仿刺参不同部位ACE抑制活性分析及活性肽制备工艺优化

本文对仿刺参具有高降血压活性部位进行筛选并优化其活性肽制备工艺。采用酶解法对仿刺参不同部位(体壁、肠、卵)进行水解,以血管紧张素转换酶(Angiotensin converting enzyme,ACE)抑制率为指标筛选最适蛋白酶,通过对各酶解物ACE抑制率的半数抑制浓度(IC₅₀)测定比较筛选出最优抑制活性部位。经单因素实验与响应面试验优化确定活性肽最佳酶解制备条件,对蛋白酶解物进行分子量测定确定其分布范围,经超滤膜分离后对不同组分的ACE抑制活性分析。结果显示,选用碱性蛋白酶为最适水解酶,体壁、肠、卵各蛋白酶解物的ACE抑制率的IC50分别为1.11、4.02、0.65 mg/mL,仿刺参卵具有更好的ACE抑制效果,为最优抑制活性部位。其最佳的酶解制备工艺参数为：酶解时间5 h,加酶量3.5 U/mg,酶解温度65.26℃,底物浓度3.51%,酶解pH9.02,在该条件下仿刺参卵酶解产物的ACE抑制率为80.65%±0.52%,与预测值接近。蛋白酶解产物的分子量集中分布在3000 Da以下,占总含量的98.37%,其中1000～3000 Da占比9.50%,小...     

超声对木瓜蛋白酶酶解产物分子量分布的影响

本文探讨了超声对木瓜蛋白酶酶解产物分子量大小及分布的影响。以牛血清白蛋白为底物,采用高效液相色谱法测定游离酶和固定化酶在超声和非超声作用下的酶解产物肽分子量大小及分布情况。结果表明,游离酶和固定化酶在超声和非超声条件下,酶解产物肽分子量大小及分布有一定的差异。非超声条件下,游离木瓜蛋白酶酶解效果明显比固定化酶酶解效果要好。比较超声条件下游离木瓜蛋白酶和固定化木瓜蛋白酶酶解产物分子量大小及分布情况发现:游离木瓜蛋白酶超声条件下酶解肽主要分布在180~1000 Da、1000~5000 Da这两个范围内,而固定化木瓜蛋白酶超声条件下酶解肽在<180 Da所占比例比较大。      

木瓜蛋白酶水解鸡肉蛋白及其产物氨基酸分析研究

本文采用木瓜蛋白酶水解鸡肉蛋白研究其降解规律及酶解产物氨基酸组成。研究表明:热处理鸡肉蛋白不利于酶解;整个酶解过程中,可溶性氮、氨态氮含量呈增加趋势,但4h后增势变缓,而肽含量在水解8h达到最大值;肽分子量分布图显示大部分不溶性蛋白和分子量大于10000Da肽段在酶解4h后已经变为可溶性多肽和氨基酸,分子量在5000～10000Da间肽段酶解24h后仍大量存在,分子量在3000～5000Da间以及小于3000Da的肽占总肽量比值在整个酶解过程中呈增加趋势。与原料蛋白氨基酸组成比较表明采用木瓜蛋白酶水解鸡肉蛋白能显著提高其营养价值。     

酶解法制备草鱼皮蛋白水解物增殖嗜热链球菌

嗜热链球菌被认为是一种多功能益生菌,将Neutrase 0.8L、Protease P “Amano”6、ProteAX、Alcalase 2.4LFG和风味中性蛋白酶5 种草鱼皮蛋白水解物作为培养嗜热链球菌的氮源,以水解物对嗜热链球菌的增殖效果为评价指标,选择最佳水解用酶,并利用正交试验优化酶解条件。结果表明,5 种微生物蛋白酶中,Neutrase 0.8L是水解草鱼皮蛋白的最佳用酶,最佳的酶解条件为：加酶量1%、酶解时间80 min、起始pH 6.5、料水比1∶2（m/V）。利用Neutrase 0.8L酶解法制备得到的富含胶原蛋白肽的草鱼皮蛋白水解物,是一种培养嗜热链球菌的理想氮源。     

酪蛋白抗氧化肽制备工艺及酶解产物特性研究

采用不同蛋白酶酶解酪蛋白,确定AS1,398中性蛋白酶是酶解酪蛋白制备抗氧化肽的优良酶源。通过单因素和响应面回归分析,得到AS1,398中性蛋白酶酶解酪蛋白的优化工艺条件为:底物浓度30mg/mL,水解时间90min,pH7.2,酶底比为2%（w/w）,温度为50℃。优化酶解条件下,10mg/mL酶解产物的DPPH自由基清除率为80.43%,IC₅₀为3.96mg/mL,显现出良好的抗氧化性能。高效液相排阻色谱（HPSEC）分析表明,优化条件下产物主要是3500Da以下的一些短肽。      

乳清蛋白酶解物促嗜酸乳杆菌增殖作用研究

利用胃蛋白酶水解乳清蛋白,获得酶解产物的优化工艺条件是pH 值为2.2,水解温度为65℃,底物质量浓度为2g/100mL,酶与底物比为7%,其蛋白水解度为12.51%。乳清蛋白水解物与经过超滤和凝胶过滤后的分离物对嗜酸乳杆菌B 有较好的增殖作用,其中分子量1000D 以下的酶解产物增殖效果最为显著。质谱分析证实该段水解产物是分子量集中在213.2～956.9D 之间的寡肽和氨基酸复合物,可使嗜酸乳杆菌B 活细胞数量提高一个对数级。显然,应用廉价乳清蛋白水解产物作为培养基质可以提高嗜酸乳杆菌B 的细胞数量。     

基于BP人工神经网络的酿酒酵母发酵培养基优化及其水解物对真菌毒素吸附研究

真菌毒素是霉菌产生的一类剧毒次级代谢产物，严重威胁着粮油食品和饲料的质量安全。如何阻控真菌毒素污染和危害，保障人民消费健康是当前急需。酿酒酵母的水解物甘露聚糖、葡聚糖等在动物肠道内可吸附真菌毒素从而减少危害。系统研究一株酿酒酵母生物量的优化及其水解物对不同真菌毒素的吸附效果。在摇瓶水平上，通过单因素实验初步确定了培养基配方，并通过多因素实验设计和BP人工神经网络建模、遗传算法寻优对培养基进行了优化。单因素实验得到最佳培养基组成为：蔗糖、酵母粉、KH₂PO₄、MgSO₄质量浓度分别为17.5、10.0、0.1、0.6 g/100 mL,在此条件下，OD₆₀₀达到32.78。通过BP人工神经网络建模，结合遗传算法寻优得到最佳培养基为：蔗糖、酵母粉、KH₂PO₄ 、MgSO₄质量浓度分别为18.9、8.9、0.05、0.8g/100 mL,预测的OD₆₀₀为38.9,经验证与该配方下实验所得发酵液OD_600<...     

脱脂牛乳体系中美拉德反应产物对乳酸菌的增殖作用

为探究脱脂牛乳体系(skim milk system, SMS)中美拉德反应产物(Maillard reaction products, MRPs)对乳酸菌体外增殖的影响。以脱脂牛乳为原料,通过单因素和响应面试验优化SMS-MRPs的制备工艺条件,研究不同浓度的SMS-MRPs对副干酪乳杆菌L9、鼠李糖乳杆菌G5、罗伊氏乳杆菌G8和嗜热链球菌Q2这4株乳酸菌生长曲线、活菌数、菌体干重和产酸能力的影响。结果表明,当葡萄糖质量浓度60.0 g/L、反应时间120 min、反应温度95℃时,SMS-MRPs积累最多。SMS-MRPs质量浓度为15.0 g/L时,4株菌的OD₆₅₀峰值较对照组均显著提高(P<0.05),副干酪乳杆菌L9的活菌数为1.076×10⁹ CFU/mL;鼠李糖乳杆菌G5的活菌数为1.240×10⁹ CFU/mL;罗伊氏乳杆菌G8的活菌数为1.313×10⁹ CFU/mL;嗜热链球菌Q2的活菌数为1.386×10⁹ CFU/mL。此外,SMS-MRPs处理...     

凤尾鱼酶解产物脱腥脱色工艺优化

凤尾鱼酶解物(AFH)通过大孔树脂吸附处理后,发现DA201-C型大孔树脂为最佳吸附材料。在单因素实验基础上,以腥味、色泽和回收率为评价指标,运用正交实验L₉(3⁴)优化了DA201-C型大孔树脂对凤尾鱼酶解产物脱腥脱色工艺,得到最佳条件为:pH6,大孔树脂量5%,脱腥脱色时间1.5 h,以及温度25℃,该条件下感官评定综合评分为84.36。同时,研究表明脱腥脱色后,凤尾鱼酶解产物中牛磺酸、丙氨酸、甲硫氨酸和异亮氨酸呈显著性降低(P<0.01),挥发性物质成分中醛和含氮类化合物相对含量呈显著性降低。     

条斑紫菜蛋白酶解物降血压活性

研究了以条斑紫菜为原料,采用木瓜蛋白酶制备紫菜蛋白活性寡肽,以ACE抑制率为评价指标,研究不同水解条件下酶解液的降血压活性,优化酶解工艺条件并测定酶解物的分子量。优化后的木瓜蛋白酶酶解工艺条件为pH7.5,温度50℃,底物浓度30 mg/mL,酶添加量600 U/g,在此条件下,水解4 h的酶解产物抑制活性达30%以上,ACE抑制肽的半抑制浓度IC50值为4.48 mg/mL。将制备的酶解液进行层析分析,测得具有降血压活性的紫菜蛋白酶解产物是相对分子质量小于2 000的活性肽。     

复合酶制备鱼蒸煮液水解肽及其抗氧化活性研究

目的:研究鳀鱼蒸煮液的最佳酶解工艺条件,并分析所制备水解肽的分子量分布和抗氧化特性。方法:以三氯乙酸氮溶解指数(Trichloroacetic acid-nitrogen soluble index,TCA-NSI)为酶解效率的评价指标,在单因素实验基础上,运用中心组合设计法优化水解肽的制备工艺,并对酶解产物的分子量分布及抗氧化活性进行分析。结果:鳀鱼蒸煮液的最佳酶解条件为酶解时间45 min、酶解温度54.5 ℃、酶解pH8.2、碱性蛋白酶与中性蛋白酶比例1:1,在此条件下TCA-NSI可达76.51%。所制备的水解肽中分子量低于1500 Da的多肽含量可达81.941%。水解肽对DPPH自由基、羟自由基和超氧阴离子自由基清除率的IC₅₀分别为2.45、1.37和3.45 mg/mL,表明其具有较强的抗氧化活性。结论:采用复合酶法可高效酶解鳀鱼蒸煮液,并获得具有较强抗氧化活性的水解肽,可为鳀鱼蒸煮液高值化利用及活性肽产品开发提供理论依据。     

海参体壁蛋白ACE抑制肽酶解工艺及产物分子量分布研究

以血管紧张素转化酶(ACE)抑制率和水解度为指标,筛选出适合海参体壁蛋白水解的酶。采用单因素和响应面法优化最优酶的水解条件,确定其最佳水解工艺,进而采用HPLC法探讨酶解产物的分子量分布。结果表明:中性蛋白酶在50℃、p H7.5、酶量3000 U/g、酶解5 h条件下,所得酶解产物的ACE抑制率最高,达到56.5%。此条件下酶解产物经HPLC分析,200~1000 Da(2~10肽)的海参多肽占44.1%。      

酶法制备大豆肽的相对分子量分布及降压作用研究

目的:为了研究双酶复合酶解大豆分离蛋白制备大豆肽的相对分子量分布及活性片段对实验性高血压大鼠的降压效果。方法:通过单因素实验优选,采取正交实验优化复合酶的酶解工艺,以酶解液对血管紧张素转换酶(ACE)抑制率为指标优选最佳工艺;通过超滤、纳滤后得到最佳分子量片段,应用左硝基精氨酸(L-NNA)诱导大鼠高血压模型,分别给予不同剂量的活性片段进行实验。结果:双酶复合酶解的最佳条件为:在料液比为1:20 g/mL的情况下,酶解温度50℃,酶底比3.0%,酶解pH7.0条件下先用菠萝蛋白酶酶解2 h后,再以酶底比4.0%加入胰蛋白酶,控制温度为40℃、酶解pH为8.0条件下酶解4 h,大豆分离蛋白的水解度35.31%。经过高效液相对酶解液的相对分子量分布得出,大豆分离蛋白原液含有的蛋白质及多肽的相对分子质量主要区间在5000~1.0×10⁵ Da,在双酶复合酶解下,酶解液的蛋白质及多肽的相对分子质量主要区间均在500~4000 Da;通过超滤得出最佳活性片段为1000~3000 Da,药理实验表明,与模型对照组相比各组血压均有降低,且大豆肽剂量组有显著性差异(p<0.05);其中大豆肽高剂量组和卡托普利组相当。结论:双酶复合酶解制备的大豆肽相对分子量较小,活性片段对高血压大鼠模型降压作用显著。     

青鱼肉活性肽的制备及其抗肿瘤活性研究

以青鱼肉为原料,经二步酶解、凝胶色谱分离纯化制备抗氧化和抗肿瘤活性肽。首先以抗氧化活性和水解度为评价指标,采用单因素和正交试验优化青鱼肉活性肽的制备工艺;然后采用凝胶色谱进行分离纯化,得到不同分子质量多肽组分并分析其氨基酸组成、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除能力和抗肿瘤活性。结果表明,二步酶解青鱼肉的最优酶解组合为碱性蛋白酶-复合蛋白酶,最佳制备工艺为:pH 8.00、酶解温度50℃、料液比2∶10(g∶mL)、酶添加量6000 U/g、酶解时间3 h,在此条件的二步酶解物清除DPPH自由基的半抑制浓度(half inhibiting concentration,IC 50)为9.52 mg/mL;经Sephadex G-15分离得到5个肽组分,其分子质量范围为130~1397 Da;抗氧化实验表明,组分IV具有最强的DPPH自由基清除能力,其IC ₅₀为3.17 mg/mL,为二步水解物的3倍。细胞增殖抑制实验发现,10 mg/mL组分IV对HepG 2细胞抑制率为92.54%,表明青鱼肉活性肽同时具有抗氧化和抗肿癌活性。     

响应面法优化辣木籽降糖肽的酶法制备工艺及其体外活性评价

为提升辣木籽资源利用度,采用酶法制备辣木籽降糖肽。以蛋白水解度和α-葡萄糖苷酶抑制率为指标,通过单因素实验筛选和响应面法优化最佳的酶解时间、液料比、酶解pH、酶添加量和酶解温度,通过超滤粗分离酶解液制备分子量＜3 kDa的降糖肽,并通过MTT法分析其对人肝癌细胞（HepG2细胞）的抑制作用。结果表明,酶法制备辣木籽降糖肽的最佳酶解时间为4.6 h、液料比40.5:1、pH为8.3、酶添加量5.5%、温度55 ℃,该条件下酶解产物的α-葡萄糖苷酶抑制率为23.62%±0.14%。超滤组分中分子量<3 kDa组分的α-葡萄糖苷酶抑制率为IC₅₀值为5.56 mg/mL,当其质量浓度为300 μg/mL时,作用于HepG2细胞48 h后能显著抑制HepG2细胞的增殖（P<0.05）。研究可为辣木籽降糖肽的进一步分离纯化奠定基础。     

福建养殖仿刺参抗氧化多肽的酶解工艺优化及其对过氧化氢诱导的血管内皮细胞EA.hy926损伤的保护作用

目的:优化仿刺参抗氧化多肽的酶解工艺,并研究其对过氧化氢(hydrogen peroxide,H₂O₂)诱导的人脐静脉内皮细胞株EA.hy926损伤的保护效应。方法:以酶解产物的水解度、体外DPPH自由基清除率为指标,筛选出最适蛋白酶;在单因素实验基础上,选取温度、加酶量、pH作为影响因子,以体外DPPH自由基清除率为响应值,结合响应面试验优化酶解工艺条件;进一步探讨酶解多肽体外抗氧化活性。以MTS法检测低、中、高剂量组的仿刺参抗氧化多肽对H₂O₂诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用,以MDA含量、SOD活力测定细胞氧化及抗氧化水平。结果:动物蛋白水解酶为最适蛋白酶,酶解工艺优化条件为:料液比1:20 g/mL、酶解时间2 h、酶解温度50℃、加酶量7000 U/g、pH7.5,该条件下制备的仿刺参多肽体外DPPH自由基清除率为68.81%,与模型预测值(68.35%),相对误差为1%,回归模型可靠。酶解多肽对DPPH自由基、羟自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(O₂^-·)和ABTS自由基(ABTS⁺·)的半数抑制浓度IC₅₀分别是9.01、0.63、10.89和20.53 mg/mL,说明其具有较好的体外抗氧化活性。选取200 μmol/L浓度H₂O₂建立细胞损伤模型,与H₂O₂组相比,中、高剂量组仿刺参抗氧化多肽能明显抑制H₂O₂诱导的血管内皮细胞氧化损伤,降低MDA含量,提高SOD活力。结论:采用动物蛋白水解酶酶解优化工艺制备的仿刺参抗氧化多肽对人脐静脉内皮细胞EA.hy926具有显著的保护作用并呈显著的剂量-效应关系。     

响应面法优化秋刀鱼酶解制备抗氧化活性肽的工艺

采用酶解法从秋刀鱼肌肉中提取抗氧化活性肽,以水解度(DH)、TCA-可溶性肽含量、DPPH自由基清除率、Fe3+还原力、·OH清除率以及O2?·清除率为指标,从六种商业用酶中(中性蛋白酶、碱性蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、胰蛋白酶)筛选出最适蛋白酶.以料液比、酶添加量、酶解时间、温度、pH五个因素进行单因...     

世界大洋性鱿钓渔业研究评述

为实现鱿鱼加工下脚料鱿鱼皮的高值化利用,本研究采用酶法制备鱿鱼皮蛋白肽。以多肽浓度和三氯乙酸可溶性氮指数（Trichloroacetic acid-nitrogen soluble index,TCA-NSI）为评价指标,采用单因素和响应面试验优化酶解工艺参数,并对所制备蛋白肽的氨基酸组成、分子量分布、蛋白肽序列、抗氧化活性及其体外模拟消化特性进行表征。结果表明,最佳酶解工艺条件为酶解温度43.50 ℃、酶解时间100 min、酶解pH7.50、胰蛋白酶与碱性蛋白酶比例2:1、加酶量4000 U/g,在此条件下其TCA-NSI可达89.02%±0.66%。所制备的鱿鱼皮蛋白肽其氨基酸组成均衡,必需氨基酸指数（Essential amino acid index,EAAI）可达0.90。此外,鱿鱼皮蛋白肽含有43个多肽序列,其中38个肽段的分子质量低于1800 Da,其DPPH自由基、ABTS⁺自由基和羟自由基清除率的IC₅₀分别为0.61、0.28和1.95 mg/mL,且经体外模拟胃肠消化后仍能维持较好的抗氧化活性。本研究结果为鱿鱼加工下脚料的开发利用和精深加工提供了理论依据。

     

阿胶低聚肽的成分分析及其抗氧化活性

采用复合酶解法制备阿胶低聚肽,分析阿胶低聚肽的营养成分、氨基酸组成和分子量分布,并比较阿胶与阿胶低聚肽清除自由基和防护H₂O₂诱导成纤维细胞氧化损伤的能力。结果表明,阿胶低聚肽含有8种人体必需氨基酸和2种半必需氨基酸,疏水性氨基酸占比较高,约占氨基酸总量的46.23%。阿胶低聚肽的相对分子质量主要集中在900 Da以下,约83.87%。阿胶和阿胶低聚肽对DPPH、ABTS自由基清除率的IC₅₀值分别为1.89和1.39、3.33和2.06 mg/mL。10 mg/mL阿胶和阿胶低聚肽的预处理可使H₂O₂诱导损伤的成纤维细胞存活率分别提高了6.72%和14.34%,SOD的活性分别提升了178.04%和497.88%,减少了细胞内ROS水平。表明,阿胶和阿胶低聚肽均可清除DPPH、ABTS自由基和减轻H₂O₂诱导的成纤维细胞的氧化损伤,且阿胶低聚肽的效果优于阿胶。