大豆蛋白的酶解及其抗氧化活性研究

研究了大豆分离蛋白的酶解条件及其产物的抗氧化活性,分析了酶解过程中蛋白水解度(DH)、TCA-NSI变化.结果表明,碱性蛋白酶用于制备大豆蛋白抗氧化肽具有明显的优势,正交试验优化酶解条件下得到的酶解物羟自由基清除率可达53.43%,清除活性的IC50为1.708 mg/mL,Fe2+螯合率为80.13%,螯合活性的IC50为0.822 mg/mL.酶解物的羟自由基清除活性、Fe2+螯合能力与DH、TCA-NSI之间并不呈线性关系.     

松仁肽的制备及抗氧化活性研究

以松子分离蛋白为原料,水解度为评价指标,通过单因素和响应面法优化松仁肽的酶解工艺,并以羟自由基清除能力和DPPH清除率评价松仁肽的抗氧化活性。试验结果表明,松仁肽制备的最佳工艺条件为酶解温度52℃、底物浓度3.2%,pH 9.1,酶解时间3 h、加酶量9 000 U/g。在此酶解条件下,水解度可达0.329 7。制备的松仁肽在浓度24 mg/mL时能清除全部羟自由基;在10 mg/mL时对DPPH的清除率达到75%。此时的松仁肽表现出一定的抗氧化活性。     

复合风味蛋白酶酶解麦麸蛋白制备麦麸抗氧化肽的研究

以麦麸蛋白为原料,复合风味蛋白酶为水解酶,探讨麦麸蛋白水解度(DH)与麦麸肽抗氧化能力的关系,并以超氧阴离子自由基(O2-·)清除率为指标,采用正交试验设计优化制备麦麸抗氧化肽的工艺条件.试验结果表明,制备麦麸抗氧化肽的最佳酶解条件为pH 5.0,加酶量为6000U/g麦麸蛋白,底物浓度5%,温度55℃,酶解7.5h,在该条件下制得的麦麸抗氧化肽清除超氧阴离子自由基的清除率可达53.70%.     

酶解制备苦荞蛋白抗氧化肽及其分离纯化研究

以苦荞麦粉为原料,提取苦荞蛋白,分别采用碱性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶对蛋白进行酶解,采用DPPH法比较不同酶解产物的抗氧化活性,从而筛选水解制备苦荞蛋白抗氧化肽的最适酶。以水解度为指标,利用单因素试验和响应面法优化酶解工艺条件。结果表明,不同蛋白酶酶解产物的抗氧化活性大小为:胃蛋白酶胰蛋白酶碱性蛋白酶,其中胃蛋白酶酶解产物的DPPH自由基清除率最高,为68.47%。胃蛋白酶最佳水解工艺条件为:时间2.5 h、温度38℃、pH 2.0,在此条件下苦荞蛋白水解度为32.68%。采用超滤对苦荞蛋白水解物进行分离纯化,结果表明,分子量3 kDa的水解物具有显著的抗氧化活性;经凝胶过滤色谱进一步分离得到3个峰,小分子量峰组分显示出最强的抗氧化活性。     

鮟鱇鱼肝抗氧化肽的酶法制备及对羟自由基的清除作用

以脱脂鮟鱇鱼肝为原料,以水解度及对羟自由基的清除活性为考察指标,用木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶及胰蛋白酶进行单酶解筛选试验。以水解度及对羟自由基的清除作用为指标,应用二次正交旋转组合设计试验研究加酶量、酶解时间、pH值及温度对制备鮟鱇鱼肝抗氧化肽工艺的影响。综合考虑水解度和对羟自由基的清除活性因素,最终确定碱性蛋白酶酶解鮟鱇鱼肝制备抗氧化肽的最佳工艺条件是:加酶量3000U/g,酶解时间6h,pH8.5,酶解温度55℃。该条件下制备的鮟鱇鱼肝抗氧化肽产物水解度和对羟自由基的清除分别为69.52%、76.74%。     

乳清蛋白抗氧化肽的制备及体外抗氧化活性研究

采用酶解法制备乳清蛋白抗氧化肽并研究其体外抗氧化活性。结果表明:以羟自由基清除率和多肽含量为指标,筛选出中性蛋白酶为最优酶;在单因素试验的基础上,通过响应面试验确定最佳酶解条件为pH 5. 50、酶解温度65℃、酶解时间1. 65 h、底物质量分数5%、加酶量5 000 U/g,此条件下乳清蛋白抗氧化肽对羟自由基清除率为74. 54%;乳清蛋白抗氧化肽对羟自由基、ABTS+自由基、DPPH自由基和超氧阴离子自由基都具有较好的清除能力,IC50值分别为2. 174、0. 709、2. 813mg/m L和4. 579 mg/m L。表明乳清蛋白抗氧化肽具有较强的体外抗氧化活性,具有一定的开发利用价值。     

水解度对麦胚清蛋白酶解物功能特性和抗氧化力影响

利用碱性蛋白酶限制性酶解麦胚清蛋白,研究不同水解度(degree of hydrolysis,DH)酶解物的溶解性、乳化性等功能特性,及对DPPH自由基和羟自由基清除等抗氧化能力。实验结果表明,水解后清蛋白酶解物的溶解性得到改善,DH越高溶解性越好。DH为8.34%时,等电点处的溶解度从未水解时的49.52%提高到74.09%。而乳化性和乳化稳定性随DH的增加而降低。当DH低于7.54%时,酶解物对DPPH自由基和对羟自由基的清除率随DH的提高而增强。浓度为100 mg/mL,DH为7.54%时的酶解物对DPPH自由基清除率达到59.68%。浓度为5 mg/mL时,DH为7.54%时的酶解物对羟自由基清除率达50.23%。     

水解度对麦胚清蛋白酶解物功能特性和抗氧化力影响

利用碱性蛋白酶限制性酶解麦胚清蛋白,研究不同水解度(degree of hydrolysis,DH)酶解物的溶解性、乳化性等功能特性,及对DPPH自由基和羟自由基清除等抗氧化能力。实验结果表明,水解后清蛋白酶解物的溶解性得到改善,DH越高溶解性越好。DH为8.34%时,等电点处的溶解度从未水解时的49.52%提高到74.09%。而乳化性和乳化稳定性随DH的增加而降低。当DH低于7.54%时,酶解物对DPPH自由基和对羟自由基的清除率随DH的提高而增强。浓度为100 mg/mL,DH为7.54%时的酶解物对DPPH自由基清除率达到59.68%。浓度为5 mg/mL时,DH为7.54%时的酶解物对羟自由基清除率达50.23%。      

Alcalase蛋白酶水解花椒籽蛋白制备抗氧化肽的条件优化

本研究以花椒籽蛋白质抗氧化肽水解度(DH)和DPPH自由基清除率为指标,对酶解花椒籽蛋白制备抗氧化肽的水解用酶及其酶用量、底物浓度、酶解温度、时间等酶解条件进行研究,以期优化得到酶解法制备花椒籽抗氧化肽的最优条件。结果表明Alcalase蛋白酶水解花椒籽蛋白制备抗氧化肽效果最好,通过响应面分析法优化出该酶最佳酶解花椒籽制备抗氧化肽的条件为:底物浓度5%,温度55℃,pH 8.5,加酶量4%;该方法可用于花椒籽蛋白制备抗氧化肽,在此条件下花椒籽水解液DPPH自由基清除率可达到61.00%,水解度为12.00%。     

响应面法优化软枣猕猴桃蛋白水解及多肽的抗氧化研究

以酶解产物清除羟基自由基能力为指标,选用碱性蛋白酶为水解酶,利用响应曲面法优化软枣猕猴桃蛋白最佳酶解工艺条件并制取抗氧化肽。考察其水解度和清除率的相关性。结果表明：碱性蛋白酶最佳酶解工艺为温度50℃、pH9、加酶量4000U/g、酶解时间3h,此时水解度达到最大值为25.08%。在此条件下将软枣猕猴桃蛋白分别水解1、2、3、4、5h得到肽混合物进行抗氧化活性分析,得到其对羟自由基清除率分别为18.69%、24.67%、28.04%、25.82%、26.65%。当酶解时间为3h时,此时抗氧化肽的羟自由基清除率最高。     

响应面法优化苦荞水溶性清蛋白水解工艺及其抗氧化活性研究

以贵州威宁苦荞为原料,采用Osborne法分级提取苦荞水溶性清蛋白,并采用碱性蛋白酶对其进行水解,制备苦荞水溶性清蛋白多肽,以水解度(DH)为指标,采用单因素实验和响应面法对水解工艺进行优化,并研究其体外抗氧化能力。结果表明:苦荞清蛋白水解最佳条件为:p H9.1、温度45℃、时间3.5 h,在此条件下水解度为27.52%。与苦荞水溶性清蛋白相比,以最佳工艺制备得到的苦荞水溶性清蛋白多肽具有更好的抗氧化能力,其清除超氧自由基的IC_(50)为2.17mg/m L,清除超氧自由基的能力为96.0018 U/g(p0.01);清除DPPH自由基的IC_(50)为0.535 mg/mL。结论:经过水解制备的多肽具有更好的抗氧化能力,可为苦荞水溶性清蛋白进一步深入开发利用提供科学依据。     

响应面优化碎米蛋白水解及多肽抗氧化研究

为研究碎米蛋白水解工艺条件及其水解产物的抗氧化特性,实验以碎米为原料,以水解度为指标,筛选最适酶解大米蛋白的酶,在单因素的基础上以温度、底物质量分数、酶添加量、pH为响应因子,以碎米蛋白的水解度为响应值,采用Design-Expert 8.0.6.1软件对水解工艺进行优化,并对米蛋白肽的抗氧化活性进行研究。结果表明:碱性蛋白酶是生产米蛋白肽的最适合酶类;碎米蛋白最佳水解工艺为:温度63.7℃、底物质量分数4.4%、酶添加量6.8%、pH为8.5,水解度预测值为24.56%,得到水解度的实际值为25.2%。此条件下得到的碎米蛋白肽具有显著的羟自由基和超氧自由基清除能力,在水解180min、210min时羟自由基和超氧自由基清除率出现最高值为28%、33%,因此,水解180min为制备抗氧化肽的最佳时间。     

羊肝蛋白酶解条件优化及酶解产物抗氧化活性研究

为优化羊肝蛋白酶解工艺条件及探讨其体外抗氧化活性,以水解度为评价指标,采用碱性蛋白酶酶解羊肝,在单因素试验基础上,通过响应面法优化羊肝蛋白的酶解工艺条件。结果表明,羊肝蛋白最佳酶解条件为酶解温度51 ℃、pH 8.5、酶解时间4.1 h、加酶量0.40%。在此条件下,进行3次验证试验,测得羊肝酶解液实际水解度为（40.31±0.24）%。体外抗氧化试验结果表明,羊肝酶解产物具有一定的抗氧化活性,其清除羟自由基（·OH）、超氧阴离子自由基（O2-·）和DPPH自由基的IC50值分别为17.01 mg/mL、13.21 mg/mL和10.42 mg/mL,并具有一定的还原能力。     

大豆蛋白改性酶解制备大豆肽的研究

利用大豆蛋白改性酶水解大豆分离蛋白制备大豆肽,以单因素试验和正交试验确定酶解最佳条件,通过高效液相法分析大豆肽的分子量分布,并检测了大豆肽的体外抗氧化效果。结果显示：在20g/L的底物浓度下的最佳条件为酶和底物比8 000U/g、温度55℃、pH值7.5、水解时间5h,水解度为51.4%。大豆肽主要为130～1 000u的短肽,占肽总量的86.3%。大豆肽对超氧阴离子（O2·^-）和羟自由基（.OH）的半最大清除浓度分别为1.3mg/mL和8.0mg/mL。表明大豆蛋白改性酶对大豆分离蛋白的水解能力较强,大豆肽有较强的抗氧化功能。     

不同苦荞蛋白酶解产物抗氧化活性研究

以苦荞蛋白作为底物,采用碱性蛋白酶Alcalase 2.4 L、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶以及胃蛋白酶加胰蛋白酶模拟体内蛋白消化,制备苦荞麦蛋白水解物。采用DPPH及ABTS~+·法比较不同的蛋白水解物与水解前苦荞蛋白的体外抗氧化活性。结果表明:不同蛋白酶水解产物水解度由高到低的顺序为:碱性蛋白酶胃蛋白酶~胰蛋白酶胃蛋白酶木瓜蛋白酶胰蛋白酶,其中碱性蛋白酶水解苦荞蛋白水解度达29.95%。苦荞蛋白本身具有一定的抗氧化能力,其中DPPH清除率及ABTS~+·清除率最高分别达71.91%及11.25%,但均显著低于阳性对照Vc。随着水解程度的增加,苦荞蛋白水解产物抗氧化能力逐渐增强。其中,以碱性蛋白酶酶解产物抗氧化活性最高,其DPPH清除率及ABTS~+·清除率最高分别为91.65%(0.5 mg/mL)及16.67%(1 mg/mL),均显著高于原苦荞蛋白。其中,碱性蛋白酶水解产物的DPPH自由基清除率在高浓度(0.5mg/mL)条件下,与阳性对照Vc持平。同时碱性蛋白酶酶解产物抗氧化性(DPPH清除率及ABTS~+·清除率)显著优于其他蛋白酶解产物。因此,苦荞麦蛋白采用碱性蛋白酶解制备苦荞水解产物可作为天然的抗氧化剂。     

消化道酶连续水解制备苦荞球蛋白多肽及其抗氧化活性研究

采用胃蛋白酶、胰蛋白酶对苦荞球蛋白进行连续水解,以水解度(DH%)为指标,采用单因素分析底物浓度、酶底比、pH值、水解时间对苦荞球蛋白的酶解效果,并通过正交实验对胃-胰蛋白酶连续作用的酶解工艺进行优化;检测酶解产物的体外抗氧化活性。结果表明:苦荞球蛋白经胃蛋白酶酶解的最佳条件为:底物浓度30 g/L、酶底比为10%、pH值为2.0、反应时间为2.0 h;胰蛋白酶酶解的最佳条件为:底物浓度30 g/L、酶底比为5%、pH值为8、反应时间为2.5 h;胃-胰蛋白酶连续酶解最佳条件:经胃蛋白酶先水解1 h后再继续用胰蛋白酶水解1.5h,水解度为25.18%。和苦荞球蛋白相比,苦荞球蛋白酶解物的抗超氧阴离子能力及羟自由基清除能力均增强(p0.05)。     

响应面法优化鹿骨多肽酶解工艺及其体外抗氧化活性

目的:筛选鹿骨蛋白最适提取温度和最佳酶解工艺并检测其抗氧化活性。方法:根据鹿骨蛋白的蛋白浓度筛选出最适提取温度,根据水解度（DH）通过单因素及响应面实验设计筛选鹿骨多肽的最佳酶解工艺,并通过测定鹿骨多肽对DPPH自由基、羟自由基的清除能力来评价鹿骨多肽的抗氧化活性。结果:最佳提取温度为95 ℃,通过响应面法优化及实际验证确定了胃蛋白酶和胰蛋白酶最佳酶解工艺分别为胃蛋白酶酶用量6200 U/g,温度37.3 ℃,pH2.0,时间3.2 h,此时的水解度为11.23%;胰蛋白酶酶用量6300 U/g,温度37.2 ℃,pH8.1,时间4.0 h,此时的水解度为23.09%。鹿骨多肽对DPPH自由基、羟自由基具有清除能力,其IC₅₀值分别为:3.72、2.24 mg/mL。结论:本实验得到了鹿骨蛋白最佳提取温度并确定鹿骨多肽最佳酶解工艺,且鹿骨多肽对DPPH自由基、羟自由基具有良好的清除能力,说明鹿骨多肽具有良好的抗氧化活性。     

Alcalase蛋白酶酶解大黄鱼内脏制备抗氧化肽

通过Alcalase蛋白酶酶解大黄鱼内脏蛋白制备抗氧化肽,以酶解液的水解度(DH)、DPPH·和羟自由基清除率为指标,比较不同酶添加量、p H值、温度、料液比以及酶解时间对酶解效果的影响,并用响应面法优化Alcalase蛋白酶酶解反应的工艺条件。结果:Alcalase蛋白酶酶解大黄鱼内脏蛋白的最优工艺条件为:酶解p H9.0、底物质量浓度8 g/100 m L、温度62℃、加酶量4.26%、酶解时间3.7 h。在此条件下,蛋白质水解度为30.66%,DPPH自由基清除率为85.97%,羟自由基清除率为75.79%。对优化的酶解液进行氨基酸成分分析表明:大黄鱼内脏多肽含有丰富的组氨酸(His)、天冬氨酸(Asp)、酪氨酸(Tyr)、谷氨酸(Glu)、脯氨酸(Pro),具有较高的抗氧化活性。     

花椒籽仁抗氧化肽水解用酶的筛选研究

采用Protamex、Alcalase2.4L、Flavourzyme500MG、Neutrase0.5L、木瓜蛋白酶5种酶制剂水解花椒籽仁蛋白制备抗氧化肽,以水解度(DH)、多肽含量和水解产物的总抗氧化能力(TAC)、DPPH自由基清除能力、在亚油酸体系中的抗氧化性为指标对水解过程进行了分析,结果表明,Alcalase2.4L蛋白酶是制备花椒籽仁抗氧化肽的最适水解酶,其水解物的水解度(DH)为20.42%,多肽含量为21.83mg/mL,总抗氧化能力(TAC)和DPPH自由基清除能力分别为0.44mmol/L、65.47%,此外在亚油酸体系中具有一定的抗氧化性。     

酶解方式对核桃蛋白肽及其抗氧化活性的影响

分别采用7种蛋白酶对核桃蛋白进行单酶水解,并与双酶复合酶解进行比较,考察不同酶解方式对酶解产物水解度、短肽得率和抗氧化活性的影响。结果表明,碱性蛋白酶单酶酶解核桃蛋白,产物的水解度和短肽得率显著高于其它单酶处理,分别达到18.94%和76.37%,对DPPH自由基清除能力的IC50值仅为3.23mg/mL,抗氧化活性显著高于其它处理;将碱性蛋白酶分别与其它蛋白酶组合酶解,核桃蛋白酶解产物的水解度和短肽得率均有所提高,其中与木瓜蛋白酶组合处理的水解度可达28.36%,短肽得率可提高至85.62%。双酶酶解产物对提高清除DPPH自由基和羟自由基的活性不显著,碱性蛋白酶分别与中性蛋白酶、木瓜蛋白酶的组合可以显著提高酶解产物清除超氧阴离子自由基的活性。