柚叶总多酚对LPS所致Caco-2细胞间高通透性的保护作用

本文探讨了柚叶总多酚对脂多糖(LPS,2μg/m L)致Caco-2细胞高通透性的保护作用。MTT法测定细胞生存率,细胞内乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)水平依说明书使用试剂盒测定。酶联法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定白介素(Interlukin,IL)-1β、IL-8和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α分泌水平。跨上皮细胞电阻(trans epithelial electrieal resistanee,TEER)值和异硫氰酸荧光素-右旋糖酐(FD40)透过度用于评估细胞通透性水平。实时定量PCR(Quantitative real-time PCR,q RT-PCR)检测细胞IL-1β、IL-8、TNF-α、闭锁蛋白(Occludin)、紧密连接蛋白-1(claudin-1)、ZO-1和肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)的m RNA表达。柚叶总多酚能显著提高受损细胞生存率,抑制LDH溢出,有效抑制受损细胞炎性细胞因子(IL-1β、IL-8、TNF-α)的分泌及m RNA转录。柚叶总多酚可增强细胞紧密连接因子(Occludin、claudin-1、ZO-1)的m RNA转录,抑制MLCK的m RNA转录从而改善细胞间高通透性。结果提示,柚叶总多酚具有较强的抗炎活性,能通过上调细胞内细胞紧密连接相关因子的m RNA转录显著改善LPS造成的Caco-2细胞间高通透性的发生。     

辣木多肽对LPS所致Caco-2细胞间高通透性的保护作用

探讨了辣木多肽(MOPP)对脂多糖(LPS,2μg/m L)诱发Caco-2细胞高通透性的保护作用。MTT法测定细胞生存率,细胞乳酸脱氢酶(LDH)水平依说明用试剂盒测定。酶联法(ELISA)检测白介素-1β(IL-1β)、IL-8和肿瘤坏死因子(TNF-α)的分泌水平。跨上皮细胞电阻(TEER)值和异硫氰酸荧光素-右旋糖酐(FD40)透过度评估细胞通透的改变。实时定量PCR检测细胞IL-1β、IL-8、TNF-α、闭锁蛋白(Occludin)、紧密连接蛋白-1(claudin-1)、ZO-1和肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的mRNA表达。与模型细胞相比,高浓度(150μg/m L)的MOPP处理能显著提高受损细胞生存率至83.8%,并有效抑制50.3%的LDH溢出。MOPP有效降低模型细胞中IL-1β(19.8%),IL-8 (43.7%)和TNF-α(37.9%)的分泌并抑制其mRNA转录(IL-1β:44.3%,IL-8:35.0%,TNF-α:33.5%)。此外,MOPP可增强细胞紧密连接因子(Occludin、claudin-1、ZO-1)的mRNA转录,并抑制31.3%的MLCK的mRNA转录。结果意味着,MOPP具有较强的抗炎活性,可由上调细胞内紧密连接相关因子的mRNA转录显著来改善LPS所致Caco-2细胞间高通透性的发生。     

应用Caco-2细胞模型评价真菌毒素毒性研究进展

真菌毒素是一些病原真菌在侵染作物过程中产生的次级代谢产物, 许多食品和饲料在生产、加工、贮存和流通过程中都有可能受到真菌毒素的污染。人和动物摄入真菌毒素后, 体内能够引发多种生理毒性反应, 如肝肾毒性、致癌性、肠道损伤及炎症、中枢神经系统异常、生殖紊乱等。肠上皮细胞是分隔机体内部环境与外界的屏障, 在真菌毒素的毒性评价中, 对真菌毒素引起肠上皮细胞损伤的评价是一个重要方面。人结肠癌Caco-2细胞系常用于建立体外肠道屏障模型, 该模型可应用于体外评价药物或毒素在小肠粘膜或上皮的吸收转运效率, 以及对肠道屏障功能的影响。本文综述了Caco-2细胞单层模型的建立和评价指标, 应用该模型评价几种常见真菌毒素对肠上皮细胞的运输、屏障功能的影响, 以及肠上皮细胞毒性等研究进展, 为进一步研究多种真菌毒素对肠上皮损伤的机制提供支持。     

槟榔多糖对Caco-2细胞氧化损伤的保护作用

采用CCK-8法测定细胞的存活率、Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡率,利用蛋白质免疫印迹检测人结直肠腺癌细胞(Caco-2细胞)中抗凋亡蛋白Bcl-2、促凋亡蛋白Bax及细胞间紧密连接蛋白的表达情况,研究槟榔多糖对DMNQ诱发Caco-2细胞氧化损伤的保护作用。结果表明：槟榔多糖能显著抑制促凋亡蛋白Bax的表达并同时促进抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,抑制DMNQ引起的细胞凋亡并减轻内质网应激,显著上调Caco-2细胞紧密连接蛋白ZO-1、Occludin和Claudin 1的表达,维持细胞紧密连接的完整性,即槟榔多糖能显著改善DMNQ诱导的Caco-2细胞氧化损伤。     

越橘花青素脂质体对Caco-2细胞的抗氧化作用

目的:研究越橘花青素脂质体对氧化应激状态下Caco-2细胞抗氧化功能的影响。方法:以大豆卵磷脂和胆固醇混合物为壁材,采用薄膜分散法制备越橘花青素脂质体,并对其稳定性进行评估。通过建立过氧化氢诱导的Caco-2细胞氧化损伤模型,评估越橘花青素脂质体对氧化损伤细胞的保护效果。结果:越橘花青素脂质体呈表面光滑的球型结构,平均粒径(213.2±13.4)nm,多分散性指数(PDI)0.201±0.026。随着储存时间的延长,花青素脂质体的粒径和pH值逐渐增大。在质量浓度均为200μg/mL时,花青素组与花青素脂质体组的氧化损伤细胞生存率分别为74.33%和84.17%;氧化损伤细胞内ROS含量分别下降了36.58%,38.02%;MDA含量分别下降了43.44%,53.66%;T-AOC含量分别提高了3.42,8.89倍;SOD酶活性分别提高了5.76%,8.79%;CAT酶活性分别提高了9.21%,12.26%。结论:脂质体作为载体可以提高越橘花青素的生物活性。越橘花青素脂质体可以降低受损细胞内MDA与ROS水平,提高氧化损伤细胞的生存率,增强细胞内源性抗氧化酶的活力,进而发挥抗氧化作用。     

金针菇蛋白聚糖对脂多糖诱导的Caco-2/RAW264.7细胞共培养模型炎症的抑制作用

随着生活节奏的加快和生活方式的改变,炎症性肠病的发病率不断增加,从饮食中寻找抑制炎症成分是防控炎性肠病的有效途径。本实验以金针菇蛋白聚糖（Flarnmulina velutipes proteoglycans,FPG）1-1为原料,建立脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的人结肠腺癌细胞（Caco-2）、巨噬细胞（RAW264.7）共培养炎症模型,测定FPG1-1对一氧化氮（nitrite oxide,NO）、活性氧（reactive oxygen species,ROS）及细胞因子的影响,以分析其对炎症的作用。结果显示：与模型组相比,质量浓度为200 μg/mL FPG1-1可以极显著降低RAW264.7 NO、ROS的生成（P＜0.01）,同时可以上调白细胞介素（interleukin,IL）-10、下调肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor,TNF-α）、IL-1β、IL-6的分泌。以上结果表明,FPG1-1能够有效抑制LPS诱导的Caco-2/RAW264.7共培养模型炎症反应。本研究结果可为金针菇功能成分利用和抑制炎性肠病功能食品开发提供理论依据。     

笛鲷鱼鳞源功能多肽对Caco-2细胞氧化应激损伤的保护作用

本实验利用650μmol/L H₂O₂构建Caco-2细胞氧化应激损伤模型,探究笛鲷鱼鳞源功能多肽(crimson snapper scale peptides,CSSPs)对Caco-2细胞氧化应激损伤的保护作用。通过测定细胞上清液乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活力和白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)质量浓度、胞内抗氧化酶活力和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)相对含量、相关凋亡基因(Caspase-3、Caspase-9、Bax和Bcl-2)的相对表达量,从细胞氧化还原状态和细胞凋亡两方面阐明CSSPs对损伤Caco-2细胞的抗氧化作用。结果显示,CSSPs能够通过抗氧化防御系统来减轻H₂O₂对Caco-2细胞的损伤,主要包括增加胞内抗氧化酶活性以抑制LDH释放、胞内ROS积累、MDA及IL-8的生成。此外,CSSPs抑制氧化应激损伤诱导的细胞凋亡与线粒体...     

苹果多酚对Caco-2细胞和LDL抗氧化作用的研究

采用细胞氧化损伤模型和Cu~(2+)诱导的低密度脂蛋白(LDL)氧化修饰模型来评价不同品种中苹果多酚的抗氧化作用。结果表明H_2O_2浓度为10 mmol/L时对细胞模型损伤程度比较适中。富士中苹果多酚对损伤的Caco-2细胞的保护作用最强,其中富士、国光、金冠和王林处理后细胞产MDA量分别是对照的20%、33%、40%和60%;苹果多酚对LDL的氧化修饰具有显著的抑制作用,除了王林多酚外,富士、国光和金冠均能极显著地延长LDL氧化的延滞时间,其中富士苹果多酚的作用最强是对照延滞阶段时间的7倍,国光和金冠苹果次之分别是对照延滞时间的4倍和3倍。     

蓝莓叶总黄酮对LPS/D-GalN诱导小鼠急性肝损伤的保护作用

采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)/氨基半乳糖(D-galactosamine,D-GalN)诱导建立小鼠急性肝损伤模型,用不同剂量蓝莓叶总黄酮(flavonoids of blueberry leaf,FBL)进行干预后,采集小鼠肝脏和血液,制备肝脏HE病理切片;检测血清中天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)和丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)活性,以评价FBL对小鼠肝功能的影响;采用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血浆中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,以评价FBL的抗炎活性;测定肝脏组织中丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和过氧化氢酶(catalase,CAT)的活性,以评价FBL的抗氧化作用。结果显示,与模型小鼠相比,FBL可显著降低LPS/D-GalN诱导的AST和ALT水平增高,明显抑制LPS/D-GalN引起的炎症因子分泌,有效逆转LPS/D-GalN引起的氧化损伤,并且有效缓解LPS/D-GalN导致的肝脏改变。上述结果表明,FBL对LPS/D-GalN诱导的急性肝损伤有保护作用,保护作用与抗炎和抗氧化作用有关。     

小麦低聚肽对体外肠上皮细胞氧化应激损伤的保护作用

文中研究了小麦低聚肽对氧化应激损伤的体外肠上皮细胞的保护作用。将实验分为5组,对照Ⅰ(空白组0μmol/L H2O2)、对照Ⅱ(氧化应激组100μmol/L H2O2),处理Ⅰ、处理Ⅱ、处理Ⅲ(分别在对照组Ⅱ的条件下添加1、5、10 mg/m L小麦低聚肽),通过MTT法比较不同培养时间(12、24、48 h)小麦低聚肽对氧化应激损伤Caco-2细胞增殖率的影响,通过取培养至不同时间(12、24、48 h)的Caco-2细胞上清液、细胞裂解液,测定LDH、SOD、MDA含量变化。结果显示:1 mg/m L小麦低聚肽对损伤肠上皮细胞表现出显著的保护作用,细胞毒性降低、增殖率提高,细胞内SOD、MDA含量与氧化应激组相比均有显著性差异;小麦低聚肽对细胞的保护作用随着培养时间的延长而增强,24、48 h培养组与12 h培养组相比有显著性差异。小麦低聚肽对氧化应激损伤的体外肠上皮细胞有一定的保护作用,并且在一定范围内与浓度时间正相关。     

紫芜菁乙醇提物对Caco-2细胞氧化损伤的保护作用

探讨紫芜菁乙醇提取物(BREE)的体外抗氧化能力及其对人肠上皮Caco-2细胞氧化损伤保护效果。二苯代苦味酰基自由基(DPPH)、羟基自由基(·OH)清除率与总还原力评估BREE的体外抗氧化力。过氧化氢(H_2O_2,150μmol/L)建立Caco-2细胞氧化损伤模型评估BREE的细胞保护效果。受损细胞生存率的影响以MTT法测定。细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)水平依说明用试剂盒测定。硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量。2’,7’-二氢二氯荧光黄双乙酸钠法测定细胞内活性氧(ROS)水平。酶联法测定白介素(Interlukin,IL)-1β和IL-8的水平。BREE具有较强的自由基(DPPH和·OH)清除力和总还原力。BREE能显著抑制H_2O_2造成的细胞死亡,提高受损细胞中抗氧化物酶(SOD、CAT和GSH-Px)活性,降低受损细胞内MDA与ROS的生成,并抑制IL-1β和IL-8的分泌。结果提示,BREE具有较强的体外抗氧化能力,能增强细胞内源性抗氧化酶的活力显著改善H_2O_2引发的Caco-2细胞氧化应激损伤并降低炎症反应。     

胶束化对Caco-2上皮细胞叶黄素吸收和转运的影响

本试验为研究胶束化促进叶黄素肠上皮细胞转运的特性,采用体外消化模型探究胶束化处理对叶黄素生物利用度的影响以及Caco-2细胞模型测定胶束化对叶黄素肠细胞摄取、表观渗透系数和细胞内吞的影响。结果显示:随浓度升高胶束化叶黄素生物可给率先增大后减小,浓度为6×10^-5 mol/L时胶束化叶黄素的生物可给率最高,是叶黄素单体的1.42倍;叶黄素胶束化显著促进了其细胞吸收量,细胞内积累量是单体的2.6倍。表观渗透系数(P_app)测定表明胶束化叶黄素累积转运分数大于1.5%,且被动扩散为其跨膜输送主要途径;胶束化后,P_app(B→A)与P_app(A→B)比值明显降低。进一步通过细胞内吞抑制实验发现制霉菌素(Nystain)、3-羟基-2-萘甲酸[(3,4-二羟基苯基)亚甲基]酰肼(Dynasore)均能抑制胶束化叶黄素的转运(P<0.05),而5-(N-乙基-N-异丙基)阿米洛利(EIPA)无显著抑制作用(P>0.05)。以上研究结果表明,胶束化处理显著促进了叶黄素的生物利用度,其在肠细胞中的跨膜吸收途径以被动扩散为主,兼具网格蛋白介导和小窝/脂筏蛋白介导的细胞内吞途径。     

红毛藻多糖对H2O2诱导的Caco-2细胞氧化损伤的保护作用

目的：研究红毛藻多糖（Bangia fusco-purpurea polysaccharide,BFP）对H2O2诱导的人结肠腺癌（Caco-2）细胞氧化应激损伤的保护作用。方法：构建过氧化氢（H2O2）诱导的Caco-2细胞氧化损伤模型,通过形态学观察和测定细胞裂解液中的抗氧化物水平及相关酶活力,评价BFP对Caco-2细胞氧化损伤的保护作用。结果：BFP可明显提高H2O2诱导氧化损伤的Caco-2细胞活力,降低细胞内活性氧生成水平,提高细胞内超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活力以及还原型谷胱甘肽水平,减少丙二醛生成,并通过抑制Caspase-3和Caspase-9活性来改善氧化应激损伤引起的细胞凋亡。结论：BFP对H2O2诱导氧化应激损伤的Caco-2细胞具有保护作用,可通过增强细胞内源性抗氧化酶活力、提高非酶类抗氧化物水平和抑制细胞凋亡明显缓解H2O2诱导的Caco-2细胞氧化应激损伤。     

Caco-2细胞模型用于乳源ACE抑制肽LL、LPEW的小肠吸收研究

通过建立并验证Caco-2细胞模型,分析血管紧张素转化酶(angiotensin-I converting enzyme,ACE)抑制肽LL、LPEW在小肠中的转运量,研究LL、LPEW的小肠吸收机制。从细胞形态、跨膜电阻和碱性磷酸酶活性3个方面验证Caco-2细胞模型可用性。分析ACE抑制肽LL、LPEW的Caco-2细胞转运量,LL的表观渗透系数(P_(app))为(275.17±8.28)×10~(-7 )cm/s,肠道吸收良好;LPEW的P_(app)为(5.13±1.49)×10~(-7) cm/s,相比于LL,肠道吸收量较低。加入旁路转运促进剂去氧胆酸钠、内吞抑制剂渥曼青霉素(Wortmannin)、肽转运载体竞争性抑制剂Gly-Pro,对比无抑制剂时LL的转运量,分析得到LL的跨膜转运机制可能为内吞途径。加入ATP能量生成抑制剂叠氮化钠、多药耐药蛋白抑制剂MK-571、P-糖蛋白抑制剂维拉帕米,对比无抑制剂时肽LL的转运量,得出LL没有外排作用,所以LL肠道吸收较好。     

核桃蛋白多肽对脂多糖诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用

构建脂多糖（LPS）诱导小鼠急性肝损伤模型,研究核桃蛋白多肽（WPP）对肝损伤的保护作用。实验小鼠随机分为5组（空白对照组,LPS模型组,LPS+WPP低、中、高剂量组）,连续灌胃WPP 5周后,采用尾静脉注射LPS诱导肝损伤,检测各处理组小鼠肝脏指数、血清中谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）活性、肝组织中超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性、组织病理学变化以及血清中炎症因子白细胞介素IL-1β和IL-6水平。结果表明：与LPS模型组相比,WPP高剂量组肝脏指数显著降低（P<0.05）,WPP中、高剂量组小鼠血清中ALT和AST活性极显著下降（P＜0.01）,WPP低、中、高剂量组小鼠血清中IL-1β和IL-6含量极显著下降（P＜0.01）,WPP中、高剂量组小鼠肝组织中SOD活性显著升高（P<0.05）,WPP低、中、高剂量组小鼠肝组织中GSH-Px活性极显著升高（P＜0.01）;组织病理学观察发现,WPP低、中、高剂量组小鼠肝组织病理损伤明显减轻。WPP对LPS造成的小鼠急性肝损伤具有明显的保护作用。     

辣木油脂对多糖诱导小鼠肠道炎症的改善作用

探讨辣木油干预对LPS诱导雄性ICR小鼠肠道炎症的改善作用及机制。采用脂多糖（LPS,3.5 mg/kg）腹腔注射建立小鼠肠道炎症模型后,连续7 d给予辣木油灌服,玉米油为对照。观察小鼠体重、结肠组织变化情况。酶联免疫吸附测定法（ELISA）分别测定血清及结肠中细胞因子[IL-1β,IL-6,IL-18,肿瘤坏死因子-α（TNF-α）]水平。qRT-PCR法检测结肠内NOD样受体蛋白3(Nlrp3),凋亡相关斑点样蛋白（Asc）,半胱氨酸蛋白酶-1（caspase-1）和白介素（Interleukin, IL）-1β的mRNA水平。辣木油显著抑制LPS造成的小鼠体重下降,降低小鼠结肠重量与长度比（p<0.05）。辣木油干预同时也显著降低模型小鼠血清炎性因子（IL-1β：175.44 ng/L,IL-6：82.12 ng/L,IL-18：82.91 ng/L和TNF-α：51.75 ng/L）和结肠中（IL-1β：184.12 ng/L,IL-6：58.19 ng/L,IL-18：52.32 ng/L和TNF-α：81.31 ng/L）水平,且能够显著降低模型小鼠结肠中髓过氧化物酶（MPO）水平至86.32 ng/L（vs 损伤组：113.59 ng/L,p<0.05）。与损伤组相比,辣木油分别抑制Nlrp3（39.31%）,Asc（42.81%）,caspase-1（35.59%）和IL-1β（28.62%）的mRNA表达。结论提示,辣木油具有改善LPS所致小鼠肠道炎症的效果。而这一机制可能与辣木油能够抑制结肠组织内NLRP3小体的过度活化有关。