牛蒡根中蛋白酪氨酸磷酸酶1B抑制剂筛选及降血糖活性评价

目的:构建蛋白酪氨酸磷酸酶1B(Protein Tyrosine Phosphatase-1B,PTP-1B)抑制剂高通量筛选体系,并用其在牛蒡根中筛选具有降血糖活性的组分。方法:首先,通过对反应温度、底物浓度、酶浓度3个因素的优化,构建PTP-1B抑制剂的高通量筛选模型,并利用该模型对牛蒡根醇提取及不同极性溶剂萃取物进行活性筛选。其后,将筛选到的活性组分连续8周灌胃2型糖尿病小鼠,通过检测小鼠空腹血糖、糖耐量、糖化血红蛋白含量、血脂4项等指标,评价其降血糖作用。结果:应用PTP-1B抑制剂筛选模型发现,牛蒡根正丁醇萃取物具有较高的PTP-1B抑制活性,其酶活抑制率可达73.15%。动物实验证实牛蒡根正丁醇萃取物对糖尿病小鼠的空腹血糖升高、糖耐量减低、糖化血红蛋白含量升高以及血脂代谢紊乱有一定的改善作用。结论:牛蒡根正丁醇萃取物可通过抑制PTP-1B的活性发挥降血糖作用。     

芫荽酸性磷酸酶的提取、纯化及酶学性质研究

采用硫酸铵分级沉淀、CM-Sepharose离子交换层析、Superdex-200凝胶过滤层析法,从新鲜芫荽中分离纯化出电泳纯的酸性磷酸酶（acid phosphatase,ACP）。该酶的酶活回收率为14.20%、纯化倍数为238.60、酶比活力为295.87 U/mg、亚基分子质量约为53.8 kD;芫荽ACP酶学性质研究结果表明：该酶的最适反应温度为55 ℃,在50 ℃以下时较稳定,因此该酶对温度较敏感;该酶的最适反应pH值为5.8,在pH?4.0～7.0之间较稳定,表明该酶耐受于酸性环境;芫荽ACP的对硝基苯酚磷酸二钠Km值为0.63 mmol/L,表明该酶与底物对硝基苯酚磷酸二钠具有较高的亲和力;甲醇、乙醇、异丙醇、抗坏血酸、草酸、Cu2＋、Pb2＋、Ag＋对该酶具有强烈的抑制作用;Mg2＋、Mn2＋、Ba2＋、K＋对该酶具有一定的激活作用。     

酸枣仁皂苷A、B提取纯化工艺的研究

为了确定从酸枣仁中提取、纯化皂苷A、B的最适方法和最佳工艺条件,以正交试验优化并比较回流法和超声法提取皂苷的工艺条件,筛选一种适合纯化酸枣仁皂苷A、B的树脂,确定上柱试验的最佳工艺参数。试验结果表明:超声法较回流法的提取效果好,其最佳提取条件是:50%(体积分数)乙醇溶液,液固比(mL:g)25:1,功率750W,50℃提取0.5h。SP700树脂具有最大的吸附容量和解吸得率,将其装柱后做上柱试验,用50%乙醇和90%乙醇进行梯度洗脱,皂苷A、B被完全洗脱出来,小柱和大柱的结果具有很好的重复性。     

猪胰脏淀粉酶的提取、部分纯化与性质研究

以猪胰脏为原料,采用异丙醇沉淀、硫酸铵盐溶盐析、透析和反渗透系列方法对淀粉酶提取纯化,并对其性质进行了研究。结果表明,制备的反渗透酶比活力达856U/mg,约为粗酶(146U/mg)的6倍,可替代市购粗淀粉酶用于实验,其最适温度和pH分别为37℃和6.9。     

猪胰脏淀粉酶的提取、部分纯化与性质研究

以猪胰脏为原料,采用异丙醇沉淀、硫酸铵盐溶盐析、透析和反渗透系列方法对淀粉酶提取纯化,并对其性质进行了研究。结果表明,制备的反渗透酶比活力达856U/mg,约为粗酶(146U/mg)的6倍,可替代市购粗淀粉酶用于实验,其最适温度和pH分别为37℃和6.9。      

猪血蛋白肽功能性质的研究

试验测定了猪血蛋白肽的化学成分和等电点,研究了pH、蛋白肽浓度对猪血蛋白肽溶解性、浊度、乳化性、乳化稳定性、起泡性和起泡稳定性的影响。结果表明:本试验所用猪血蛋白肽蛋白含量为85.03%;等电点为pH5,在等电点时,其溶解性、乳化性、乳化稳定性和起泡性最小,而浊度、起泡稳定性在这点最大;温度在50℃时蛋白肽开始变性,高于50℃时蛋白质的溶解性降低,浊度增加。     

猪小肠粘膜碱性磷酸酶的分离纯化及性质研究

猪小肠粘膜经过Tris-HCl缓冲液(pH8.5)充分溶解、正丁醇除脂、冷冻离心、真空冻干等步骤处理后,先后经过Phenyl High Performance疏水层析/DEAE Fast Flow 阴离子层析/Sephacryl S-200凝胶层析纯化后得到猪小肠粘膜ALP(碱性磷酸酶),并对其蛋白二级结构及理化性质进行研究。结果表明:该酶经过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离得到ALP蛋白带,分子量约为57.0 kDa。该酶纯化倍数为68.2,比活力倍数为19.1 U/mg。利用圆二色性光谱测定纯化后蛋白二级结构,发现α-螺旋3.6%、β-折叠41.8%、β-转角21.5%、无规则卷曲33.1%。ALP在催化底物对硝基苯磷酸二钠(p-NPP)作用下最佳温度30 ℃、最佳pH为9.5;金属离子对ALP起到激活的离子为Mg²⁺和Ca²⁺,起到抑制的离子为Zn²⁺和EDTA。     

驼血蛋白胰脂肪酶抑制肽的分离纯化及鉴定

高血脂是心脑血管疾病发病的危险诱因,预防及治疗该病十分重要.食源性生物活性肽作为小分子生物活性物质,天然无毒且副作用小,逐渐成为合成类药物的替代品.文章利用风味蛋白酶对驼血蛋白进行酶解,基于前期单因素试验所得的结果,对驼血蛋白胰脂肪酶抑制肽的制备工艺进行优化,并对所得多肽进行分离纯化,对其胰脂肪酶抑制活性、分子质量分布...     

胰酶水解猪血蛋白工艺条件的优化

为拓展猪血蛋白利用途径,提高猪血蛋白的水解率,得到更丰富的Maillard反应底物——小分子肽及氨基酸,采用木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、菠萝蛋白酶、胰酶、风味蛋白酶、复合蛋白酶7种酶,在固定条件下分别对猪血进行水解,以水解度为指标筛选出水解度最高的酶,然后再对该酶进行从单因素试验到正交试验的水解工艺参数优化。结果显示:胰酶的水解效果最好,其最佳的水解条件是酶加量0.5%、水解时间5h、温度55℃、初始pH8.5、底物蛋白质量分数7%,通过一次水解,可使水解度达到38.72%。     

角鲨烯提取、纯化及其应用

角鲨烯是一种重要生物活性物质,广泛应用于化妆品、医药、食品等许多行业。该文简介角鲨烯结构、性质及生理功能,并对角鲨烯提取、纯化新进展及应用进行综述。     

多糖的提取、分离与纯化

介绍了动物，植物和菌类多糖的提取方法，并针对粗多糖中所含的杂质不同，采用不同的方法加以去除，以达到多糖与杂质的分离。     

卵磷脂提取、分离纯化的研究进展

该文综述了卵磷脂的提取和分离纯化方法,阐述了卵磷脂有机溶剂提取法、酶解法、超临界流体萃取法、超声微波协同萃取等提取方法的优缺点,并对卵磷脂的无机盐复合沉淀法、乙酰化沉淀法、柱层析法、膜分离法等分离纯化方法进行了比较,提出了当前卵磷脂提取和分离纯化存在的问题,总结了卵磷脂的提取及分离纯化方法的研究发展趋势和前景。     

多糖的提取、分离与纯化

介绍了动物,植物和菌类多糖的提取方法,并针对粗多糖中所含的杂质不同,采用不同的方法加以去除,以达到多糖与杂质的分离。     

高铁含量猪血红蛋白的提取纯化及特性研究

取新鲜猪血红细胞裂解原液依次用10%、20%、30%、40%、50%、60%饱和度的硫酸铵沉淀,并分步收集沉淀,获得粗猪血红蛋白。结果表明,血红蛋白主要集中于50%和60%饱和度的硫酸铵沉淀中,杂蛋白主要集中在10%~40%饱和度的硫酸铵沉淀。50%和60%饱和度的硫酸铵沉淀后获得的粗猪血红蛋白用DEAE-Sephrose FF阴离子交换色谱进一步分离,均获得了单一蛋白峰,对出峰处各管样品进行SDS-PAGE电泳,均为分子量为16.4 ku的单一条带,为猪血红蛋白的单亚基分子量,经PDQuest软件分析纯度为95.2%,比市售的猪血红蛋白纯度(约为85%)高。采用Bradford法测定各步分离组分的蛋白浓度,结果表明,血红蛋白得率占总蛋白的49.69%;纯化猪血红蛋白的溶解度为32.96%;纯化后猪血红蛋白的含铁量为0.335%,与血红蛋白中理论铁含量0.35%接近。     

高铁含量猪血红蛋白的提取纯化及特性研究

取新鲜猪血红细胞裂解原液依次用10%、20%、30%、40%、50%、60%饱和度的硫酸铵沉淀,并分步收集沉淀,获得粗猪血红蛋白。结果表明,血红蛋白主要集中于50%和60%饱和度的硫酸铵沉淀中,杂蛋白主要集中在10%⁴0%饱和度的硫酸铵沉淀。50%和60%饱和度的硫酸铵沉淀后获得的粗猪血红蛋白用DEAE-Sephrose FF阴离子交换色谱进一步分离,均获得了单一蛋白峰,对出峰处各管样品进行SDS-PAGE电泳,均为分子量为16.4 ku的单一条带,为猪血红蛋白的单亚基分子量,经PDQuest软件分析纯度为95.2%,比市售的猪血红蛋白纯度（约为85%）高。采用Bradford法测定各步分离组分的蛋白浓度,结果表明,血红蛋白得率占总蛋白的49.69%;纯化猪血红蛋白的溶解度为32.96%;纯化后猪血红蛋白的含铁量为0.335%,与血红蛋白中理论铁含量0.35%接近。      

猪胆汁中猪去氧胆酸的提取纯化工艺条件的研究

以猪胆汁为原料,初步研究了乙酸乙酯添加量、处理温度、处理时间3个因素对猪去氧胆酸(HDCA)提取率的影响。实验结果表明:当乙酸乙酯添加量为猪胆粉的8倍,处理温度80℃,处理时间2h,HDCA的提取率较高为93.15%。     

大力开发蛋白质资源—猪血蛋白利用的研究

由于人口不断增加,对蛋白质的需求最亦不断增加,仅从发展畜牧业和水产养殖业等方面来索取之是不能满足需求的,近年来,各国均不断地研究开发血液蛋白质。血液含有18～19%的蛋白质与精肉几乎等量,有人称为为“溶体肉(liquid meat)。血液的     

猪牛血块超氧化物歧化酶提取工艺研究(1)——保护剂、溶膜剂和激活剂的选择

目的:研究保护剂、溶膜剂和激活剂对从猪、牛血块中分离提取超氧化物歧化酶(SOD)的影响,确定其种类和用量。方法:采用两因素、三因素试验设计。结果:猪血与牛血在SOD活性和产率上差异达到极显著水平(P<0.01);保护剂混合组合好于单用,混合组合以1.5%乳糖(a)+0.5%β-环糊精(b)+0.25%聚乙二醇(c)效果最好;溶膜剂:牛血以3%曲拉通X-100(d)+0.5%正丁醇(e),猪血以3%曲拉通X-100(d)效果较好;保护剂加量以血块质量的20%为最佳,溶膜剂加量以血块质量的15%￣20%为好,激活剂加量以2.5%最佳。结论:省去了采血加入抗凝剂和离心分离血球工艺,且采用溶膜剂及机械法溶血,效果好、成本较低,适合规模化生产。以此工艺获得的SOD活性在3000U/mg蛋白以上,且从牛血提取的SOD活性和产率均高于猪血。     

花青素提取、分离纯化技术研究进展

花青素是水溶性天然色素,具有重要的营养价值和药用价值,在食品、化妆品、医药等行业有着巨大的潜力。综述花青素的溶剂浸提法和辅助提取法等提取方法,膜分离法、柱层析法、高效液相色谱法和高速逆流色谱法等纯化方法,总结各种方法的优势和不足,为花青素的产业化开发和深入研究提供参考。     

绿原酸生物活性、资源及其提取纯化

绿原酸是一种重要的生物活性物质,是许多植物及中草药的主要有效成分之一.该文对绿原酸的生物活性、资源、提取、纯化及检测进行系统概述.