漆酶高产菌的筛选及产酶优化

采用愈创木酚初筛平板从干枯的木头中筛选得到一株产漆酶活力较高的菌株SYBC-L3(以下简称L3),在含有愈创木酚的PDA平板上生长时菌落周边出现明显的铁红色变色圈.通过对L3发酵产漆酶的单因素试验及L9(34)正交试验,确定了最适发酵条件,优化后的培养基为:麦芽糖 12 g/L, 豆粕 6 g/L,CuSO4 0.5 g/L,KH2PO4 1 g/L,Na2HPO4 0.2 g/L,MgSO4 ·7H2O 0.5 g/L,MnSO4 0.034 g/L, 愈创木酚0.8 mmol/L,吐温-80 0.5g/L;优化后的培养条件为:接种量10%(V/V),装液量80 mL/250 mL, 起始pH 4,转速200 r/min,温度30 ℃,以DMP为底物在第8天时酶活可达60 130 U/L,比优化前提高42倍.     

产漆酶绿色木霉的筛选、鉴定和产酶条件优化

木质素是稻草秸秆的主要成分之一,要实现稻草秸秆的糖化以达到开发利用的目的,首先要解除木质素的包裹阻碍作用。生物预处理去除木质素因具有温和、低耗和环保等优点而成为研究的热点。采用PDA-愈创木酚法筛选到一株能够高效产漆酶的木霉,鉴定结果为绿色木霉(Trichoderma viride)。对其进行单因素实验优化产纤维素酶发酵条件,最佳产酶发酵条件为:摇床转速120r/min、接种量为6%、pH5.5、培养温度28℃、培养时间3d,在此条件下CMCase、FPA和βG酶活力分别达(2.73±0.08)、(0.95±0.09)、(1.75±0.12)IU/mL。     

白腐菌Pleurotus eryngii-Co007产木质素降解酶条件的优化

木质素降解酶是参与降解木质素的酶类,广泛存在于白腐真菌中。为提高白腐菌Pleurotus eryngii-Co007的产木质素降解酶的活力,研究了该菌株的产酶曲线、发酵参数及培养基组分对其产木质素降解酶的影响。单因素试验结果表明该菌株发酵第8天时发酵液中木质素降解酶酶活最高;较优的发酵参数是pH 5.0~6.0、发酵温度25~27℃,接种量10%~15%,其中pH影响最显著;麦芽糖和有机氮源有利于木质素降解酶的表达。但考虑到酶表达的增加量和生产成本的经济性选择3%的葡萄糖、0.2%酵母粉和0.2%牛肉膏组合氮源;诱导剂中秸杆、Cu2+和吐温80诱导产酶效果明显。     

产漆酶培养基条件的优化

对白腐真菌发酵产漆酶的培养基组成进行优化试验。在单因素试验结果的基础上,进行三因素三水平的响应面分析,通过对试验数据回归分析,获得了二次多元回归方程,预测麸皮、酒石酸铵和吐温-80的优化值,并预测漆酶最高酶活。结果表明:当麸皮、酒石酸铵和吐温-80的优化值分别为11.04,0.10g/L和3.24 mL/L时,漆酶最高酶活可达34.25U/mL,验证实验漆酶实际酶活为36.67U/mL,与预测值十分接近,优化后酶活与比优化前提高了62.98%。     

产漆酶细菌的筛选、鉴定及产酶条件的初步优化

从甘蔗渣滤泥中筛得一株具有漆酶活性的细菌SYBC star X,通过16S r RNA基因序列分析,并结合生理生化实验及形态学观察,鉴定为考克氏菌属(Kocuria);利用液态发酵法研究了碳源、氮源、金属离子对其发酵产漆酶的影响,确定菌株SYBC star X的最优碳源为15 g/Lα-乳糖,最佳氮源为40 g/L大豆蛋白胨,最适铜离子和锰离子的浓度分别为3 mmol/L和0.4 mmol/L。     

利用木质素沉淀物产漆酶的研究

从玉米秸秆的碱处理液中分离木质素沉淀物,进一步用于Coriolus versicolor液态发酵生产漆酶。研究结果表明,木质素沉淀物对漆酶的形成有明显的促进作用,当其添加量为0.6%时,在摇瓶条件下漆酶活力可高达7005.6IU/ml,比对照组的漆酶活力提高了4.04倍。发酵培养基中添加10g/L葡萄糖有利于菌种的前期生长,从而提高漆酶产量。在3.7L发酵罐中进行产酶试验,发酵罐最适通气量为0.75vvm,最适转速为300r/ min,漆酶活力可达到7506.2IU/mL。该试验结果对于降低玉米秸秆碱预处理液的环境污染,促进木质素沉淀物的回收利用以及加速漆酶的规模化生产等均具有重要意义。     

白腐菌预处理木屑产漆酶条件的优化及其糖化评价

对白腐菌固态发酵预处理木屑的工艺条件进行了优化,并对经过白腐菌预处理木屑的糖化效果进行了评价。结果表明,白腐菌固态发酵产漆酶的工艺条件为:1 kg木屑中需添加麦麸120 g,氮酒石酸铵60 g,料水比0.28,微量元素的用量为7 mL/L,培养时间为3 d,白腐菌产漆酶的酶活最高。在最佳工艺条件下,经白腐菌生物预处理的木屑的糖化率可以提高1倍,生物预处理木屑具有一定的应用前景。     

漆酶降解梗丝中木质素工艺条件的优化

采用3因素5水平的正交实验方法研究了不同酶解时间、酶解温度和漆酶用量对梗丝中木质素降解率的影响,同时对漆酶处理前后梗丝的化学成分和填充值进行测量,结果表明：不同酶解时间、酶解温度和漆酶用量极显著影响着木质素的降解率。使用漆酶降解梗丝中木质素的最佳参数是：酶解时间4 h,酶解温度50 ℃,漆酶用量10.0 ?滋L/g。在该参数条件下,梗丝中的木质素降解效果最好,降解率高达47.3%。使用漆酶处理梗丝后,除了木质素之外,梗丝的其它化学成分含量基本不发生变化,填充值也基本没有影响。在最优的参数条件下,使用漆酶能在不降低梗丝原有品质的前提下有效的降解梗丝中的木质素,提高梗丝的品质和可用性。     

白腐菌Trametes hirsuta BYBF产漆酶发酵条件的优化

本实验对白腐菌Trametes hirsuta BYBF产漆酶的发酵条件进行了研究。结果表明,Trametes hirsuta BYBF的最佳培养条件为:培养基初始pH为6.0,培养温度为28℃,碳源为蔗糖,氮源为硝酸铵和酒石酸铵的组合,三角瓶装液量为200/500mL,振荡培养14天左右,酶活达到最大值,为1.37IU/mL。     

响应面法优化Coriolus versicolor ZZH-2产漆酶培养基

采用响应面法对Coriolus versicolor ZZH-2产漆酶培养基进行优化,首先用Plackett-Burman（PB）法筛选出3个影响较大的重要因素,分别为酵母膏、羧甲基纤维素钠和L-天冬氨酸。在此基础上,用最陡爬坡实验逼近最大响应区域,并利用中心组合实验以及响应面分析确定了主要影响因素的最佳条件,即酵母膏13.82g/L、羧甲基纤维素钠13.29g/L和L-天冬氨酸1.44g/L,在优化培养基后漆酶酶活达到9693U/mL,比优化前提高了1.7倍,其实验值与理论值基本相符。      

产纤维素酶食用菌筛选及其培养基的优化

利用刚果红杯碟快速筛选法对大白菇、金针菇、香菇、竹荪、磷盖红菇、杏鲍菇6种食用菌产纤维素酶能力进行比较,同时对高产纤维素酶食用菌的培养基最佳碳源和配方进行筛选、优化。结果表明:磷盖红菇出现透明圈最大,直径为20mm;对比羧甲基纤维素钠(CMC-Na)、豆渣、秸秆粉、葡萄糖4种碳源,豆渣对磷盖红菇产纤维素酶有促进作用,优化培养基为豆渣60g/L、硫酸铵2.0g/L、吐温-80 1.5mL/L、pH5.4。     

降解木素白腐菌产漆酶的研究进展

综述了近年来国内外对于白腐菌产漆酶的研究进展,对液体和固体发酵提高漆酶产量的技术和方法进行了讨论和评述,并对今后的研究工作提出了展望。     

γ-氨基丁酸产生菌的筛选及培养基优化

采用纸层析法对南京地区多个不同场所采集的土样进行了菌种分离纯化,筛选到一株产γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid,GABA）的菌株X-1,经形态特征与16S rDNA序列分析鉴定为巨大芽孢杆菌。通过单因素和正交试验对其发酵培养基进行优化,得到最佳培养基成分为葡萄糖30.0 g/L、蛋白胨30.0 g/L、K2HPO4 0.6 g/L、磷酸吡哆醇0.3 g/L、L-谷氨酸钠10.0 g/L、NaNO3 3.0 g/L、MgSO4·7H2O 0.5 g/L、FeSO4·7H2O 0.01 g/L。在此条件下,GABA浓度可达21.57 mmol/L,比优化前GABA浓度提高了3.83 倍。     

浆水中产香酵母菌菌株的筛选及其增殖培养基优化

以甘肃传统酿制的浆水为材料,采用经典平板分离法对浆水中的酵母菌进行分离纯化,通过感官评定、性能测定及气相色谱-质谱法半定量法分析筛选产香性能优良的酵母菌菌株,对其进行生理生化及分子生物学鉴定,并采用单因素结合Design-Expert设计响应面试验优化了该菌株的增殖培养基。结果表明,从浆水中分离出16 株酵母菌菌株,并成功筛选出了1?株产香性能优良的酵母菌菌株Y16,经鉴定为异常汉逊酵母（Hansenula anomala）。优化的培养基增殖配方为：10?°Be′麦芽汁,其中最佳的营养物添加量分别为葡萄糖11.0?g/L、牛肉膏2.3?g/L、KH2PO4?0.8?g/L。在该条件下,细胞浓度可达到8.75×108?个/mL,是初始麦芽汁发酵培养基细胞浓度的4?倍多;乙酸乙酯的产量达到256.35?μg/mL,比初始发酵培养基增加了25.39%,柠檬烯的产量达到0.083?μg/mL,比优化前增加了31.75%,该菌株增香效果明显,可为浆水发酵直投式增香菌剂的开发提供菌株来源和技术参考。     

产红曲色素菌株的筛选及发酵培养基优化

从市售红曲米中分离得到1株高产红曲色素的红曲霉菌株M02,利用单因素实验和正交实验确定了M02菌株的最适发酵培养基。结果表明,最适发酵培养基的组成为大米粉5%,硝酸钠0.3%,KH2PO40.105%,K2HPO40.045%,MgSO40.2%。在此培养基条件下,调整初始pH为5.0,发酵温度为30℃,转速为180r/min摇床发酵,发酵5天后色价达到72.8U/mL。     

功能性双歧杆菌培养基的筛选与优化

对常用4种双歧杆菌培养基进行筛选,确定出产双歧杆菌高的基础培养基,采用正交试验通过改变碳源、添加低聚果糖pH的内源调节优化筛选出基础培养基.最佳培养基为在筛选出的基础培养基中加0.5%低聚果糖和1%碳酸钙.最佳培养基较筛选出的基础培养基双歧杆菌活菌数提高约8.1倍,培养时间缩短4h.双歧杆菌利用最佳培养基在37℃下厌氧培养20h,菌数可达8.9 × 109CFU/ml.     

木素降解菌——白腐菌的筛选

真菌中的白腐菌(white-rotfungi),是自然界中唯一一类具有独立降解木素能力的微生物。本研究通过Bavendamm反应和选择性培养基从自然环境中筛选白腐菌的纯菌种。15天左右培养得到子实体,对木素的降解能力在12天可达到74%左右。     

食（药）用蕈菌中高抑菌活性菌株筛选及培养基优化

对4个不同属24株食(药)用蕈菌对11株指示菌抑菌活性进行研究,通过初筛模型,从中筛选出3株功能菌,6株指示菌。对初筛菌株进一步复筛,确定功能菌株H2与枯草芽孢杆菌、沙门氏菌、蜡状芽孢杆菌为培养基优化的出发菌株和指示菌。通过响应面分析优化培养基配方,结果表明,当麦芽糖40.9g/L、蛋白胨11.2g/L、KH2PO4 2.1g/L、MgSO4 ·7H2O 1.1g/L时,H2对枯草芽孢杆菌、沙门氏菌、蜡状芽孢杆菌的抑菌活性均较理想,其抑菌圈半径分别达到3.513、4.610、8.800mm。     

琼脂糖酶产生菌的筛选和培养基优化

从太岁中筛选得到一株初始产酶较高的琼脂糖酶产生菌,经形态和分子生物学分析方法鉴定之后,认定其属于类芽孢杆菌属(Paenibacillus),命名为Paenibacillus sp.P1(简称为P1).P1为革兰氏阴性菌,短杆状细胞,对明胶和纤维素都没有水解活性.研究该菌的生长及产酶过程发现,该菌株最适发酵产酶时长是40...