可视化SRCA技术检测转基因大豆及其制品的研究

为保障转基因大豆的可追溯性以及消费者的知情权和选择权,开发快速、灵敏、准确的转基因大豆检测方法显得尤为重要.文章建立了一种用于检测转基因大豆及其制品的可视化跨越式滚环等温扩增(Saltatory rolling circle amplification,SRCA)技术.根据抗除草剂草甘膦CP4-EPSPS基因设计引物,...     

转基因大豆DNA检测芯片的研究

为提高对转基因大豆的监督检测能力，研制了转基因大豆DNA检测芯片。根据转基因大豆(Roundup Ready)中所转入的外源基因，选择CaMV35S启动子、NOS终止子、NOSIEPSPE基因和内源Lectin基因设计特异性引物，采用多重PCR法对待测样品进行扩增，通过缺口平移法合成DIGdUTP标记杂交探针，并制备基因芯片。在对PCR反应和扩增产物与芯片杂交条件进行优化的同时，比较了芯片检测的特异性和重复性，并对检测的灵敏度进行测试。结果表明，该方法具有较好的特异性和重复性，检测灵敏度可达0．5％，由于采用了多重PCR技术，一次可同时检测多个基因，提高了检测的准确性和效率。     

可视化膜芯片技术检测常见食源性过敏原成分

目的 建立包括鱼、虾、鸡、鸭、花生、核桃、小麦以及大豆过敏原成分的基因膜芯片技术, 实现对这几种食源性过敏原的同步可视化检测。方法 针对常见食源性过敏物质的成分特异性基因或者过敏原蛋白基因设计特异性的带生物素标记的引物和探针。采用反向斑点杂交(reversedot blot, RDB)结合多重聚合酶链式反应(multiplex polymerase chain reaction, MPCR)技术, 最终通过化学显色直观显示检测结果, 实现对多种食源性过敏原的同步可视化检测。结果 所建立的可视化基因膜芯片方法准确性强, 通过单目标物以及多目标物特异性实验, 显示本方法仅对鱼、虾、花生、核桃、大豆等靶标食源性过敏原有特异性反应, 非靶标物检测均为阴性; 通过制备不同质量浓度比的模拟样品考核方法的灵敏度, 经检测, 方法检测灵敏度可达0.1%(质量分数)。结论 所建立的方法可达到可视化、快速、准确地鉴别食品中鱼、虾、花生、核桃、大豆等常见食源性过敏原。     

转基因大豆检测方法的研究进展

综述了转基因大豆中的蛋白质和核酸的检测技术研究进展,对比各种方法的优缺点,为后续深入研究提供理论基础。     

可视芯片检测大豆、水稻和玉米中的转基因成分

本研究选取9种常见转基因食品外源基因,设计了引物对与探针,并制备可视芯片。通过PCR对样品核酸进行扩增,将扩增产物与固定于可视芯片的特异性探针进行杂交分析,验证了芯片的特异性和重复性,并对检测芯片灵敏度进行测试。该方法可以一次检测出5种的常见转基因植物,且实验结果表明该方法高效、准确、简便、高通量、实用性强,灵敏度可达0.1%,并摆脱了基因芯片在杂交结果分析阶段对荧光扫描仪的依赖,杂交结果明显直观。     

大豆异黄酮中转基因大豆成分检测研究

利用含有35S启动子、NOS终止子片段的质粒,确定相应检测方法的灵敏度为15个拷贝和150个拷贝;采用扩增CaMV35S启动子的2对引物、扩增NOS终止子的2对引物、扩增EPSPS目的基因的1对引物,对大豆异黄酮样品中转基因成分进行了检测,结果均扩增出了特异性片段,且测序结果正确。     

转基因番茄DNA检测芯片的研究

自19世纪70年代世界上第一例转基因植物问世以来，它对人类健康及环境的安全性问题，受到了全世界广泛的关注：本研究根据转基因番茄（Zeneea）中所转入的外源基因，选择CaMV35S启动子、NOS终止子、PG／NOS基因和内源PG基因设计特异性引物，采用多重PCR法对待测样品进行扩增，通过缺口平移法合成DIG—dUTP标记杂交探针，并制备基因芯片。在对PCR反应和扩增产物与芯片杂交条件进行优化的同时，比较了芯片检测的特异性和重复性，并对检测的灵敏度进行测试。结果表明，该方法具有较好的特异性和重复性，检测灵敏度可达0．5％，由于采用了多重PCR技术一次可同时检测多个基因，提高了检测的；隹确性和效率。     

转基因大豆及其制品的安全性和检测研究现状

转基因大豆及其制品日益增多,已经直接或间接地成为人类消费的食品,进入人们的食物链.转基因大豆及其制品对人体健康及生态环境的影响越来越引起人们关注.在查阅文献的基础上,对转基因大豆及其制品的安全性、检测现状进行了概述,以期为人们在这方面研究和认识提供一些借鉴.     

转基因大豆及其制品的安全性和检测研究现状

转基因大豆及其制品日益增多，已经直接或间接地成为人类消费的食品，进入人们的食物链。转基因大豆及其制品对人体健康及生态环境的影响越来越引起人们关注，阐述了转基因大豆及其制品的安全性，并对其检测现状进行了概述。     

利用蛋白质SDS-PAGE电泳方法检测转基因大豆的初步研究

为建立利用蛋白质检测转基因大豆的较稳定的新方法,采用SDS-PAGE蛋白质电泳方法时转基因大豆和非转基因大豆进行检测,初步研究发现转基因大豆中大约45 ku蛋白带的表达量明显强于非转基因大豆中相对应的蛋白带,通过固定转基因大豆的上样量,逐渐增加非转基因大豆的上样量进一步验证了结果.以国内不同品种的非转基因大豆进行SDS-PAGE蛋白电泳检测,初步排除了结果偶然性的产生.     

多品系混杂转基因大豆样品中复合品系的检测

摘要：目的 确认一份多品系混杂转基因大豆样品中是否含有复合性状转基因大豆。方法 采用实时荧光定性PCR方法对实验室留存的一份转基因初筛阳性大豆样品进行品系筛查检测,后分别采用单粒多靶点筛查检测和清洗后单粒多靶点筛查检测方法进行复合性状品系的确认。结果 经鉴定,该大豆样品中混杂了5种转基因大豆品系,检出复合性状转基因大豆为MON87708×MON89788品系,该品系为中国未经批准进口的转基因大豆品系。结论 鉴于目前缺乏完整的检测技术体系和技术标准,这种多品系混杂样品中掺杂未批准复合性状品系的行为非常具有隐蔽性和欺骗性,国内的农业安全监管部门和海关检疫部门都应该对此高度重视。     

豆腐中转基因大豆成分的检测

目的探索适合豆腐样品的DNA抽提方法并采用实时荧光聚合酶链反应(PCR)技术对豆腐试样中的转基因大豆成分进行检测。方法分别采用CTAB和SDS配制抽提缓冲液提取18个豆腐样品中的DNA,针对转基因大豆都含有大豆内源基因lectin及共同元件CaMV35S启动子、nos终止子及epsps基因进行实时荧光PCR扩增。结果 SDS法比CTAB法提取的豆腐DNA质量更好;18个豆腐样品均检测到了lectin,其中有2个样品检测到了CaMV35S启动子的荧光信号,4个样品检测到了nos终止子的荧光信号,所有样品均未扩增出epsps基因。结论 SDS法比CTAB法更适合于抽提豆腐样品的DNA,提取到的DNA可用于实时荧光PCR法检测豆腐内源基因和外源基因。     

无机膜超滤法制备大豆异黄酮的研究

用80%乙醇水溶液提取大豆异黄酮,比较孔径为50 nm和10 nm的无机陶瓷膜在0.13MPa下超滤大豆乙醇提取液的效果,制备较高纯度的大豆异黄酮。超滤结果表明,超滤可以脱除69.4%胶质,66%蛋白质;滤过液色泽变浅,澄清度显著提高;浸提液中大豆异黄酮的组成及含量在超滤前后没有明显变化。冷冻干燥得到大豆异黄酮,纯度可达23.6%。     

大豆乳清废水膜过程生产低聚糖工艺研究

主要探讨了乳清废水膜过程生产低聚糖等产品工艺中各级膜滤过程和其他流程试验,采用正交试验确定了低聚糖液的活性炭最佳脱色条件:脱色时间30 min,加炭量2.0%,脱色温度70℃,pH4.0,同时还对脱色后的低聚糖液的树脂脱盐试验进行了研究.乳清废水经过该工艺过程,最终形成了大豆低聚糖产品,超过了主产品的效益,水质接近纯净水并回用至工序中.     

无机陶瓷膜对大豆混合油净化的研究

通过无机陶瓷膜进行大豆混合油净化的研究,结果表明:选择30~100 nm无机陶瓷膜,在大豆混合油体积分数27.5%、温度43~50℃、真空0.07 MPa条件下,膜通量为562~1 178 L/(m2·h),除杂效果明显,除杂率达100%;100 nm孔径的无机陶瓷膜反洗通量衰竭较快,并有堵塞现象,不宜用于大豆混合油的净化;30 nm孔径的无机陶瓷膜与50 nm孔径的相比,膜通量小,投资增加,50 nm孔径的无机陶瓷膜过滤具有较合适的效果。     

16种转基因大豆品系的实时荧光PCR法筛查

采用实时荧光PCR法,对河北主要进口转基因大豆口岸秦皇岛港及京唐港的45批次转基因大豆进行了16种转基因大豆品系筛查。结果发现,在45批样品中均检测到GTS-40-3-2品系;30批样品检测到MON89788品系,占所检测样品66.7%;14批样品检测到A2704-12品系,占所检测样品31.1%;2批样品检测到MON87701品系,占所检测样品4.4%;1批样品检测到MON87701×MON89788品系,占所检测样品2.2%;其他品系在所有45批样品中均未检测到。通过对河北主要进口口岸转基因大豆品系方面摸底筛查,为我国转基因大豆品系进口管控提供了数据支持。     

环介导等温扩增法检测食品过敏原大豆成分

目的 建立食品过敏原大豆成分的环介导等温扩增(LAMP)分析方法。方法 根据大豆的内源管家基因Lectin基因设计6条过敏原大豆的特异性引物(两条内引物, 两条外引物和两条环引物), 建立LAMP检测方法。结果 环介导等温扩增法在63 ℃条件下, 40 min内可检出过敏原大豆成分, 该方法能够有效对大豆成分进行快速检测, 具有较强的特异性, 灵敏度可达0.01%(w/w)大豆粉。结论 该方法特异性强, 灵敏度高, 可以快速、准确检测食品中过敏原大豆成分。     

自动微流控膜芯片法检测副溶血性弧菌

目的 建立自动微流控膜芯片检测法副溶血性弧菌的方法.方法 利用自动微流控膜芯片对副溶血性弧菌进行检测,并采用行业标准SN/T 2424-2010实时荧光PCR方法进行比对验证.结果 该技术具备副溶血性弧菌的检测能力,验证实际样品的检测结果与行业标准荧光PCR法一致.结论 该方法快速、准确、直观,适合测定副溶血性弧菌.     

无机陶瓷膜超滤大豆混合油脱胶的研究

用截留分子量1万的无机陶瓷膜在45℃、0.15 MPa下超滤大豆混合油,研究了膜通量与浓缩比的关系.超滤脱胶结果表明,超滤可以脱除95.78%的大豆磷脂,同时超滤脱胶油的色泽和毛油色泽相比,明显变浅,但是酸值升高.超滤还可以截留大豆油中的Ca、Mg、Fe和Cu等金属元素.