烟草突变体筛选与鉴定方法篇:4.烟草抗干旱突变体筛选与鉴定

烟草经甲基磺酸乙酯(EMS)诱变处理可以分离得到多种突变体,这些突变体的获得将为揭示烟草生长发育规律奠定基础。烟草突变体的筛选已成为许多重要理论问题得以解决的前体,而筛选方法是突变体筛选成败的关键。干旱是影响植物生长发育的主要环境因子之一[1]。烟草在生长过程中,特别是从团棵期进入旺长期常常遭遇干旱,干旱已经成为影响其营养生长的重要因素。利用突变体材料筛选烟草抗旱突变体,不仅可为     

烟草突变体筛选与鉴定方法篇:1.烟草突变体的筛选与鉴定

烟草基因组计划重大专项2011年研究项目"烟草突变体库创制、筛选与分析"实施1年后,通过化学和生物方法创制并收获了15万份烟草突变二代种子;建立了2个序列筛选方法和10个表型筛选方法并进行了初步筛选。2012年始,该项目将全面开展烟草各种突变体的大量筛选及鉴定工作。     

烟草突变体筛选与鉴定方法篇:5.烟草耐低钾突变体的筛选与鉴定

烟草是喜钾作物。除了作为重要的营养元素发挥作用外,钾与烟草的抗逆性、抗病虫害能力密切相关;钾含量也是烟叶品质评价的重要指标之一。基于钾素的重要性和我国土壤普遍低钾的国情及国内烟叶钾含量低的现状,开展烟草钾营养基础研究、选育耐低钾/钾吸收高效型烟草品种等工作极为迫切[1]。     

烟草赤星病抗性鉴定的新方法：毒素抗鉴定法

真菌毒素的应用使烟草对赤星病抗性的鉴定更加快速、方便和可靠。本文根据国内外文献，综述毒素抗性鉴定的几咱方法及毒素制备过程，并对这类新的抗性鉴定方法的优缺点进行了分析，同时预测其应用前景。     

烟草突变体筛选与鉴定方法篇:3.烟草突变体的TILLING筛选与功能鉴定

TILLING(targeting induced local lesions in genomes,定向诱导基因组局部突变)是利用单核苷酸多态性筛选突变体的一种全新反向遗传学方法,该方法首先通过化学诱变产生高频率点突变,再利用点突变筛选技术如毛细管电泳(capillary electrophoresis,CE)、聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis,     

抗二氯喹啉酸烟草材料的筛选与鉴定

为获得抗二氯喹啉酸的烟草育种材料,本研究通过叶面喷施不同浓度二氯喹啉酸,研究受药害烟株叶面积变化规律和烟草药害等级情况,确定喷施二氯喹啉酸对烟草苗期药害的临界浓度及适宜观测时间,并对烟草EMS突变体材料进行规模化筛选鉴定。结果表明,喷施处理引起烟草药害的临界浓度为0.5 mg/L,超出临界值浓度,烟草叶片会出现明显药害症状;为获得较高抗性的突变体材料,以1 mg/L为最适施药浓度,在药害症状明显时（施药后14 d）进行观测,获得了多个对二氯喹啉酸高抗、中抗及敏感的突变体材料。对高抗材料QR-19的杂交一代株系抗性分析显示,该材料对二氯喹啉酸的抗性可能受隐性基因控制。本研究为解析烟草对二氯喹啉酸等激素型除草剂的抗药性机理及除草剂抗性育种奠定了材料基础。     

烟草种质资源抗青枯病筛选鉴定

参试260份烟草品种对青枯病抗性先做自然病圃初筛鉴定,从中选取表现R-LR和部份优质感病品种共n3份分菌系接种测定.结果表明,对青枯病Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型菌系反应R-LR的抗病品种有G3、反帝3号和G6等3份,这是迄今所发现抗病谱广且能抗强菌系的种质资源;抗Ⅰ、Ⅱ型菌反应R-MR,感Ⅲ型菌的品种有SPG117、OX2028和岩烟97等12份;抗Ⅰ型菌反应R-MR,感Ⅱ、Ⅲ型菌的品种有K326、K346、G80、RGll和Coker176等50份;对Ⅰ型菌反应为MS-HS的感病品种有中烟15、云烟87、春雷3号、大叶密目、大黄金和革新3号等195份,包括目前生产上的主栽品种NC89、云烟85、翠碧一号和红花大金元等.     

烟草种质抗青枯病鉴定及其抗性分类

分别于2008年、2009年在安徽省皖南烟区烟草青枯病病圃,选择国内外文献中标注为抗青枯病的部分烟草种质及安徽省尚未鉴定抗性的地方种质共138份,田间采用高密度栽培方式、随机区组设计,鉴定其青枯病抗性。结果表明:(1)以感病对照长脖黄病情指数达到100时的抗性进行划分评价,部分烟草种质的抗性与文献标注的抗性表现有差异;本试验中没有免疫烟草种质;Coker298、K346、NC86、Coker86、K399、LMAFC34、歙圆四号为高抗品种;G28等13份种质为中抗品种;其它种质在中感以上。(2)依据大田病情指数变化对烟草种质抗性分为四类:感病型、慢病型、抗病型及免疫型,并对其进行数据规范;分类结果表明免疫型种质0份,抗病型种质3份为Coker298、NC86、歙圆四号,慢病型种质有DB101等16份;其它为感病种质。     

烟草抗青枯病突变体153-K的抗性遗传及与农艺性状的关系

烟草青枯病是一种细菌性病害,严重影响烟叶生产,筛选抗青枯病的烟草种质并解析其抗性遗传效应对指导抗病育种具有重要意义。本研究选用感病品种翠碧一号（CB-1）和抗青枯病突变体153-K为亲本,构建了F2群体,利用"主基因+多基因"混合遗传模型分析方法,研究其在安徽、福建两个病圃环境下的遗传效应,并对153-K青枯病抗性与农艺性状进行相关分析。结果表明,153-K在安徽病圃中的最优遗传模型为MX2-EEAD-AD,即2对等显性主基因+加性-显性多基因模型;153-K在福建病圃中最优遗传模型为MX2-ADI-AD,即2对加性-显性-上位性主基因+加性-显性多基因模型。相关分析结果表明,在安徽、福建两个病圃环境下,青枯病抗性与株高呈显著负相关;而与叶片数、节距、茎围相关性均不显著。     

利用赤星病菌毒素快速高通量鉴定烟草抗性种质的方法研究

为寻求一种快速高通量筛选鉴定烟草抗赤星病种质或材料的方法,本研究以烟草（Nicotiana tobacum L.）种质净叶黄、Beinhart1000-1、NC89 和G140 作为供试材料,利用烟草赤星病菌毒素就烟草种质对赤星病的抗病性鉴定方法进行研究,试验设计3 种鉴定方法：毒素液浸根法、毒素液浸种法和毒素培养基法.为验证毒素培养基法鉴定结果的可靠性,对烟草种质材料净叶黄、Beinhart1000-1、NC89、G140、K326、G28 和中烟100 的室内鉴定结果,与其对烟草赤星病的田间抗性鉴定结果进行了相关性分析.结果表明,室内鉴定结果与田间鉴定结果之间极显著相关（r=-0.9588）,室内鉴定结果可准确反映烟草种质对赤星病的抗病性.     

烟草赤星病抗性鉴定的新方法──毒素抗性鉴定法

真菌毒素的应用使烟草对赤星病抗性的鉴定更加快速、方便和可靠。木文根据国内外文献，综述毒素抗性鉴定的几种方法及毒素制备过程，并对这类新的抗性鉴定方法的优缺点进行了分析，同时预测其应用前景。     

烟草基因组学研究方法篇:2.基因表达研究方法

研究物种的基因表达是基因组学从结构基因组时代跨入到功能基因组时代的重要转折点。在生物个体发育过程中,基因具有特定的时空表达模式,研究基因在不同组织、不同发育阶段和不同环境条件下的表达状况是分析鉴定基因功能的重要前提。目前,以基因组为对象,研究特定状况下的基因表达主要基于差     

烟草抗赤星病（Alternaria alternata）诱导因子的筛选

不同诱导因子的研究结果表明，真菌、细菌和病毒都可诱导烟草对赤星病产生抗性。抗性效应表现为发病率降低、严重度变小和病斑面积减少。真菌诱导因子中，只有弱毒株诱导产生抗性，抗性效应为７．４％～８０．１％；细菌诱导产生的抗性效应为１．３％～８５．８％；病毒及其组合的抗性诱导效应为３．９％～８３．２％。实验发现，真菌和细菌的某些菌株和某些病毒及其组合也可诱导烟草对赤星病的感病性，使病情加重。     

抗烟草赤星病的植物源粗提物筛选

为筛选对烟草赤星病有较高抗性的植物源提取物,进行了从10个科植物中以不同提取方法提取的12种粗提物对烟草赤星病室内孢子萌发和田间小区防治试验。结果表明:胡椒科的山鸡椒(Litseacubeba)果实的水蒸气粗提物、菊科的牛蒡(Arctiumlappa)种子的石油醚提取物和桃金娘科的丁子香(Syzygiumaromaticum)花的水蒸气粗提取物可明显抑制烟草赤星病菌孢子萌发,具有相对较好的田间防治效果。     

烟草突变体筛选与鉴定方法篇:6.烟草T-DNA激活标签突变体侧翼序列筛选与鉴定

通过激活标签技术(activation tagging)得到突变群体是构建突变体库的一种重要方法,应用此种方法研究基因功能,不管是用正向或反向遗传学方法,都必须先获得插入位点的侧翼序列(flanking sequence)。随着拟南芥、水稻及烟草等作物的侧翼序列数据库的不断完善及烟草全基因组测序的完成,越来越体现出激活标签技术对于推动烟草功能基因组学研究具有巨大的潜力。     

烟草赤星病拮抗菌Q96的筛选鉴定及其防病效果研究

为分离筛选对烟草赤星病有良好防效的拮抗菌,以烟草赤星病链格孢菌为靶菌,从蚯蚓粪中经初筛和复筛获得拮抗菌,通过形态、生理生化特征和16S rDNA分析鉴定拮抗菌种类,并对烟草赤星病的防治效果进行了研究。结果表明,筛选出一株拮抗菌Q96,初筛和复筛的抑菌率均超过60%,经鉴定为副地衣芽孢杆菌（Bacillus paralicheniformis）,其活菌液（稀释10倍）对孢子萌发和菌丝生长的抑制率分别为73.33%和79.68%,粗发酵液离体防效可达60.04%。Q96菌株可作为抗烟草赤星病生防菌剂的菌种资源。     

烟草内生青枯病拮抗细菌的筛选和初步鉴定

为了获得防治烟草青枯病新途径,从湖南桂阳烟草青枯病重病区采集的健株上,共分离到内生菌株160个。经对峙培养法测定,32个菌株对烟草青枯菌有拮抗作用,其中H-1、H-9和H-11有强拮抗作用,抑菌圈分别为3.0、3.0、4.5 mm。根据其形态特征和生理生化性状,初步鉴定内生菌H-1为枯草芽孢杆菌,H-9和H-11为短芽孢杆菌。     

烟草品种青枯病抗性的组培苗接种鉴定方法研究

由茄科雷尔氏菌（Ralstonia solanacearum）引起的青枯病是制约我国烟草产业发展的瓶颈之一。选育抗病品种是防控该病最经济有效的策略。为探寻快速评价烟草品种青枯病抗性的方法,以6个抗感水平差异显著的烟草品种试管苗为研究对象,采用浸根接种法,评价了室内快速鉴定方法的可行性。结果显示,以浓度为3×10⁶ cfu/mL的青枯菌体悬液接种21 d后,红花大金元、翠碧1号、云烟85、K326、G80和岩烟97的病情指数分别为100.0、90.5、88.8、86.6、56.0和53.8,各品种试管苗的病情指数与田间自然发病情况呈明显正相关性,相关系数为0.936,达极显著水平。由此可见,室内无菌苗接种法能正确反映出不同烟草品种对青枯病的抗性水平,可作为快速、可靠评价烟草品种抗性水平的初筛手段。     

烟草赤星病拮抗芽胞杆菌的筛选、鉴定及促生防病作用

为获得对烟草赤星病菌具有较好生防效果的芽胞杆菌,从福建、山东、云南等地烟草叶片中分离得到187株菌株,对烟草种子进行浸种处理,通过测定发芽率筛选到能够促进种子萌发的6株菌株;利用平板拮抗法、离体叶片接种法、温室生测发现FJ1、FJ1-6能促进烟草生长且对赤星病防效较好;通过生理生化和分子生物学鉴定,FJ1为萎缩芽胞杆菌（Bacillus atrophaeus）,FJ1-6为贝莱斯芽胞杆菌（Bacillus velezensis）。防病特性研究发现,两菌株含有参与脂肽类抗生素Surfactin、Fengycin和Iturin合成的基因且脂肽类粗提物对赤星病菌丝生长有明显的抑制作用,抑制率分别为56.9%、65.0%。综上,FJ1、FJ1-6具有优良的促生防病特性及显著的促种子萌发效应,可应用于烟草育苗及赤星病的防治。     

高密度栽培对烟草青枯病抗性鉴定及株型性状的影响

采用密度及品种双因素裂区设计,分析不同栽培密度对烟草青枯病抗性鉴定及株型的影响。结果表明:不同栽培密度及品种间烟草青枯病发病率及病情指数差异显著,密度与品种互作不显著;不同年份、不同时期的病情、病率与栽培密度呈线性负相关关系,其方程决定系数R2大于0.8;株型性状中,株高、叶数与栽培密度呈线性正相关关系,决定系数R2小于0.5,腰叶长、腰叶宽、茎围与栽培密度呈线性负相关关系,决定系数R2大于0.7;不同调查期间的发病指数呈对数关系,决定系数R2大于0.7。综上认为高密度栽培能用于烟草抗性鉴定及育种。