果蔬酵素中优良酵母菌的分离、鉴定及耐受性研究

该研究采用传统培养分离技术从自然发酵的果蔬酵素中分离酵母菌,通过高糖、乙醇耐受性测定从中筛选优良菌株,采用形态观察、生理生化试验及分子生物学技术对其进行菌种鉴定,并对其低pH、高糖、乙醇及高温耐受性进行分析。结果表明,分离筛选得到一株优良酵母菌,编号为7-1-1,经鉴定,该菌株属于异常威克汉姆酵母（Wickerhamomyces anomalus）,其具有良好的耐受性,能在低pH（1.5）、高糖（900 g/L）的培养基上生长,可耐受体积分数为14%的乙醇和37 ℃的高温,可为果蔬发酵剂的开发奠定一定的基础。     

葡萄酒发酵优良酵母的筛选、鉴定及应用

该研究以商业酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）F15为对照,通过测定产乙醇性能、产酯性能及絮凝特性从宁夏葡萄酒产区的土壤、葡萄中分离筛选优良酵母菌株,采用分子生物学技术对其进行菌种鉴定,并对其耐受性及其在葡萄汁中的发酵性能进行研究。结果表明,筛选得到两株优良酵母菌株,编号为J-1、J-3,经鉴定,均为酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）。这2株菌株生长特性良好,均具有较好的耐受性,均可耐受pH值3.0、体积分数14%的乙醇,300 mg/L SO2,400 g/L葡萄糖,且菌株J-1的耐受性更好。菌株J-1的发酵速度与商业酿酒酵母F15相当;与商业酿酒酵母F15发酵酒样相比,酿酒酵母J-1发酵酒样中残糖含量较低（4.48 g/L）,挥发性香气物质增加2种,且酯类物质含量较高,花香和果香比较浓郁,口感较好。综上,酿酒酵母J-1具有较好的酿造特性,在葡萄酒工业上具有一定的应用潜力。     

一株源于北派酱香白酒酿造环境中产淀粉酶细菌的筛选、鉴定及其特性研究

采用平板涂布法从酱香型白酒酿造环境（大曲、酒醅和窖泥）筛选产淀粉酶细菌菌株,通过菌落形态、细胞显微结构、生理生化特性和分子生物学方法对其进行鉴定,并对其生长特性及耐受性进行研究。结果表明,从酱香型白酒大曲中筛选得到一株产淀粉酶的细菌,编号为2-2,经鉴定菌株2-2为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）。菌株2-2能够在25～45 ℃和pH 5～9范围内生长良好,属于乙醇高耐受性菌株,在乙醇体积分数为12%时仍能生长,并具有较高的NaCl和葡萄糖耐受性,最高耐受质量分数分别为15%和70%。菌株2-2在高粱酶解液中能产生酱香型白酒中的多种重要风味物质,如苯乙醇、糠醇3-羟基-2-丁酮、2,5-二甲基吡嗪和乙烯基愈创木酚等,是酱香型白酒酿造中重要的功能菌株。     

柑橘及桑葚中优质酵母菌的筛选及鉴定

该研究以南充本地的柑橘和桑葚自然发酵果肉汁为材料,采用孟加拉红固体培养基分离酵母菌,通过产酒精和产酯能力测定、生长性能及耐受性分析筛选能够发酵柑橘、桑葚复合果酒的高效优质酵母菌株,并通过生理生化试验及分子生物学技术对其进行菌种鉴定。结果表明,共分离得到32株酵母菌菌株（编号为S1～S30）,其中菌株S4、S15、S18和S24产酒精和产酯能力较高,且菌株S24生长性能和耐受性较好,其产酒精度为10.74%vol,总酯产量为2.05 g/L,生长适应性强,可耐受70%的葡萄糖含量、pH值2.0的强酸环境和体积分数22%的乙醇。菌株S24被鉴定为克鲁维毕赤酵母（Pichia kluyveri）。     

高产酸本土非酿酒酵母菌株的筛选及发酵性能研究

以25株本土非酿酒酵母菌为研究对象,采用酵母浸出粉胨葡萄糖（YPD）10培养基及Triple M改良模拟汁初筛,并进行耐受性（乙醇、SO2、糖及pH）测定及葡萄汁发酵,筛选能够有效增加葡萄酒酸度的优良本土非酿酒酵母菌。结果表明,非酿酒酵母菌株LT1及HU4产酸性能较好,具有较好的乙醇、SO2、糖和pH耐受性,其中菌株LT1能耐受乙醇体积分数12%、糖400 g/L及pH 2.75,菌株HU4能耐受乙醇体积分数6%vol、糖250 g/L及pH 2.75。菌株LT1和HU4在葡萄汁中启酵时间较短,发酵旺盛期CO2质量损失速率均＞0.8 g/（L·h）,乳酸产量分别为0.93 g/L、1.14 g/L,乙酸产量分别为0.38 g/L、0.42 g/L,具备酿造增酸葡萄酒的潜力。     

甘肃河西走廊葡萄酒产区本土酒酒球菌发酵耐受性分析

为筛选出具有良好发酵耐受性的本土酒酒球菌(Oenococcus oeni),以甘肃河西走廊葡萄酒产区分离鉴定的7株O. oeni为供试菌株,分别对其进行pH值、乙醇、SO_2质量浓度和发酵温度等酿造因素的耐受性考察,选择耐受性较好的菌株进行复合因素(pH值×乙醇×SO_2质量浓度)适应性分析。结果表明,7株本土O. oeni发酵耐受性存在差异,且同一菌株对不同因素的抗胁迫性也不相同;菌株MG-1、MG-7、QL-11、ZX-1在pH 3.2、乙醇体积分数14%及SO_2质量浓度40 mg/L条件下均可生长增殖;影响菌株MG-1和MG-7生长的因素主次为乙醇体积分数SO_2质量浓度pH值,影响菌株QL-11和ZX-1生长的因素主次为乙醇体积分数pH值SO_2质量浓度。综合分析,供试菌株中ZX-1的发酵耐受性最强,其次为菌株MG-1、MG-7和QL-11,均具有一定的产业化应用潜力。     

番茄自然发酵液中酵母菌的分离鉴定及其特性研究

为研究番茄自然发酵液中的酵母菌及其特性，对发酵30 d番茄发酵液中的酵母菌分离纯化，通过菌落形态、镜检特征和26S rDNA序列对分离的菌株进行鉴定，并对该菌的生长特性和耐受性进行评价。结果表明，从番茄发酵液中分离出TY-1、TY-2和TY-3 3株酵母菌均为毕赤酵母属（Pichia）中的库德毕赤酵母种（P.kudriavzevii）；其中TY-1和TY-2亲缘关系较近，且与P.kudriavzevii strain SLDY-035菌株的同源性为99%，故选取TY-1进行后续实验；TY-3与P.kudriavzevii small subunit ribosomal菌株的同源性为100%。TY-1和TY-3的最佳生长温度为29℃、pH5.5，对10%~30%葡萄糖和6%~9%酒精具有一定的耐受能力。结果表明，从番茄发酵液中分离得到的酵母菌株具有良好的生长性能，可为果蔬发酵剂的开发奠定基础。     

7株葡萄野生酵母菌的特性研究

对采集自新疆地区的7株(X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7)野生型酿洒酵母的耐受性(包括高酒精浓度、SO2、低pH值、高糖浓度)和酿酒性能进行了分析,通过试验得出野生型本土酿酒酵母普遍能耐受12%酒精;在pH值为2.5时,菌株均生长;当SO2浓度达到250mg/L时,除X1外,所有野生酿酒酵母能够生长;能够耐受<50%葡萄糖浓度;经过发酵后,模拟酒中的总酸含量降低幅度较大(19.55%51.46%),均具有优良的耐受性和酿酒特性.     

浓香型大曲中降解生物胺菌株的筛选及应用

从浓香型白酒大曲中筛选出生物胺降解菌,并研究其生长特性和在固态发酵条件下降解生物胺的能力。利用高效液相色谱法测定发酵液中生物胺含量,得到1株降解生物胺效果最好的酵母菌,经形态学和分子生物学鉴定其为奥默柯达酵母,将其命名为Kodamaea ohmeri HJM。研究K.ohmer HJM的生长特性,得到其最高耐受温度为43℃,乙醇最高耐受体积分数为14%,耐受酸最低为pH 2,并具有较高的葡萄糖耐受性。在固态发酵条件下,利用小麦为发酵基质得到接种菌液样品组和空白对照组中生物胺含量具有显著差异(P<0.05),其对几种生物胺的降解率分别为:腐胺(39.19±0.08)%、尸胺(33.77±0.06)%、甲胺(32.44±0.06)%、乙胺(23.39±0.06)%、吡咯烷(63.42±0.02)%、异戊胺(49.83±0.07)%、环己胺(49.73±0.03)%、环戊胺(66.07±0.08)%。该研究从浓香型大曲中分离出对生物胺降解率较高的菌株,可为白酒中生物胺的调控提供参考价值。     

耐高酒精野生酵母菌株的筛选及其特性研究

以从内蒙古各旗县果园的果实和土壤中分离得到的200株酵母菌为出发菌株,经四级筛选最终得到一株酒精耐受力为16%vol的菌株K1-2,并对该菌株的发酵特性与生物学特性进行了研究。结果表明,该酵母菌的最适生长pH值为5.5,最适生长温度为28 ℃,最高可耐受600 mg/L的SO2,在葡萄糖含量为60%的条件下仍可生长。发酵5 d后糖醇转化率可达68.45%,产酒精度为6.4%vol,表明该菌株是一株具有良好酒精耐受性与发酵性能的酵母菌株,除拥有较高的耐SO2与耐高糖能力以外,还具备较强的产酒精能力,有很高的应用价值。     

以大豆糖蜜为原料高产乙醇酵母的筛选鉴定及其发酵特性研究

从大豆糖蜜中进行高产乙醇酵母的筛选和鉴定,并对其发酵特性进行研究。从大豆糖蜜中通过菌种的富集分离,TTC平板法初筛,耐乙醇能力及乙醇发酵能力的测定,筛选出一株乙醇产量达9.07%(V/V)的菌株P14。通过个体形态、菌落特征、生理生化及26S rDNA D1/D2区序列分析将菌株P14鉴定为酿酒酵母。研究了大豆糖蜜浓度及添加氮源和无机盐对酿酒酵母P14发酵生产乙醇的影响及酿酒酵母P14对大豆糖蜜中低聚糖的利用,结果表明大豆糖蜜浓度、添加氮源和无机盐对乙醇发酵影响显著,最佳的大豆糖蜜浓度为40%,添加氮源为1.2 g/L的蛋白胨;补加的无机盐为0.4 g/L MgSO4。在此培养基中发酵72 h后,糖蜜中90.10%的葡萄糖,91.23%的蔗糖,92.56%的棉籽糖和96.97%的水苏糖被酵母利用。因此大豆糖蜜中筛选出来的酿酒酵母P14具有较强的利用大豆糖蜜中的大豆低聚糖发酵产生乙醇的能力。     

酿酒活性干酵母生理特性的研究

建立一种酿酒活性干酵母生理活性的简易评价方法,比较并筛选一株适合以木薯粉水解液发酵发酵生产燃料酒精的活性干酵母。优化2株酿酒活性干酵母的活化条件、生长温度和生长pH值,以木薯粉水解液为发酵液,在最适生长条件下比较两株酵母的生长曲线、发酵强度、耐糖能力、耐温能力和耐酒精能力。选择酿酒活性干酵母Ⅰ作为木薯粉水解液发酵酵母,该酵母在前36h发酵强度高于1g(/L.h),36h后发酵强度迅速下降;耐糖能力为20%,耐受温度是55℃以及耐酒精浓度是7%。     

产果香风味酵母的分离鉴定及其生长特性分析

通过传统培养分离、嗅闻技术和气相色谱-质谱（GC-MS）法从大米发酵液中分离筛选出产果香风味的酵母,通过形态观察、生理生化试验及分子生物学技术对其进行鉴定,并对其生长特性进行研究。结果表明,筛选得到的一株产果香风味酵母菌株并命名为QL-2,利用该菌株发酵麦芽汁糖化液后,呈果香风味物质的种类及含量增加,其中乙酸乙酯相对含量最高（23.26%）。经鉴定,确定菌株QL-2为酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）,其对生长环境具有一定的耐受性,可在pH 3.5、乙醇体积分数10%、葡萄糖含量60%、低温15 ℃条件下正常生长,可作为理想的精酿啤酒产果香风味酵母。     

Fermentative stress adaptation of hybrids within the Saccharomyces sensu stricto complex

Along the fermentation process yeasts are affected by a succession of stress conditions that affect their viability and fermentation efficiency. Among the stress conditions the most relevant are high sugar concentration and low pH in musts, temperature and, as fermentation progresses, ethanol accumulation. Nowadays, due to the demanding nature of modern winemaking practices and sophisticated wine markets, there is an ever-growing search for particular wine yeast strains possessing a wide range of optimized, improved or novel enological characteristics. Traditionally, the species S. cerevisiae and S. bayanus within the Saccharomyces sensu stricto species are considered some of the most important yeast species involved in fermentation processes. However, in the last years, hybrid strains between the species S. cerevisiae, S. bayanus and S. kudriavzevii have been described as yeasts conducting the alcoholic fermentations and some of them are commercially available. Our results indicate that yeasts in the Saccharomyces sensu stricto complex were not affected by low pH or high glucose content in the media; however temperature and ethanol concentration variables appreciably affected their growth. The strains pertaining to S. cerevisiae were able to tolerate high temperature stress, whereas strains within S. bayanus and S. kudriavzevii were better adapted to growth at lower temperatures. Regarding to alcohol tolerance, S. cerevisiae is tolerating alcohol better than S. bayanus or S. kudriavzevii. Surprisingly, the natural hybrids between these species have adapted to growth under ethanol and temperature stress by inheriting competitive traits from one or another parental species. These results open new perspectives in the construction of new hybrid strains with biotechnological interest, as the characteristics of the parents may result in interesting combinations in the hybrids.     

清香风味导向的酿酒酵母Y2的分离鉴定及生物学特性研究

通过嗅觉和气相色谱分析,分离筛选得到一株高产乙酸乙酯的酵母菌株Y2。该酵母菌株在发酵液中28℃培养7 d,产乙酸乙酯量可达653 mg/L,酒精度达10.5%。通过菌落菌体形态观察、生理生化试验、26S rDNA D1/D2区域序列测序和genbank序列比对,初步确定菌株Y2为酿酒酵母。该菌株对发酵环境的耐受性较强,最高耐受温度39℃,pH 2.0,酒精度14%,糖度18%,是实际生产中理想的产香酿酒酵母。利用该菌株发酵的白酒具有清香、糟香、酯香,带酱感,落口酸爽、醇厚、绵柔,乙酸乙酯香突出,可用作清香白酒调香酒。     

无花果内源酵母的筛选及鉴定

为了获得无花果酿酒酵母的优选菌株,从自然发酵的无花果汁中分离纯化,初步筛选出两株酵母菌SUYX-02和SUYX-03。对比研究其在不同温度、pH值、接种量条件下的生长特性并探究其二氧化硫和酒精的耐受性,最终选择了酵母菌SUYX-03作为发酵菌株并测试该菌株的发酵性能。结果表明,该酵母菌的适宜生长温度为30 ℃,适宜pH值为5.5,具有14%vol的酒精耐受性和300 mg/L的二氧化硫耐受性。对该酵母菌进行形态学和生理学特征鉴定以及内转录间隔区（ITS）序列分析,最终鉴定出菌株SUYX-03属于酵母属（Saccharomyces）中的酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）。     

张弓老酒大曲中耐高温酵母菌的分离鉴定及发酵条件优化

为筛选出耐高温的酵母菌,本实验利用传统微生物学分离培养方法,从张弓老酒中高温大曲中共初筛分离出100株酵母菌,进行复筛得到一株能在45 ℃下生长的酵母菌,编号为ZG-3,通过形态学特征观察并结合26S rDNA序列分析确定菌株ZG-3为库德里阿兹威毕赤酵母(Pichia kudriavzevii)。用常规方法对其耐高温和耐乙醇性以及乙醇发酵性能进行测试。研究表明菌株ZG-3的最适生长温度为37 ℃,最高生长温度为45 ℃,乙醇耐受性可达12%,在40 ℃条件下发酵72 h,产酒精4.7% vol。对菌株ZG-3发酵条件进行响应面优化,在最佳发酵下条件,即接种量12%、发酵温度40 ℃、pH为5、葡萄糖浓度140 g/L,发酵72 h,酒精度为5.2% vol。由此可见ZG-3是一株很有应用开发潜力的耐高温耐乙醇的酵母菌。     

冬果梨果酒酵母的筛选及鉴定

以冬果梨作为富集培养基,对野生酵母菌株进行收集、分离,得到980株;采用TTC平板法、耐乙醇性能测定以及产乙醇性能测定共三级筛选,最终筛得一株可耐受18%vol乙醇、乙醇产量达7.79%vol、发酵过程中糖利用率92.75%的菌株L-0301。通过对筛选所得菌株L-0301的形态特征观察、26S rDNA D1/D2区序列分析方法对菌株进行分类鉴定,结果显示,菌株L-0301为酵母亚科酵母属酿酒酵母菌（Saccharomyces cerevisiae）。