双酶水解螺旋藻藻胆蛋白制备ACE抑制肽的工艺优化

以螺旋藻为原料,采用反复冻融和超声波解冻结合法提取藻胆蛋白,利用等电点分离藻胆蛋白,采用SDS-PAGE电泳确定分离蛋白的种类。采用胃蛋白酶和胰蛋白酶双酶先后水解藻胆蛋白。通过单因素实验和正交实验优化胃蛋白酶和胰蛋白酶水解藻胆蛋白制备血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽的工艺,研究表明:胃蛋白酶水解藻胆蛋白最佳酶解工艺条件是水解温度为37℃,底物质量浓度为6%(w/v),酶与底物比为5220 U/g,此时ACE抑制率为82.07%。胰蛋白酶水解藻胆蛋白最佳酶解条件是温度为42℃,底物质量浓度为6%(w/v),酶与底物比为5220 U/g,此时ACE抑制率为80.35%。利用超滤离心管获得分子量小于3 kDa的藻胆蛋白ACE抑制率94.30%。     

分步酶解制备乳清蛋白源ACE抑制肽的工艺研究

以云南乳饼加工副产物—乳清水中获得的乳清蛋白粉为原料,采用分步酶解技术获得ACE抑制肽。通过酶的选择、单因素和响应面优化实验,选取了碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶为适宜用酶,确定了最佳酶解工艺条件为酶解温度50℃,酶解时间3 h:2 h,料液比1:35(g/mL),此时酶解产物的ACE率达到88%。本研究可为后续相关功能性食品开发提供借鉴。     

谷朊蛋白制备ACE抑制肽的酶解工艺优化

采用碱性蛋白酶水解小麦谷朊蛋白制备ACE抑制肽,选取酶解时间、温度、pH和加酶量4个因素进行中心组合实验设计,利用响应面法对ACE抑制肽的提取工艺进行优化研究.通过SAS软件对ACE抑制率的二次多项数学模型解逆矩阵分析表明:在酶解时间为3 h、pH 8.5、温度60℃、加酶量15mg/g时,酶解产物的ACE抑制效果最好,最大抑制率平均为93.82%,与实测值相符.利用优化工艺条件酶解小麦谷朊蛋白制备ACE抑制肽时,其抑制率比优化前提高40.7%.     

鲢鱼蛋白制备ACE抑制肽的工艺优化

研究制备鲢鱼蛋白ACE抑制肽工艺条件,利用高效液相色谱法测定不同蛋白酶水解鲢鱼蛋白的ACE抑制率,筛选出风味蛋白酶为最佳酶源。在单因素试验的基础上,采用Box-Beknken中心组合设计建立响应面数学模型。得出鲢鱼蛋白制备ACE抑制肽的最佳工艺条件为初始pH 7.54,酶解温度50.56℃,时间4.5h,加水量46.67mL/10g.鱼肉。经优化后,鲢鱼蛋白ACE抑制肽的抑制率实际值可达81.35%。     

响应面优化酶促水解鲅鱼蛋白制备ACE抑制肽的研究

以低值小鲅鱼为原料,分别采用胰蛋白酶、碱性蛋白酶、风味蛋白酶等进行水解,以期获得血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽。结果表明,碱性蛋白酶水解产物的ACE抑制率最大。通过中心组合响应面设计,对碱性蛋白酶水解工艺条件进行了优化,分析pH值、水解时间、水解温度、酶添加量等因素对水解液ACE抑制率的影响,得到碱性蛋白酶水解制备鲅鱼ACE抑制肽的最优工艺参数为:碱性蛋白酶添加量9 981 U/g,水解温度55℃,水解时间4.27 h,水解pH值9.0,此时ACE抑制率可达到46.021%。在该条件下进行验证试验,测得水解液的ACE抑制率为45.5%,与预测值较为相近。     

酶解青蛤制备ACE抑制肽的工艺优化

研究酶解青蛤制备血管紧张素转化酶(Angiotensin-converting enzyme,ACE)抑制肽。以ACE抑制率为指标,先筛选最适酶种;探究温度、时间、p H、加酶量和料液比等因素对ACE活性的影响,通过L16(45)正交试验优化酶解工艺。结果表明,最适酶为胰蛋白酶,最佳制备工艺条件为:反应温度45℃,反应时间9 h,p H 8.0,加酶量1 200U/g,料液比为1︰2(g/m L)。最佳工艺所得酶解物的ACE抑制率为36.8%。为青蛤的高值化利用提供了理论依据。     

酶解法制备绵羊乳酪蛋白ACE抑制肽的工艺优化及其抑制机制

为优化酶解法制备绵羊乳酪蛋白ACE抑制肽的工艺条件以及筛选和鉴定一种新的ACE抑制肽,选用5种蛋白酶水解酪蛋白,以水解度、分子质量分布和ACE抑制率为指标筛选最适蛋白酶,采用单因素和响应面试验优化工艺,采用三合一质谱仪(Orbitrap Fusion Lumos Tribrid MS)方法鉴定分子质量小于3 ku组分的氨基酸序列,筛选潜在ACE抑制肽,进行人工合成,测定其IC50值。采用Linewaver-Burk作图确定酶抑制动力学,结合分子对接解析肽段的抑制机制。结果表明:碱性蛋白酶水解酪蛋白的最佳条件为pH 6、底物含量8%、酶添加量4%、温度55 ℃、水解时间90 min,此时酪蛋白水解液ACE抑制率为99.1%。验证具有ACE抑制活性的肽段10条,筛选出一条新颖的降血压肽——LFRQFY(源自αs1-酪蛋白),其ACE抑制活性的IC50为(7.9±1.7)μmol/L,酶抑制动力学为混合抑制模式。分子对接结果表明:LFRQFY能与ACE的氨基酸残基Ala354(活性口袋S1)、His353(活性口袋S2)形成氢键,具有显著的体外降血压活性。     

酶解蛋清蛋白制备ACE抑制肽的工艺研究

为获取酶解蛋清蛋白制备血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽的工艺参数,研究4种蛋白酶酶解蛋清蛋白所得产物对ACE的抑制活性,筛选出胰蛋白酶作为制备蛋清蛋白ACE抑制肽的适宜用酶。运用响应曲面法研究酶解时间、底物浓度([S])和酶与底物质量比([E]/[S])对制备ACE抑制肽工艺的影响,建立以上3因素与ACE抑制率关系的数学模型。结果确定胰蛋白酶酶解蛋清蛋白制备ACE抑制肽的适宜酶解条件为酶解时间4.87h、[S]3.06%、[E]/[S]2.91%、酶解温度45℃、pH7.4,此条件下制备的蛋清蛋白酶解产物ACE抑制率达到50.73%。     

瑞士乳杆菌发酵乳清蛋白制备ACE抑制肽的条件优化

对瑞士乳杆菌发酵乳清蛋白产生血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme,ACE)抑制肽的发酵条件进行探讨。通过单因素分析和响应面试验设计,确定发酵乳清蛋白制备ACE抑制肽的最佳工艺条件：发酵时间为17.52h,发酵温度为37.07℃,乳清质量浓度为114.1g/L,其ACE抑制率可达89.337%。     

酶法制备高抑制ACE活性蜂王浆的水解肽工艺优化

筛选制备高抑制血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme,ACE)活性蜂王浆的酶制剂并确定其最佳酶解条件。在比较5种蛋白酶酶解蜂王浆产物抑制ACE酶活性基础上,选定日本天野公司生产的天野蛋白酶P为最适酶制剂,通过单因素试验和Box-Behnken二次旋转正交试验,并采用响应面分析得到天野蛋白酶P最佳酶解条件为水解时间196min、蜂王浆质量浓度0.0653g/mL、加酶量1503U/g。水解时间和蜂王浆质量浓度对抑制率有极显著影响(P＜0.01),加酶量对抑制率有显著影响(P＜0.05)。此条件下,蜂王浆酶解液对ACE的抑制率达到79.75%,为理论预测值的98.08%。蜂王浆几乎没有抗高血压活性,而天野蛋白酶P酶解蜂王浆产物有显著的抗高血压活性。     

酶解水牛乳蛋白制备ACE抑制肽的工艺优化

以水牛乳蛋白为原料,选用6种蛋白酶在各自适宜的条件下酶解制备血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽,用高效液相色谱检测酶解产物对ACE的体外抑制活性,筛选出胃蛋白酶为制备水牛乳蛋白ACE抑制肽的最佳用酶.在此基础上,分别考察了酶解时间、初始酶用量、初始底物浓度、酶解温度和pH值对酶解工艺的影响,得到水牛乳蛋白制备ACE抑制肽的适宜酶解工艺条件:酶解时间为3h,酶用量为10 000U/g,底物质量浓度为20 g/L,反应温度为37℃,pH值为2.0,此时酶解产物的水解度为17.4％,ACE抑制率可达90.0％.采用超滤技术对酶解产物活性组份进行分离富集,结果表明产物中高活性部分均可富集于10 ku和5 ku渗透液中,且高活性组份分子量主要集中在5 ku以下,该组份对ACE的活性抑制率为84.7％.     

乳清蛋白酶解制备ACE抑制肽的研究

采用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶水解乳清蛋白制备ACE抑制肽，通过体外检测法测定其ACE抑制率。结果表明，碱性蛋白酶水解物的ACE抑制率最大。采用三因素二次通用旋转设计对碱性蛋白酶水解乳清蛋白的水解条件进行优化。研究了底物浓度、温度和酶与底物的质量比对ACE抑制率的影响，建立了回归方程，分析了各因素对ACE抑制率的影响．确定了最优的水解条件。     

双酶水解玉米醇溶蛋白制备抗氧化肽的工艺优化

为了制备抗氧化活性肽,利用Alcalase碱性蛋白酶和中性蛋白酶分步酶解玉米醇溶蛋白。在单因素的基础上,以1.1-二苯基苦基苯肼（DPPH·）自由基清除率、羟基自由基清除率和水解度（DH）为响应值,采用响应面（RSM）中心组合实验,选取Alcalase碱性蛋白酶加酶量、中性蛋白酶与Alcalase碱性蛋白酶活力之比、底物浓度为自变量,探讨最佳酶解工艺条件。采用Design-Expert软件,通过响应面优化确定修正后各因素的最佳工艺条件为:Alcalase碱性蛋白酶加酶量12880 U/（g底物）、中性蛋白酶与Alcalase碱性蛋白酶活力之比为1∶4,底物浓度为3.4%。在此修正条件下,DPPH·自由基清除率为42.98%,水解度为32.18%,与预测值的相对误差为1.04%。浓度为20 mg/m L时,玉米醇溶蛋白的DPPH·自由基清除率和羟基自由基清除率分别为同浓度VC的85.8%和67.0%。      

固定化碱性蛋白酶水解花生蛋白制备ACE抑制肽

采用固定化碱性蛋白酶水解花生蛋白制备ACE抑制肽。以短肽生成率和ACE抑制率作为评价指标,通过响应面优化设计获得最佳的酶解条件为:加酶量1767μ/g蛋白,酶解时间143min,酶解pH为10.00,酶解温度取45℃,获得的短肽生成率和ACE抑制率为82.67%和83.48%。此外,适当增加水解度可以提高酶解产物的ACE抑制活性,但过度水解会导致ACE抑制率下降。     

酶解脱脂蚕蛹蛋白制备ACE抑制肽

以实验室自制的脱脂蚕蛹蛋白为原料,利用酶工程技术,通过对中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、复合蛋白酶、风味蛋白酶、胰蛋白酶等的筛选及单因素和响应面优化试验,对ACE抑制肽的制备工艺条件进行较系统的研究。结果表明：选择碱性蛋白酶作为脱脂蚕蛹蛋白制备ACE抑制肽的酶,制备ACE抑制肽的最佳工艺条件为料液比11.88:100、温度50.22℃、pH 9.46、加酶量7.03%、酶解4h。在此条件下制备的ACE抑制肽的ACE抑制率达到41.98%。     

超声波协同双酶复合酶解米渣蛋白制备ACE抑制肽工艺研究

运用超声波协同双酶复合酶法水解米渣蛋白制备ACE抑制肽。超声波预处理后米渣蛋白水解物ACE抑制活性显著上升,碱性蛋白酶水解产物ACE抑制活性最强。通过单因素分析和响应面优化,得出最优水解条件为:超声功率1 000W,超声时间25min,酶解时间2.5h,料液比1∶8,加酶量3 000U/g。在此基础上复合中性蛋白酶水解,水解时间缩减至2.0h。水解产物通过超滤以及Sephadex G-25凝胶层析后,得到一分子量为338u,最强ACE抑制活性IC_(50)为116μg/ml组分P2。     

碎米蛋白ACE抑制肽制备工艺的研究

研究了以碎米为原料,酶法制备血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽的工艺。采用不同的蛋白酶对碎米蛋白进行水解,以水解液对ACE抑制率为评价指标,结果得出风味蛋白酶为最佳水解酶;通过单因素和正交试验,确定最佳的酶解工艺条件:pH为7.0,酶解温度为55℃,料液比为3%,酶解时间3h,风味蛋白酶酶添加量4000U/g。在此条件下ACE抑制肽的抑制率为85.4%。     

超声波辅助酶解法制备豆粕ACE抑制肽的工艺优化

该试验采用超声波辅助酶解法,研究豆粕血管紧张素转化酶（angiotensin-converting enzyme,ACE）抑制肽的制备工艺条件,并通过响应面优化单因素试验结果。选用5种蛋白酶分别水解豆粕,以ACE抑制率为指标,挑选出最适蛋白酶,结果表明：碱性蛋白酶的ACE抑制率最大,所以选择碱性蛋白酶进行酶解。为提高ACE抑制率,加入超声波预处理,最终确定最佳工艺条件为在超声温度73℃、超声时间39 min、料液比1∶6(g/mL)条件下,再加入7.20%碱性蛋白酶水解3.6 h,在此条件下所制备的豆粕ACE抑制肽的ACE抑制率为61.02%。     

酶解猪血浆蛋白粉制备ACE抑制肽的工艺优化

选用胃蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶和中性蛋白酶水解猪血浆蛋白粉,通过单因素和正交试验考察其水解产物对ACE的抑制活性,并优选酶解工艺条件。结果显示:胃蛋白酶适宜水解血浆蛋白粉,制备ACE抑制肽;影响胃蛋白酶水解的4个因素主次顺序为底物质量浓度>酶解时间>pH值>酶与底物质量比(m酶:m底物),其中底物质量浓度和酶解时间的影响显著(P<0.05),pH值和m酶:m底物的影响不显著(P>0.05);适宜胃蛋白酶水解的条件为pH2.3、水解时间1.5h、底物质量浓度1g/100mL、m酶:m底物1:6。     

双酶分步水解制备菜籽蛋白肽

实验选取Alcalase 2.4 L碱性蛋白酶和复合风味蛋白酶分步水解菜籽蛋白。结果表明双酶分步水解制备菜籽肽的最佳工艺为Alcalase碱性蛋白酶在pH值9.5,温度55℃,底物质量分数3%,酶活性5 500 u/g条件下酶解5.5 h,水解度为21.14%,再用复合风味酶在pH值6,温度50℃,酶活性900 u/g条件下继续酶解3 h。单因素试验和正交实验研究粗肽液用活性炭脱色的优化条件为:在活性炭质量分数1.5%,pH值4.5,温度55℃条件下脱色50 min,脱色率达32.15%,氨基酸损失率为25.15%。