大豆低聚肽中抗氧化肽的分离纯化及结构鉴定

为考察大豆低聚肽中抗氧化肽的活性和结构,以大豆分离蛋白为原料,采用两步酶解法制备出大豆低聚肽,在对其理化成分进行分析的基础上,以DPPH自由基清除能力为指标对其抗氧化活性进行了评价。结果表明:大豆低聚肽的DPPH自由基清除活性的IC50值约为2.6 mg/m L。利用反相高效液相色谱(RP-HPLC)对大豆低聚肽进行分离纯化,收集6个组分峰,对其DPPH自由基清除能力进行了测定。结果表明,6个组分的活性均比大豆低聚肽高。最后利用Q-TOF质谱仪对活性最高的组分5#进行了结构鉴定,并对鉴定出的6个肽段的DPPH自由基清除活性进行了评价。结果表明,6个肽段均有一定的DPPH自由基清除能力,其中Leu-Tyr(LY)、Leu-Ala-Gly-Arg(LAGR)、Phe-Ser-Arg(FSR)的清除率比大豆低聚肽高,是具有较高抗氧化活性的肽段。     

小麦低聚肽中抗氧化肽的分离纯化及结构鉴定

为了考察小麦低聚肽中抗氧化肽的活性和结构,试验以谷朊粉为原料,采用两步酶解法制备出小麦低聚肽,在对其基础理化成分进行分析的基础上,测定了其总抗氧化活性。结果表明,小麦低聚肽中总蛋白质含量为98.32%±7.25%,酸溶蛋白质含量为93.71%±7.10%,脂肪含量为0.05%±0.01%、灰分含量为4.35%±0.46%、水分含量为4.28%±0.33%。小麦低聚肽的总抗氧化能力为2.3±0.1 mmol/100 g。然后利用反相高效液相色谱(RP-HPLC)对小麦低聚肽进行分离纯化,收集6个主要的组分峰,利用Q-TOF质谱仪测定肽序列,鉴定出的15个肽段中,有3个肽段PY、LY和APSY的总抗氧化能力比小麦低聚肽强,分别为3.0±0.2,2.7±0.2和2.4±0.1 mmol/100 g。     

玉米低聚肽中ACE抑制肽的分离纯化及结构鉴定

为了考察玉米低聚肽中血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽的活性和结构,以玉米黄粉为原料,采用两步酶解法制备出玉米低聚肽,在对其基础理化成分进行分析的基础上,测定其总抗氧化活性。结果表明,玉米低聚肽中总蛋白质含量为92.15%±5.26%,酸溶蛋白质含量为87.57%±5.98%,脂肪含量为0.06%±0.01%,灰分含量为3.12%±0.38%,水分含量为3.54%±0.29%。玉米低聚肽的ACI抑制活性为0.55±0.03 mg/mL。利用反相高效液相色谱对玉米低聚肽进行分离纯化,选择ACE抑制活性最高的组分峰,利用质谱仪测定肽段序列,鉴定出4个ACE抑制肽段:AY、SAP、NAP、VNAP, IC50值分别为0.036±0.005, 0.039±0.004, 0.112±0.010和0.205±0.018 mg/mL,大约是玉米低聚肽的15.3, 14.1, 4.9和2.7倍,是具有较高ACE抑制活性的肽段。     

蛋清抗氧化肽分离纯化及结构鉴定

为了获得高活性、高纯度的蛋清抗氧化肽,以蛋清酶解物为原料,依次釆用超滤、离子交换色谱、凝胶色谱分离纯化抗氧化活性较强的肽段,运用基质辅助激光解吸离子化质谱解析肽链的氨基酸序列。结果表明:超滤法分离纯化EWPH所得的三个组分中,EWPH-Ⅲ(M_W<3 kDa)组分的DPPH自由基清除率最高,达到79.62%。离子交换层析分离纯化EWPH-III所得到的碱性组分B的DPPH自由基清除率最高,达到82.05%。凝胶过滤色谱分离EWPH-III-B所得到4组分中E组分的DPPH自由基清除率最高,为88.49%。高活性高纯度EWPH-III-B-E组分的相对分子质量为237.575,该二肽的氨基酸序列为丙氨酸-甲硫氨酸。     

乌鸡低聚肽铁的分离纯化及结构鉴定

为了考察乌鸡低聚肽铁中肽段的结构,以乌鸡为原料,以氯化亚铁为铁源制备乌鸡低聚肽铁,对其总蛋白质质量分数、螯合率、得率进行测定,结果表明乌鸡低聚肽铁总蛋白质质量分数为(56.79±0.18)%,螯合率为(83.53±0.15)%,得率为(40.86±0.14)%。然后利用反相高效液相色谱(RP-HPLC)对其进行分离纯化,收集4个组分峰,利用四极杆飞行时间串联质谱仪(QTOF质谱仪)测定肽序列,分析出1个肽段,氨基酸序列为Thr-Ser-Gly-Met-Pro,相对分子质量为491.56。     

海洋胶原低聚肽中抗氧化肽的分离及鉴定

为了考察海洋胶原低聚肽中抗氧化肽的活性和结构,本文以三文鱼皮为原料,采用两步酶解法制备出海洋胶原低聚肽(MCOP),在对其分子量分布进行分析的基础上,以DPPH自由基清除能力为指标对其抗氧化活性进行了评价。结果表明,海洋胶原低聚肽中分子量小于1000 u的组分高达90.79%,主要分布在132~576 u范围内,其DPPH自由基清除活性的IC_(50)值约为8.0 mg/m L。然后利用反相高效液相色谱(RP-HPLC)对海洋胶原低聚肽进行分离纯化,收集11个组分峰,对其DPPH自由基清除能力进行了测定。结果表明,11个组分的活性均比海洋胶原低聚肽高。最后利用Q-TOF质谱仪对收集的11个组分进行了结构鉴定,并测定了15个肽段的DPPH自由基清除活性。结果表明,15个肽段均有一定的DPPH自由基清除能力,其中Gly-Arg(GR)、Arg-Glu-Arg(RER)、Ala-Pro(AP)的清除率比海洋胶原低聚肽高,是具有较高抗氧化活性的肽段。本研究为海洋胶原低聚肽的开发利用提供了一定的理论基础。     

海洋胶原低聚肽中抗氧化肽的分离及鉴定

为了考察海洋胶原低聚肽中抗氧化肽的活性和结构,本文以三文鱼皮为原料,采用两步酶解法制备出海洋胶原低聚肽（MCOP）,在对其分子量分布进行分析的基础上,以DPPH自由基清除能力为指标对其抗氧化活性进行了评价。结果表明,海洋胶原低聚肽中分子量小于1000 u的组分高达90.79%,主要分布在132⁵76 u范围内,其DPPH自由基清除活性的IC₅₀值约为8.0 mg/m L。然后利用反相高效液相色谱（RP-HPLC）对海洋胶原低聚肽进行分离纯化,收集11个组分峰,对其DPPH自由基清除能力进行了测定。结果表明,11个组分的活性均比海洋胶原低聚肽高。最后利用Q-TOF质谱仪对收集的11个组分进行了结构鉴定,并测定了15个肽段的DPPH自由基清除活性。结果表明,15个肽段均有一定的DPPH自由基清除能力,其中Gly-Arg（GR）、Arg-Glu-Arg（RER）、Ala-Pro（AP）的清除率比海洋胶原低聚肽高,是具有较高抗氧化活性的肽段。本研究为海洋胶原低聚肽的开发利用提供了一定的理论基础。      

海洋骨胶原低聚肽钙的分离纯化及结构鉴定

以三文鱼骨作为原料,以碳酸钙作为钙源制备出海洋骨胶原低聚肽钙,对其总蛋白含量、螯合率、得率进行测定,结果表明总蛋白含量为62.56%±0.26%,螯合率为51.38%±0.09%,螯合物得率为42.06%±0.10%。然后利用反相高效液相色谱（RP-HPLC）对其进行分离纯化,收集得到8个组分峰,利用Q-TOF质谱仪测定肽序列,共分析出22个肽段,分子量大多在1000 u以下。      

海洋骨胶原低聚肽钙的分离纯化及结构鉴定

以三文鱼骨作为原料,以碳酸钙作为钙源制备出海洋骨胶原低聚肽钙,对其总蛋白含量、螯合率、得率进行测定,结果表明总蛋白含量为62.56%±0.26%,螯合率为51.38%±0.09%,螯合物得率为42.06%±0.10%。然后利用反相高效液相色谱(RP-HPLC)对其进行分离纯化,收集得到8个组分峰,利用Q-TOF质谱仪测定肽序列,共分析出22个肽段,分子量大多在1000 u以下。     

芝麻抗氧化肽分离纯化与结构鉴定

通过纳滤、超滤、制备液相对胰蛋白酶水解芝麻蛋白的酶解液中抗氧化肽进行分离纯化,随后采用高效液相质谱联用法进行结构鉴定,并合成相应多肽验证抗氧化活性。结果表明,经分离纯化与结构鉴定,共获得5个芝麻抗氧化肽,Glu-Leu-Phe-Phe-Gly-Ala-Gly-Gly- Glu-Asn-Pro-Glu-Ser-Phe-Phe-Lys(ELFFGAGGENPESFFK)、Phe-Glu-Ser-Glu-Ala-Gly-Leu- Thr-Glu-Phe-Trp-Asp-Arg(FESEAGLTEFWDR)、Asp-Val-Ala-Asn-Glu-Ala-Asn-Gln-Leu-Asp- Leu-Lys(DVANEANQLDLK)、Glu-Asn-IIe-Glu-His-Thr-Ala-Ala-Thr-His-Ser-Tyr -Asn-Pro- Arg(ENIEHTAATHSYNPR)、Gln-Asp-Asn-Ala-Asn-Asn-Ala-Asn-Gln-Leu-Asp-Pro-Asn-Pro- Arg(QDNANNANQLDPNPR)。胰蛋白酶酶解产生的芝麻抗氧化肽N端以酸性氨基酸残基为主,C末端为碱性氨基酸残基;除抗氧化肽ELFFGAGGENPESFFK是芝麻7S酶解产物以外,其余多肽均来自芝麻11S蛋白酶解。     

抗氧化黑豆肽的分离纯化与结构鉴定

以氧自由基清除能力(ORAC)为评价指标,通过超滤与大孔树脂吸附、乙醇分级洗脱对黑豆蛋白酶解产物进行初步分离,采用Sephadex G-25凝胶过滤色谱、反相高效液相色谱(RP-HPLC)与排阻色谱(SEC)逐级纯化,最终得到RP-HPLC P2组分SEC P2肽段和RP-HPLC P4组分SEC P3肽段2个纯化多肽,质量浓度为1 mg/mL的2个纯化多肽的ORAC值(Trolox当量)分别为307.5和314.6μmol/L,其氧自由基清除能力分别是超滤分离抗氧化最强黑豆肽组分(Mr1 000)的2.68和2.74倍,经Edman降解、N-端测序进行结构鉴定,纯化后的2个抗氧化肽段的氨基酸组成序列结构分别为Tyr-Asn-Ile和Trp-Asn-Pro,N-端分别为具有酚羟基结构的酪氨酸Tyr和疏水性很强的色氨酸Trp。     

松仁谷蛋白抗氧化肽的分离纯化及一级结构鉴定

利用碱性蛋白酶酶解制备松仁谷蛋白水解物,采用超滤、Sephadex G-25、Sephadex G-15及反相高效液相色谱对酶解物进行分离纯化,并利用质谱进行结构鉴定。对质谱结果进行从头测序,筛选得到两种抗氧化肽肽段Glu-Leu-Leu-Lys-Leu-His(ELLKLH)、Glu-Lys-Asp-Phe-His-Leu(EKDFHL)。经固相合成后得到纯度分别为99.67%和95.15%的肽段,对其进行抗氧化活性测定。结果表明,在浓度为1 000 μmol/m L时,ELLKLH和EKDFHL的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基清除率分别为38.26%和29.54%,铁离子螯合率分别为56.44%和48.66%。     

松仁清蛋白抗氧化肽的分离纯化及结构鉴定

利用碱性蛋白酶酶解松仁清蛋白制备高抗氧化活性肽,通过超滤、SephadexG-25、SephadexG-15及反相高效液相色谱对抗氧化肽进行分离纯化,并采用电喷雾串联质谱进行结构鉴定。经筛选获得高抗氧化活性肽苯丙氨酸-苯丙氨酸-脯氨酸-酪氨酸（FFPY）和酪氨酸-亮氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸（YLPF）,分子质量分别为572.67 Da和538.65 Da。对FFPY和YLPF进行固相合成,纯度达到99.16%和99.91%,氧自由基吸收能力分别为7 329.63 μmol/g和2 835.47 μmol/g。     

乌鸡低聚肽亚铁螯合物的分离纯化与结构鉴定

从乌鸡中酶解得到乌鸡低聚肽,然后与亚铁螯合制备乌鸡低聚肽亚铁螯合物,螯合率为84.76±0.12%。乌鸡低聚肽亚铁螯合物具有较高的蛋白质含量,高达54.64±1.03%。并且分子量较低,其中分子量小于1000 u的占85.50%。通过扫描电镜、红外光谱对乌鸡低聚肽亚铁螯合物的结构进行分析,结果表明乌鸡低聚肽亚铁螯合物是一种新型的铁螯合物。体外稳定性研究表明乌鸡低聚肽亚铁螯合物具有一定的热稳定性、酸碱稳定性和体外消化稳定性。通过反相高效液相色谱对乌鸡低聚肽亚铁螯合物进行分离纯化,选择一个主要的组分进行收集,然后利用质谱仪进行质谱分析。从乌鸡低聚肽亚铁螯合物的主要组分中鉴定出一个五肽,氨基酸序列为Thr-Ser-Gly-Met-Pro。乌鸡低聚肽亚铁螯合物可作为一种铁补充剂用于食品添加剂、营养物及医药制品中。     

芝麻抗氧化肽分离纯化与结构鉴定的研究

通过纳滤、超滤、制备液相对胰蛋白酶水解芝麻蛋白的酶解液中抗氧化肽进行分离纯化,随后采用高效液相质谱联用法进行结构鉴定,并合成相应多肽验证抗氧化活性。结果表明,经分离纯化与结构鉴定,共获得5个芝麻抗氧化肽,Glu-Leu-Phe-Phe-Gly-Ala-Gly-Gly-Glu-Asn-Pro-Glu-Ser-Phe-Phe-Lys(ELFFGAGGENPESFFK)、Phe-Glu-Ser-Glu-Ala-Gly-Leu-Thr-Glu-Phe-Trp-Asp-Arg(FESEAGLTEFWDR)、Asp-Val-Ala-Asn-Glu-Ala-Asn-Gln-Leu-Asp-Leu-Lys(DVANEANQLDLK)、Glu-Asn-IIe-Glu-His-Thr-Ala-Ala-Thr-His-Ser-Tyr-Asn-Pro-Arg(ENIEHTAATHSYNPR)、Gln-Asp-Asn-Ala-Asn-Asn-Ala-Asn-Gln-Leu-Asp-Pro-Asn-Pro-Arg(QDNANNANQLDPNPR)。胰蛋白酶酶解产生的芝麻抗氧化肽N端以酸性氨基酸残基为主,C末端为碱性氨基酸残基;除抗氧化肽ELFFGAGGENPESFFK是芝麻7S酶解产物以外,其余多肽均来自芝麻11S蛋白酶解。     

澳洲坚果抗氧化肽的分离纯化及肽段鉴定

为研究澳洲坚果抗氧化肽的抗氧化活性和氨基酸组成,以复配蛋白酶水解澳洲坚果粕制备粗多肽,利用超滤、大孔树脂纯化技术制备了抗氧化活性最佳的分子量小于1000 Da的多肽,采用Sephadex G-15凝胶对其分离并评价各组分对DPPH、羟基、ABTS+自由基的清除能力与还原能力,筛选出抗氧化活性最强组分,利用液相色谱-串联质谱技术(liquid chromatography and tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)进行鉴定并分析。结果表明,葡聚糖凝胶柱层析分离出G1、G2、G3组分,其中G3具有最佳的抗氧化活性,其羟基自由基清除能力半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC₅₀)6.18 mg/mL与还原能力IC₅₀ 2.19 mg/mL优于谷胱甘肽,DPPH自由基清除能力IC₅₀ 0.50 mg/mL,ABTS+自由基清除能力IC₅₀ 0.02 mg/mL;通过液相色谱-串联质谱鉴定G3含有46个肽段,肽段长度均小于...     

黄豆酱中低聚肽的分离及抗氧化活性研究

为研究黄豆酱中低聚肽的抗氧化性质,以黄豆酱为原料,通过超滤、离子色谱、凝胶色谱等技术手段分离出黄豆酱中高抗氧化活性组分,并确定其抗氧化活性与分子量分布。获得最佳分离条件:DEAE离子交换树脂上样最佳pH为8.6,葡聚糖凝胶G-15分离最佳流速为2mL/min,上样浓度为1.2mg/mL,并确定高抗氧化活性的两组黄豆酱低聚肽分子量范围为925~1 124Da和580~925Da。     

海洋胶原低聚肽的分离纯化及其抗氧化活性研究

通过总抗氧化能力、羟基自由基清除能力、超氧阴离子自由基清除能力及还原能力实验,对海洋胶原低聚肽的体外抗氧化活性进行考察,然后采用反相高效液相色谱（RP-HPLC）对海洋胶原低聚肽进行分离纯化,测定收集得到的11个组分的总抗氧化能力。结果表明,海洋胶原低聚肽具有一定的总抗氧化能力、羟基自由基和超氧阴离子自由基清除能力,并且具有一定的还原能力;RP-HPLC分离纯化后,5个组分的抗氧化活性显著提高,对总肽整体的抗氧化活性起到了重要的作用,并且疏水性肽组分对抗氧化活性的贡献大于亲水性肽组分。      

诺邓火腿抗氧化肽的分离纯化与鉴定

提取诺邓火腿抗氧化肽,经过Sephadex G-25凝胶色谱进行分离纯化,对各组分进行体外抗氧化试验(清除·OH、清除DPPH自由基、螯合Fe~(2+))研究抗氧化活性;将抗氧化活性最强的组分经葡聚糖凝胶G-15(Sephadex G-15)凝胶色谱再次分离纯化,最后对抗氧化活性最强的组分通过基质辅助激光解析串联飞行时间质谱仪(MALDI-TOF-MS)对抗氧化肽进行测序鉴定。试验结果:诺邓火腿抗氧化肽经Sephadex G-25凝胶色谱进行分离纯化后得到4个组分(A、B、C和D),其中组分C的抗氧化活性最强,质量浓度为1 mg/mL时,·OH清除率、DPPH自由基清除率和Fe~(2+)螯合率分别达到50.01%、48.32%和34.37%,与其他组分(A、B和D)相比,差异极显著(p0.01);组分C经Sephadex G-15凝胶色谱分离纯化的5个组分(C_1、C_2、C_3、C_4和C_5),其中C_3组分抗氧化活性最强,质量浓度为1 mg/m L时,·OH清除率、DPPH自由基清除率和螯合Fe~(2+)分别达到73.01%、51.21%和65.23%,与其他组分(C_1、C_2、C_4和C_5)相比,差异极显著(p0.01);通过MALDI-TOF-MS对C_3组分抗氧化肽进行测序鉴定,得到抗氧化肽序列。     

鹰嘴豆抗氧化肽的分离纯化、鉴定及其抗氧化活性

以发芽鹰嘴豆为原料,制备鹰嘴豆抗氧化肽,采用葡聚糖凝胶对其进行分离纯化,通过测定自由基清除能力、还原力、脂质氧化抑制能力、对自由基诱导的蛋白质和DNA损伤的保护能力评价纯化肽的抗氧化活性。对纯化肽进行鉴定合成以验证其抗氧化活性,并对合成多肽进行安全性预测。结果表明,纯化后的多肽有较好的自由基清除能力、还原力,且对亚油酸自氧化有明显的抑制作用,对自由基诱导的蛋白质和DNA损伤有保护作用。经预测,合成多肽无毒性与致敏性。综上,发芽鹰嘴豆水解物具有抗氧化能力,可用来制备抗氧化肽,从而增加鹰嘴豆的利用价值。