-V)、乳糖-N-新五糖(LNnFP-V)与泌乳时间无明显相关关系,在不同阶段母乳中含量差异无统计学意义(P0.05)。结论不同阶段母乳中HMOS的含量不同。10种HMOS中,7种HMOS与泌乳时间具有相关关系并且在不同泌乳阶段差异有统计学意义(P0.05)。     

羊乳低聚糖超高效液相色谱-质谱鉴定中样品前处理方法及液相色谱条件优化

通过Sep-Pak C18与石墨化碳柱法、超滤法、透析法和葡萄糖凝胶层析法4 种不同的前处理方法,以离子交换色谱法检测乳糖的去除率和低聚糖的损失率为评价指标,最终确定葡聚糖凝胶层析法为最优前处理方法。然后,采用超高效液相色谱-串联Q-Exactive Focus质谱对羊乳中的低聚糖进行分析及结构鉴定,以低聚糖的总离子流图为评价指标,对液相洗脱条件进行优化,最终优化条件为：0～20 min,95%～78% A（乙腈）;20～35 min,78%～73% A;35～38 min,73～62% A;38～45 min,62%～50% A。结果显示,采用凝胶层析法前处理样品测得低聚糖种类显著高于未去除乳糖的样品,在最优液相色谱分离条件下,羊乳低聚糖中同分异构体得到较好分离,对羊乳中低聚糖的结构解析具有重要参考价值。     

液相色谱-质谱法快速检测4 种乳源低聚糖

建立一种乳样经简单预处理后采用超高效液相色谱-串联质谱同时检测4 种重要的乳源低聚糖方法。牛乳及人乳经过脱脂、脱蛋白后经amide液相色谱柱用0.1%氨水-乙腈溶液梯度分离,采用质谱检测。2 种唾液酸乳糖标准品的标准曲线在0.78～50.00 mg/L范围内线性良好（R2＞0.990）,2 种岩藻糖乳糖标准品的标准曲线在1.56～100.00 mg/L范围内线性良好（R2＞0.990）。加标回收率在80.00%～100.00%之间,重复性、精密度实验所得相对标准偏差均小于5.00%。     

高效液相色谱-串联质谱法测定母乳中的 N-乙酰神经氨酸

目的建立高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)法测定母乳中N-乙酰神经氨酸的分析方法。方法用盐酸对样品进行酸水解释放出母乳中的结合态N-乙酰神经氨酸,高速离心后,采用C_(18)柱进行分离。以0.1%甲酸-乙腈溶液和0.1%甲酸-水溶液作为流动相进行梯度洗脱,电喷雾质谱检测,正离子多反应监测模式(MRM)进行定性和定量分析。结果在优化的条件下,N-乙酰神经氨酸在0.01~0.5 mg/L范围线性关系良好(r=0.9997)。以10、50、100 mg/kg 3个添加水平进行加标回收试验,N-乙酰神经氨酸的平均回收率为95.0%~98.7%,相对标准偏差为11.6%~14.5%,N-乙酰神经氨酸的检出限为0.21μg/kg。结论该方法简单、快速、重复性好、灵敏度高,可广泛用于母乳中N-乙酰神经氨酸的测定。     

超高效液相色谱串联质谱法检测奶粉中苯甲酸的含量

目的 建立一种超高效液相色谱-串联质谱(ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry, UPLC-MS/MS)检测奶粉中苯甲酸(benzoic acid)含量的分析方法。方法 样品经水提取后, 选用Waters Acquity UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×50 mm, 1.7 μm), 以甲醇和0.1%氨水作为流动相进行梯度洗脱, 电喷雾离子化(electrospray ionizatio, ESI-)及多反应监测模式(multi-reaction monitoring, MRM)进行测定, 外标法定量。结果 苯甲酸在0.04~2.00 μg/mL浓度范围内, 线性关系良好(r2=0.9996), 样品加标回收率为94.92%~109.31%, 定量限为0.06 μg/g, 结果的相对标准偏差为1.69%~6.90%。结论 该方法前处理简单, 稳定性和可靠性好, 具有良好的定性和定量分析能力, 适用于奶粉中苯甲酸含量的检测。     

母乳低聚糖的检测方法研究进展

母乳低聚糖(HMOS)在母乳中的含量仅次于乳糖和脂肪,其生理功能受到越来越多的重视。在对母乳低聚糖的研究中,关键问题之一是灵敏和可定量的检测方法。由于母乳低聚糖属于复杂的混合物,结构多样,且没有内在的发色团,使得对其进行结构分辨和定量检测都存在不小的难度。本文拟对母乳低聚糖检测方法的研究进展进行综述。     

基于超高效液相色谱-串联质谱技术快速测定果梅中化学成分

采用超高效液相色谱-串联质谱技术对果梅的化学成分进行快速测定。采用ZORBAX SB-C18(3.0 mm×100 mm, 3.5μm)色谱柱,流动相为水(含体积分数0.2%甲酸)(A)和乙腈(含体积分数0.2%甲酸)(B),采用梯度洗脱方式,柱温30℃,流速为0.2 m/min,进样量为1μL。从果梅中成功测定了16种化学成分,主要包括10种有机酸、4种黄酮类、5-羟甲基糠醛和苦杏仁苷。该文成功快速测定了果梅中主要的化学成分,为进一步研究果梅的药效基础和作用机制提供理论基础。     

超高效液相色谱-串联质谱法检测蜂蜜中九种氨基糖苷类药物残留

建立超高效液相色谱-串联质谱法(ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)同时测定蜂蜜中9种氨基糖苷类药物(新霉素、阿米卡星、双氢链霉素、链霉素、潮霉素B、卡那霉素、庆大霉素、妥布霉素、大观霉素)残留量的方法。蜂蜜样品中的氨基糖苷类药物采用三氯乙酸的缓冲盐溶液提取,经HLB固相萃取柱富集净化,选择水性洗脱液洗脱,在最终提取液中添加离子对试剂优化色谱行为,选取乙腈-水体系作为流动相进行梯度洗脱,采用反相色谱柱进行分离,以串联质谱法正离子模式扫描,外标法定量。实验结果表明,该方法在20～1 000 ng/mL线性关系良好,新霉素、双氢链霉素、链霉素、卡那霉素、妥布霉素的定量限为5μg/kg,阿米卡星、潮霉素B、庆大霉素、大观霉素的定量限为10μg/kg,在线性范围内,分别在空白蜂蜜样品中进行3个浓度的添加实验,样品的回收率在72.6%～109.4%,相对标准偏差为2.13%～8.23%。该方法操作简单,灵敏度高,净化效果好,在流动相中避免使用离子对试剂,有效减少了对质谱仪的污染,能...     

UPLC-MS/MS测定葡萄酒中类黄酮化合物方法的建立

采用超高效液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS/MS）对葡萄酒中的类黄酮化合物进行测定。样品过0.22μm聚四氟乙烯（PTFE）滤膜后上样分析,用HSST3色谱柱进行分离,以含0.1%甲酸-乙腈溶液和0.1%甲酸-水溶液为流动相进行梯度洗脱。质谱采用电喷雾离子源（ESI）,以多反应监测（MRM）模式进行检测。在优化后的方法中,待测化合物在相应质量浓度范围内的线性关系良好,相关系数R均大于0.99;检出限（LOD）和定量限（LOQ）分别为0.1～5μg·L-1和0.3～12μg·L-1;加标回收率为69.2%～99.8%,相对标准偏差（RSD）均小于5.0%。用新建立的方法对葡萄酒样品进行分析,结果表明,葡萄酒中检出花旗松素、槲皮素、杨梅素、杨梅苷等13种组分;所检酒样中均未检出芦丁、刺槐苷、表没食子儿茶素没食子酸酯和水仙苷。该方法快速、准确,适用于葡萄酒中类黄酮物质检测的定性和定量分析。     

基于2种衍生化方法对牛乳中寡糖的高效液相色谱-质谱联用分析

利用Sep-Pak C_(18)柱和石墨化碳柱对已脱脂和除去蛋白质的牛乳进行分离纯化,并采用1-苯基-3-甲基-5-唑啉酮(3-methyl-1-phenyl-2-pyrazolin-5-one,PMP)和2-氨基吖啶酮(2-aminoacridone,AMAC),2种衍生化试剂对其进行衍生化处理,通过高效液相色谱进行优化,AMAC衍生化的结果(约有67个峰)明显优于PMP衍生化的结果(约20个峰),最终确定AMAC为最佳衍生化试剂,并利用最终优化好的高效液相色谱条件,采用高效液相色谱-串联离子阱飞行时间质谱对牛乳中寡糖进行测定,最终测得7种乳寡糖并获得该7种乳寡糖的单糖组成。     

基于酪蛋白免疫快速检测的羊奶鉴伪方法建立

为了能够快速、灵敏、低成本和方便地对市场上的羊奶进行鉴伪,本文基于竞争法原理开发了牛源酪蛋白胶体金免疫层析试纸条并对其进行了评价.通过在纯羊奶中添加不同比例的牛奶,获得含有不同浓度牛源蛋白的羊奶溶液并进行免疫层析试纸条测定,评价了该方法的检测范围和灵敏度,分析了奶制品经蒸煮和酶解处理对试纸条检测结果的影响,评价了该方法...     

母乳低聚糖的研究进展

母乳中母乳低聚糖(HMOs)含量丰富且独特,在已知的200种成分中,有157种结构被阐明.HMOs不仅具有双歧因子效果,还具有抗黏附、抗菌、调节肠道上皮细胞和免疫细胞,减少过度的黏膜白细胞浸润和活化,降低新生儿坏死性小肠结肠炎等功效,并为婴幼儿大脑发育和认知提供唾液酸作为潜在的必要营养素.由于HMOs大规模生产受限...     

乳中志贺氏菌的荧光定量PCR检测方法的建立

为了快速、有效的检测乳中的志贺氏菌,建立一种特异性强、灵敏度高的荧光定量PCR方法。根据GenBank公布的志贺氏菌ipaH基因的保守序列设计特异性引物,对提取的志贺氏菌DNA模板进行PCR扩增,对目的基因进行克隆和测序,然后利用荧光定量PCR方法,对志贺氏菌进行检测,确定其扩增条件。建立的方法特异性强,检测的灵敏度可达到10-6 ng/μL。利用建立的方法可检测乳中2.84 cfu/mL的志贺氏菌。该方法为快速、准确检测乳中的志贺氏菌提供了参考。     

母乳低聚糖(HMOs)的科学共识

母乳低聚糖(human milk oligosaccharides, HMOs)是母乳中含量第三的固体成分,在支持婴幼儿特征肠道菌群建立和免疫等方面发挥重要作用,其发现、制造与应用对于促进人群健康,尤其在改善婴幼儿健康和营养需求方面具有里程碑式的意义。目前,HMOs已在100余个国家和地区批准和/或上市使用。其生产方式主要以微生物发酵法为主,产品结构与母乳中的HMOs完全一致。相关临床人群实验和动物毒理实验以及多年使用历史均证明其用于婴幼儿配方食品等是安全的。为了促进我国婴幼儿配方食品、特殊医学用途配方食品等领域的高质量发展和产业升级,服务更多消费者营养健康需求,中国食品科学技术学会组织食品科学、临床医学、生物发酵、食品营养等领域专家与产业界代表,通过现场咨询、文献检索和专题研讨等形式,广泛讨论形成对母乳低聚糖的科学共识,以推动HMOs在中国食品行业的合法使用。     

基于脲酶催化和酸碱指示剂变色原理的高脲乳快速检测方法的建立

针对市场上存在的高脲乳(掺假和病理性)问题,建立区别于正常生理浓度范围的快速检测方法。检测方法依据尿素被酶解导致的pH值升高幅度与其浓度呈正相关这一机理,对牛乳起始pH值进行优化调整为6.8时,选择溴百里酚蓝作为指示剂,可以使乳脲含量达40mg/100mL生理上限卡切值以上时变色,从而区别检出高脲问题乳。研究表明,依此组装的高脲乳检测试剂盒,可用于生产实践。     

氟虫腈亚砜荧光衍生化、HPLC-FLD检测方法的建立及应用

建立了氟虫腈代谢物-氟虫腈亚砜的柱前荧光衍生化方法,并将其应用于鸡蛋中的残留检测。优化后的柱前荧光衍生化反应主要条件如下:催化缩合剂为EDC/DMAP;反应溶剂为二氯甲烷;氟虫腈亚砜与荧光衍生试剂的用量比为1:8;45 ℃水浴中反应75 min。衍生产物为N-（3-氰基-1-（2, 6-二氯-4-（三氟甲基）苯基)-4-（（三氟甲基）硫代）-1H-吡唑-5-基）-4-（2-（9-乙基-9H-咔唑-3-基）-1H-菲并[9, 10-d]咪唑-1-基）丁酰胺（DX1）,具有很高的荧光强度。衍生化产物DX1的高效液相色谱-荧光检测（HPLC-FLD）的主要条件如下:C₁₈色谱柱;等度洗脱;流动相:乙腈/水（80/20,v/v）;流速:1.0 mL/min;λex=310 nm,λem=404 nm;进样量20 μL;柱温40 ℃。在上述检测条件下,氟虫腈亚砜HPLC-FLD检测方法的检测限为0.033 μg/L,定量限为0.092 μg/L。在此基础上,建立了鸡蛋残留氟虫腈亚砜提取和检测的HPLC-FLD方法,检测限和定量限分别达到了0.052和0.132 μg/kg,精密度、稳定性和重现性在保留时间和峰面积上的RSD分别小于0.04%和2.7%,上机检测可在20 min内完成。该方法具有较好的灵敏度、精确性和可靠性,可应用于鸡蛋中残留氟虫腈亚砜的检测。     

A Method for the Detection of Cryptosporidium parvum Oocysts in Milk Based on Microfiltration and Real-Time Polymerase Chain Reaction

A method for the detection of Cryptosporidium parvum oocysts in milk was developed on the basis of optimizing microfiltration and elution of the material from the filter, and using a previously developed highly sensitive downstream detection by real-time polymerase chain reaction. The method involves heating of milk to 40°C, microfiltration through a membrane microfilter made of a mixture of cellulose acetate and cellulose nitrate (pore size, 3.0 μm), elution of the material from the filter by a solution containing sodium pyrophosphate and Tween 80 in a shaker, rapid DNA extraction using a Chelex-based agent, and single-tube nested real-time PCR. The detection limit of the method is 10 C. parvum oocysts per 100 ml of milk. The developed method may be useful for specific and sensitive control of contamination of milk by C. parvum oocysts.     

牛乳制品中青霉素酶Alphalisa的检测方法

建立牛乳制品中青霉素酶Alphalisa的检测方法。将青霉素酶进行生物素化,与样品中的青霉素酶竞争结合鼠源性青霉素酶单克隆抗体,利用Alphalisa反向竞争的反应模式,对牛乳中的青霉素酶实施检测。建立的Alphalisa检测方法能特异性识别样品中存在的青霉素酶,方法的线性范围在2.5～500 IU/mL;检出限和定量限分别为1.6 IU/mL和5 IU/mL;批间批内变异度均小于10%。结果表明,该方法能够替代传统酶联免疫吸附实验方法,成为青霉素酶的实验室筛查或检测方法。