多菌灵降解菌的构建及对烟叶残留降解效果评价

为控制烟叶中多菌灵农药残留,利用降解酶基因质粒载体克隆技术,合成构建了对多菌灵具有较好降解效果的菌株MBC2019,并进一步筛选优化了其发酵条件和最佳浓度,研究了降解菌在烟叶种植、烘烤和打叶复烤阶段对烟叶多菌灵农药残留降解的效果。结果表明,降解菌的最佳培养温度为28℃,最适培养pH为7.0,最优接种浓度为3.00%。种植阶段,喷施多菌灵和降解菌后3~7d,未喷施降解菌烟叶中农药残留降解速度快于降解菌处理,14d后降解菌的促进效果开始显现,未使用降解菌的降解率为96.55%,使用降解菌的降解率提高到99.58%;在烘烤和打叶复烤阶段,未使用降解菌的烟叶中多菌灵降解较慢,120h降解率为8.07%和8.05%,喷施降解菌后,同期降解率分别达到77.97%和45.08%。因此该降解菌可用于烟叶种植,特别是烘烤和打叶复烤等阶段的多菌灵农药残留降解,具有良好的应用前景。     

识别农药残留的酶制剂制备研究进展

本文概述了农药残留检测酶抑制法的核心试剂--识别农药残留的酶制剂的主要研究进展.筛选来源丰富、灵敏度高的生物酶源,直接分离纯化获取酶制剂;从敏感生物材料中克隆识别农药的酶基因,采用体外表达系统大量制备重组酶制剂;特别介绍了一种新型的生物识别材料(抗体酶)在农药残留识别的应用前景.本文最后对制备识别农药残留的酶制剂存在的问题进行了展望.     

复合植物酶在棉籽蛋白生产中的应用

采用酶法水解棉籽粕制备棉籽蛋白低聚肽,筛选了4种酶制剂,最后确定复合植物酶为最佳水解酶;通过单因素试验研究了粉碎粒径、加酶量、反应温度、酶解时间对棉籽蛋白提取率的影响,最后确定最佳酶解条件为粒径60目、加酶量0.5%、反应温度、酶解时间2 h。在此条件下,蛋白质提取率为89%,最终产品经干燥后蛋白纯度为93%。     

果蔬中残留毒死蜱农药降解菌的选育及鉴定

为减少果蔬中残留毒死蜱农药,从长期喷洒有机磷农药的耕地土壤中,筛选到1株能高效降解毒死蜱农药的菌株并编号为DOP-Ma3。对其进行形态学和分子生物学鉴定,结果与Gen Bank上已提交的16S rDNA进行BLAST比对,由MEGA 6.0软件构建的系统发育树,结果表明该菌株与Burkholderia sp.16S rDNA序列同源性达99%,确定其归属于伯克霍尔德菌属。结合生理生化鉴定结果,确定此菌株为洋葱伯克霍尔德菌(Burkholderia cenocepacia)。实验证明,该菌株在48 h对500 mg/L毒死蜱降解率为69.87%,其降解酶为胞外酶,在35℃、30 min、p H 7.0条件下,粗酶液添加量为10%,对250 mg/L的毒死蜱进行降解,其降解率为52.47%。经验证,该菌对氧化乐果、氯氰菊酯和敌百虫也有一定的降解能力。     

产几丁质酶菌株的筛选及酶解产物鉴定

几丁质酶是一种专一性降解几丁质的水解酶.在工业上,几丁质酶可用于制备功能性甲壳低聚糖.结合平板透明圈法和摇瓶发酵测酶活力的方法,从土壤中筛选到一株产几丁质酶的菌株L012,酶活力为0.75 IU/mL;采用离子色谱法对菌株L012产几丁质酶的酶解产物进行分析,初步确定产物中有氨基葡萄糖、乙酰氨基葡萄糖以及聚合度小于10的寡糖.     

毒死蜱降解菌株的分离鉴定及降解条件优化

目的:分离筛选出毒死蜱降解菌株,研究其生长特性及降解特性,菌株降解酶的定位及降解广谱性研究。方法:取自长白山区周边农田土,利用以毒死蜱为碳源的无机盐培养基对土壤中的微生物进行富集培养,通过形态学观察、生理生化鉴定以及16S rRNA分子测序确定菌属。菌株毒死蜱降解酶的定位,菌株对敌敌畏、氧化乐果、甲基对硫磷、水胺硫磷、乙草胺和莠去津广谱降解的测定,通过单因素实验和正交试验对菌株降解毒死蜱条件进行优化。结果:筛选到一株毒死蜱降解菌Pseudomonas aeruginosa AY-1,经初步鉴定为铜绿假单胞菌,其毒死蜱降解酶为胞内酶,对敌敌畏、氧化乐果、甲基对硫磷、水胺硫磷、乙草胺和莠去津具有良好的广谱降解能力,经正交试验优化后,最适降解条件为35 ℃,pH=8,底物浓度为100 mg/L,降解效率为75.09%。结论:菌株Pseudomonas aeruginosa AY-1对毒死蜱具有较高的降解能力,对有机磷农药有一定的广谱降解效果,在有机磷农药污染环境修复及去除食用农作物表面有机磷农药残留方面极具应用潜力。     

一种多菌灵酶联免疫快速检测方法的建立

利用酶联免疫吸附法原理建立了一种能够定量测定果蔬、茶叶、烟叶中多菌灵残留量的方法.通过酸碱中和化学反应,制备多菌灵半抗原,再通过免疫小鼠筛选出抗多菌灵单克隆抗体,制得酶标羊抗鼠抗抗体,并将制备出的抗多菌灵单克隆抗体和酶标羊抗鼠抗抗体用于酶联酶联免疫试剂盒的研制.结果表明,在0.1～8.1 μg/L的线性范围内,目标物多...     

氨基甲酸乙酯水解酶的分离纯化及酶学性质

氨基甲酸乙酯是发酵食品生产过程中的副产物,具有致癌性和遗传毒性,影响食品安全。酶法降解氨基甲酸乙酯是一种高效安全的去毒方法。从小鼠肠道筛选得到一株具有降解氨基甲酸乙酯活性的赖氨酸芽孢杆菌。通过对其细胞破碎上清液进行硫酸铵沉淀、离子交换层析、疏水层析和凝胶层析分离纯化,得到了氨基甲酸乙酯水解酶纯酶。SDS-PAGE电泳图显示,该酶亚基分子量约为50 k Da。该酶最适反应温度为35℃,最适p H值为7.0,在10~45℃时,具有良好的热稳定性。以氨基甲酸乙酯为底物反应,其Km和Kcat分别为37.2 mmol/L和1 176.4 s-1。金属离子显著抑制酶活力,而EDTA对酶活力无影响,表明此酶为非金属酶。此外,该酶对低浓度的Na Cl和乙醇有一定的耐受性,具有在酱油和黄酒中去除氨基甲酸乙酯的应用潜力。     

重组内切几丁质酶的纯化及其催化壳聚糖降解的研究

目的:研究重组内切几丁质酶的分离纯化及其催化壳聚糖制备壳寡糖的反应条件优化。方法:重组菌发酵液经PEG20000浓缩和DEAE-Sepharose FF离子交换层析后,测定总蛋白含量和内切几丁质酶活力。用纯化的内切几丁质酶催化壳聚糖制备壳寡糖,探讨其最佳的反应条件。结果:纯化的内切几丁质酶比活力41.34U/mg,纯化倍数2.49,酶总回收率89.63%。内切几丁质酶催化壳聚糖降解制备壳寡糖的最优化反应条件是:壳聚糖质量分数4%,p H7.0,温度30℃,时间12 h。结论:本研究结果为内切几丁质酶和壳寡糖的产业化应用奠定了良好基础。     

岩藻多糖降解酶产生菌的筛选及鉴定

岩藻多糖,特别是低分子质量的岩藻多糖具有多种生理活性功能。岩藻多糖降解酶可以将分子量大的岩藻多糖降解成小分子量的岩藻低聚糖。本实验从广东海域筛选到1株编号为1．1e的产岩藻多糖降解酶的菌株。根据菌株的形态、生理生化特征及API条带分析结果,鉴定为多食鞘氨醇杆菌（Sphingobacterium multivorum）。产生岩藻多糖降解酶的多食鞘氨醇菌在国内外均无报道。本研究的开展,为进一步利用岩藻多糖降解酶法生产低分子量岩藻糖聚合物、寡糖等提供了先决的条件。     

降解南瓜纤维素菌株的分离筛选及酶活测定

目的:筛选出能高效降解南瓜纤维素的菌株,以制备南瓜可溶性膳食纤维。方法:从土壤、腐烂的树叶和水果上分离出具有降解南瓜纤维素的菌株,用刚果红染色透明水解圈进行初筛,然后用CMC-Na、滤纸和南瓜渣为碳源测所有菌株及混合菌株的羧甲基纤维素酶活力,最终选出1株酶活力较高菌株进行下一步实验。结果:共分离到能够有效降解纤维素的共有5株细菌和7株真菌,通过测单菌株和混合菌株的酶活力,表明混合菌株的酶活力最大值比单菌株的酶活力最大值要高3倍之多。结论:混合菌株的酶活力比单株菌酶活力值高,发酵培养72h南瓜渣可溶性多糖降解力最强。     

花生肽的酶法生产工艺研究

采用酶法水解制备营养性花生低肽,对其酶制剂的筛选,酶水解工艺参数,酸溶性花生肽得率与水妥度的相关性分析及酶解液的溶解性变化等进行了系统研究。     

双歧杆菌胆盐水解酶基因的重组表达、纯化与酶学性质

为了提高胆盐水解酶在大肠杆菌中的表达量,研究重组胆盐水解酶的酶学性质。利用大肠杆菌表达系统,对双歧杆菌来源的胆盐水解酶进行了表达。将PCR获得的胆盐水解酶基因克隆至表达载体p ET-22b(+),得到重组质粒p ET-22b(+)-bsh,并转化大肠杆菌BL21(DE3)。经发酵优化,重组菌在20℃、IPTG 1 mmol/L条件下诱导32 h可达最高酶活,对甘氨脱氧胆酸钠和牛磺酸脱氧胆酸钠的酶活分别为135.2 U/m L和121.3 U/m L。采用镍亲和层析柱对重组胆盐水解酶进行纯化,经SDS-PAGE分析,胆盐水解酶相对分子质量(Mr)为35.0×103。酶学性质研究表明,重组胆盐水解酶偏好水解甘氨结合胆盐,对甘氨胆酸钠的催化活性最高,达到220.1 U/mg。酶催化反应的动力学参数经Hill方程拟合,希尔系数大于1,表明底物与酶之间存在协同作用,且不同底物与重组胆盐水解酶之间存在不同的协同作用,表明重组胆盐水解酶属于变构酶。研究结果为其他来源胆盐水解酶在基因工程菌中的表达,和进一步研究胆盐水解酶的结构和催化反应机理提供了参考。     

烟草中淀粉降解菌的筛选、鉴定及发酵工艺优化

从河南初烤烟叶表面分离筛选得到一株淀粉降解菌HX-6,并对菌株产酶培养基和烟叶发酵工艺进行优化.结果表明:淀粉降解菌HX-6为枯草芽孢杆菌(Ba-cillus subtilis),其最佳产酶培养基配方为:可溶性淀粉与红薯淀粉(m可溶性淀粉:m红薯淀粉=1:1)17.0 g/L,蛋白胨与酵母粉(m蛋白胨:m酵母粉=1:1...     

水酶法提取花生蛋白工艺的研究

采用水酶法从花生中提取蛋白质,筛选了三种酶制剂,确定选用纤维素酶作为水解酶;得出纤维素酶提取花生蛋白的最佳条件为:碱浸提液pH7.5,浸提温度45℃,酶用量0.2g/L,反应时间120min,酸沉pH4.5;在此条件下花生蛋白的得率为69.59%,蛋白质含量为91.88%。     

水酶法从油菜籽中提取油及水解蛋白的研究

采用水酶法工艺从双低油菜籽中提取油及水解蛋白,研究了不同细胞壁降解酶对油菜籽细胞壁的降解效果,并对蛋白酶进行了筛选.初步研究了水酶法工艺得到的菜籽水解蛋白的还原能力和清除DPPH自由基的能力.结果表明:不同细胞壁降解酶中,果胶酶c的作用效果最好.果胶酶c较佳的酶解条件为料液比1∶5(m/V)、加酶量2%、pH 3.8、50℃下酶解4 h,在此条件下油脂提取率达到92.38%.以植物蛋白酶进一步作用于果胶酶c酶解后的体系,蛋白提取率为95.72%,清油得率为88.09%,水解蛋白得率为82.50%.菜籽水解蛋白显示出很强的还原能力和清除DPPH自由基能力.     

亚麻籽饼酶法脱胶工艺条件研究

为提高亚麻籽饼的脱胶效率,采用酶法对冷榨亚麻籽饼进行脱胶。以总糖得率及蛋白质损失率为指标,从果胶酶、纤维素酶、木聚糖酶、β-葡聚糖酶、α-淀粉酶5种酶制剂中筛选最合适的酶制剂,并通过单因素实验和响应面实验确定了酶法脱除亚麻胶的最佳工艺条件。结果表明:最佳酶制剂为果胶酶,在酶解pH 3.60、酶解温度50.42℃、酶添加量1%、酶解时间1.82 h、料液比1∶25条件下,总糖得率为14.13%,蛋白质损失率为4.22%。     

水酶法从花生中提取蛋白质与油--酶解工艺参数

采用水酶法从花生中同时提取油与水解蛋白质,对酶制剂的筛选,酶解工艺中酶用量、蛋白质的水解度(DH)、降低乳状液稳定性以及部分破乳的方法等进行了研究.确定选用Alcalase作为水解酶,酶与底物比为2.5 g/dL.推断了DH与清油得率及等电可溶水解蛋白质得率的关系,并对花生水解蛋白质的部分功能性质及花生油质量进行了分析.     

酱香型大曲的理化指标、水解酶系、微生物产酶的关系研究

酱香型大曲是典型的高温大曲,本文主要对酱香型大曲的理化指标以及水解酶系的种类和酶活力进行测定。研究发现,酱香型大曲的理化指标符合地方标准DB 52/T 871的规定;酱香型大曲中水解酶系主要为蛋白酶、淀粉酶和果胶酶。结合酱香大曲的水解酶系实验结果和原料小麦的成分,对已从酱香型大曲分离鉴定的19株细菌和17株霉菌进行产酶实验,测定其产酸性蛋白酶、中性蛋白酶、糖化酶、纤维素酶、果胶酶和脂肪酶的能力。研究发现,水解酶系能够部分反映出曲中微生物的种类和数量;甲基营养型芽孢杆菌、黄曲霉和阿姆斯特丹散囊菌对酱香型大曲水解酶系贡献比较突出。将功能微生物制作成酶制剂,可用于提高酱香大曲的品质,为优化制曲工艺和强化大曲的制备提供理论依据。     

果蔬发酵液中3株乳杆菌的体外功能特性研究

以果蔬自然发酵液中分离得到的3株乳杆菌（Lactobacillus）为对象,通过测定表面疏水性、自身凝聚率分析乳杆菌的表面特性;以DPPH自由基、ABTS自由基清除能力和铁还原能力为指标,分析3株乳杆菌的体外抗氧化能力差异;以降解胆固醇及亚硝酸盐为指标,评价乳杆菌的功能活性。结果表明:3株菌中,L3的表面疏水性和自身凝聚力均表现良好,分别为57.7%和95.2%（24 h）;3株菌的上清液具有很强的DPPH自由基清除率（>90%）、羟自由基清除率（>68%）及还原能力（>1.0）,其中L1和L3的上清液具有更强羟自由基清除率,近90%,L2则具有较强的抗脂质过氧化能力（>37%）;乳杆菌在48 h内几乎完全降解200 mg/L NaNO₂;3株菌上清液均有较好的胆固醇降解能力（>19%）,其活性物质主要为蛋白质和多糖类物质。综上所述,果蔬发酵液中分离所得的3株乳杆菌表现出了良好的益生特性,可为开发功能性发酵食品奠定坚实的基础。