黑豆皮花色苷的中压液相色谱制备及结构鉴定

以黑豆皮为实验材料,用乙醇浸提法对黑豆皮中的花色苷进行提取,用大孔吸附树脂对花色苷进行纯化,经冷冻干燥得到黑豆皮花色苷粗品。利用中压制备色谱对花色苷组分进行分离,通过质谱分析鉴定经中压制备色谱分离后的花色苷组分。结果表明:黑豆皮花色苷粗品中的总花色苷含量为26.9%,经中压制备色谱对花色苷粗品进行分离后的2峰中矢车菊素-3-葡萄糖苷纯度达到91.46%。黑豆皮中的主要花色苷为天竺葵素-3-O-芸香糖苷、芍药色素-3-O-葡萄糖苷、矢车菊素-3-O-葡萄糖苷和锦葵素-3-葡萄糖苷-4-乙醛。     

半制备型高效液相色谱法分离刺葡萄花色苷单体

经大孔吸附树脂HP-20纯化刺葡萄花色苷的粗提物后,以半制备型高效液相色谱法分离得到高纯度的刺葡萄花色苷单体。以XCharge C18柱（20 mm×250 mm,10 μm）制备柱,考察梯度洗脱条件、流动相流速、进样量对刺葡萄花色苷分离的影响,确定了最佳制备条件为甲醇-3%甲酸溶液流动相梯度洗脱、流速15 mL/min、进样量1.2 mL,实现了2 种主要花色苷单体的分离及制备。经超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱鉴定,2 种花色苷单体分别是锦葵素-3,5-O-双葡萄糖苷和锦葵素-3,5-O-双葡萄糖苷-香豆酰,产品纯度分别达到了99.54%和98.28%。方法具有简单易行、经济快速、易于放大等特点,适用于刺葡萄花色苷标准品的大规模制备。     

中压快速分离系统大量制备高纯度桑葚和树莓花色苷的工艺研究

为快速获得大量不同结构花色苷,本文以富含花色苷的桑葚和树莓为原料,通过大孔吸附树脂AB-8对两种花色苷粗提物初步分离后,利用中压快速分离系统分离得到高纯度的桑葚及树莓花色苷。制备条件为:以flash C₁₈(80 g,20~35 μm,100 A)为制备柱,两支串联,采用A相2%甲酸水,B相甲醇,流速30 mL/min,梯度洗脱程序:0~2 min,20% B;2~22 min,20%~30% B;22~32 min,30%~40% B,进样量300 mg,实现了3种不同结构花色苷的分离及纯化,桑葚中的矢车菊素-3-葡萄糖苷和矢车菊素-3-芸香糖苷产品纯度分别达到了95%和41%;树莓中的矢车菊素-3-槐糖苷和矢车菊素-3-葡萄糖苷产品纯度分别达到了60%和75%。其中桑葚中的矢车菊素-3-葡萄糖苷在32 min梯度程序内一次性可获得30 mg,且纯度为95%,可达到标准品的要求。     

龙葵果花色苷的分离与鉴定

采用硅胶柱层析技术分离制备龙葵果花色苷。分离得到的2 个花色苷馏分经紫外-可见光谱、高效液相色谱-电喷雾串联质谱（high performance liquid chromatography electrosprary ionization-mass spectrometry,HPLC-DADESI-MS/MS）进行结构鉴定,并结合酸水解分析糖苷种类。最终确定馏分Ⅰ为飞燕草素-3-琥珀酰阿拉伯糖苷,根据峰面积归一化法计算其纯度为94%;馏分Ⅱ为矢车菊素-3-半乳糖苷和矢车菊素-3-乙酰半乳糖苷,峰面积归一化法计算其纯度分别为45.67%和13.97%。     

基于组合色谱技术的蓝莓果实中花色苷元制备

首先采用液液萃取及大孔树脂层析技术研究花色苷的制备方法,萃取剂为乙酸乙脂,大孔树脂为Amberlite XAD-7HP,在此基础上制得花色苷粗提液。花色苷经酸水解、浓缩后,采用固相萃取技术（C18小柱）对花色苷元进行除酸、除糖处理,制得了纯度为70.2%的花色苷元混合物。最后采用半制备型高效液相色谱技术实现4 种主要花色苷元单体的分离,分别为飞燕草素（纯度98.2%）、矢车菊素（纯度96.3%）、牵牛花素（纯度92.6%）、锦葵色素（纯度90.5%）。本研究可为花色苷元的规模化制备及后期功能活性研究提供技术参考和依据。     

大孔树脂-中压柱层析联用分离纯化蓝莓花色苷

以蓝莓果实为原料,采用大孔树脂-中压柱层析联用分离纯化蓝莓花色苷。分别比较6 种不同类型树脂 对蓝莓花色苷静态吸附-解吸效果,优化大孔树脂分离纯化蓝莓花色苷的工艺。结果表明：D101大孔树脂对蓝莓 花色苷的分离效果最佳,对花色苷的吸附属于多分子层吸附。在柱压力为1 MPa、温度25 ℃、上样液质量浓度为 0.073 mg/mL、洗脱剂乙醇体积分数为80%、流速5 mL/min条件下,经D101大孔树脂柱分离后,花色苷纯度从5.53% 增加到75.58%,提高了12.67 倍。采用Sephadex LH-20中压柱层析对蓝莓花色苷进一步分离纯化,主要得到1 种花 色苷组分,通过高效液相色谱和高效液相色谱-电喷雾质谱联用对蓝莓花色苷进行定性和定量分析,确定该组分为 矢车菊-3-O-葡萄糖苷,纯度达到90.88%。     

中压制备色谱法分离黑果枸杞中2个矮牵牛素花色苷及其对胰脂肪酶的抑制活性

为了快速制备较高纯度的黑果枸杞花色苷,黑果枸杞花色苷粗提物首先用大孔树脂-中压制备色谱进行纯化,再用凝胶树脂-中压制备色谱分离获得2个花色苷单体,采用超高效液相色谱-串联质谱(ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)、核磁共振氢谱(¹H nuclear magnetic resonance,¹H NMR)对其结构进行鉴定,并对纯化物的胰脂肪酶抑制活性进行评价。结果表明：用D101大孔树脂-中压制备色谱对黑果枸杞花色苷进行纯化,所得纯化物中P1、P2的相对含量分别为18.22%和30.77%,继续采用Sephadex LH-20联合中压制备色谱分离纯化可得到相对含量分别为84.16%和81.48%的两个黑果枸杞花色苷组分P1和P2,经UPLC-MS/MS和¹H NMR鉴定,2个花色苷化合物分别为矮牵牛素-3-O-芸香糖(反式-对香豆酰基)-葡萄糖苷-5-O-葡萄糖苷和矮牵牛素-3-O-芸香糖(反式-对香...     

欧李花色苷的分离及其鉴定

采用高效液相色谱与离子阱串联飞行时间检测器-质谱联用技术,分离鉴定欧李中的花色苷类化合物。结果表明：从欧李红色素中分离得到6种组分,分别为：矢车菊-3-葡萄糖苷、天竺葵-3-葡萄糖苷、矢车菊-3-鼠李糖葡萄糖苷、天竺葵-3-鼠李糖葡萄糖苷、矢车菊-3-乙酰基葡萄糖苷、天竺葵-3-乙酰基葡萄糖苷。其中,矢车菊-3-葡萄糖苷为主要花色苷,占欧李总花色苷含量的62.6%。因此,采用高效液相色谱-质谱联用技术可有效地分离分析欧李中花色苷类物质。     

紫马铃薯花色苷的提取纯化与鉴定

对超声波辅助提取紫马铃薯花色苷工艺条件进行优化,并用NKA-9大孔吸附树脂进行纯化,液相色谱结合紫外-可见光谱扫描分离和鉴定花色苷组成。结果表明：花色苷最佳提取条件为料液比1:50(2.5g/100mL柠檬酸溶液)、超声功率400W、提取温度45℃、提取时间10min,以干质量计算紫马铃薯种花色苷含量为1.362mg/g;用NKA-9大孔吸附树脂纯化,8倍柱床体积洗脱出占总量98.35%的的花色苷,花色苷纯度达到90.23%;高效液相色谱鉴定出紫马铃薯含有5种组分,其中3种分别是矢车菊素-3-葡萄糖苷、矢车菊素-3-芸香糖苷和芍药-3-葡萄糖苷,其含量分别为0.27、0.057mg/g和0.46mg/g,三者总和占马铃薯中总花色苷含量的57.78%。马铃薯中含量最高的花色苷成分出峰保留时间为12.224min,其结构未知。     

蓝莓果实中花色苷单体的色谱分离纯化

为充分开发蓝莓果实的潜在应用价值,主要采用柱色谱法及半制备高效液相色谱法系统研究蓝莓果实中花色苷(花青素的糖苷形式)单体的制备技术。蓝莓花色苷粗提液经超声辅助浸提、乙酸乙酯萃取2次,能够促进花色苷类物质的溶出,并有效去除溶液中的黄酮类杂质。经Amberlite XAD-7HP大孔树脂层析、Sep-Pak C18固相萃取,所得蓝莓花色苷粗品的纯度为62.49%。经Sephadex LH-20凝胶色谱柱分离,获得的3种花色苷纯化组分纯度在65%~75%之间。运用半制备型高效液相色谱技术从3种花色苷纯化组分中制备出两种蓝莓果实中含量较低的半乳糖苷化的花色苷单体,经分析型高效液相色谱鉴定为飞燕草素-3-O-半乳糖苷和锦葵色素-3-O-半乳糖苷,纯度分别为96.98%和95.63%。本研究为花色苷单体的规模化生产提供了技术参考,同时为实现蓝莓花青素高附加值产品的生产提供良好理论依据。     

黑果枸杞化学成分的UPLC-Triple TOF/MS分析及其总花色苷类含量测定

采用超高效液相色谱-飞行时间质谱联用技术对黑果枸杞中的化学成分进行分析,通过多级离子碎片信息,结合天然产物高分辨质谱数据库及相关文献进行推断;采用超高效液相色谱仪,使用Acquity UPLC BEH C18柱（2.1 mm×50 mm,1.7 μm）,以0.1%三氟乙酸-10%甲酸溶液及甲酸-水-甲醇-乙腈（1∶5∶2∶2,V/V）为流动相进行梯度洗脱,检测波长530 nm,对黑果枸杞中的总花色苷进行定量分析;黑果枸杞中的总花色苷含量以矢车菊素-3-O-葡萄糖苷为标准计算。从黑果枸杞中共鉴定出化合物30 个,其中包括生物碱类化合物13 个、花色苷类化合物13 个。矢车菊素-3-O-葡萄糖苷在0.005～0.08 mg/mL质量浓度范围内线性关系良好（R=0.999 9）;平均加样回收率为95.45%,相对标准偏差为2.62%。本方法可快速、高效地鉴定黑果枸杞中的化合物;花色苷含量测定方法重复性好、准确度高,有助于提高黑枸杞的品质控制。     

圣云蓝莓果中锦葵色素-3-半乳糖苷的结构鉴定

采用体积分数60%(pH3.0)的乙醇在恒温水浴(40℃)条件下提取圣云蓝莓花色苷,将所得浓缩液经AB-8 大孔树脂纯化,40℃减压浓缩,真空干燥得到紫黑色粉末,再经过制备型高效液相色谱分离获得单体化合物。经紫外光谱、红外光谱、质谱、1H 和13C 核磁共振、薄层色谱对单体化合物进行结构鉴定,确定此化合物为锦葵色素-3- 半乳糖苷。     

中压制备色谱在天然产物分离纯化中的应用

中压制备色谱(medium pressure liquid chromatography,MPLC)是相对于常压色谱和高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)而言,其压力介于0~200 psi之间,主要应用于天然产物化学、生物化学、药物化学、有机合成以及生命科学等领域产品的分离与纯化。MPLC一般由计量泵、检测器、收集器和工作站组成。MPLC最大特点是分离速度快、效率高,可短时间内制备毫克到数十甚至百克的样品,可应用于正相填料和反相填料。与常压柱色谱相比,它具有分辨率高、分离速度快的优势和制备量大、时间短的特点。近年来,MPLC已逐渐发展为一种备受欢迎的分离和纯化方法。本文主要介绍了MPLC的特点、与高速逆流色谱的比较以及反相MPLC在分离纯化中的应用等。     

肉豆蔻酰矢车菊素-3-O-葡萄糖苷在混合溶剂体系中的酶法合成

为了提高矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(C3G,Cyanidin-3-O-glucoside)的稳定性及亲脂性,本研究用固定化脂肪酶Lipozyme 435催化肉豆蔻酸甲酯对C3G进行酰基化修饰.首先分别在单一有机溶剂和混合有机溶剂中进行酰基化反应,然后通过半制备液相色谱对C3G酰基化衍生物进行分离纯化,并通过液质联用和核...     

Determination of anthocyanins in four Croatian cultivars of sour cherries (Prunus cerasus)

The anthocyanins were characterised and quantified in four cultivars of sour cherries by means of high-performance liquid chromatography and mass spectrometry. Column chromatography on XAD-2 Amberlite was the method used for isolation of anthocyanins. A diode-array detector was employed. For anthocyanins determination was chosen wavelength of 518 nm. Cyanidin-3-glucosylrutinoside and cyanidin-3-rutinoside were major anthocyanins. The total anthocyanin content in sour cherries, (expressed as cyanidin-3-glucosylrutinoside) varied from 2.7 to 28.0 mg/100 g of fresh weight, with the highest content being observed in Oblainska cultivar.     

红毛丹果皮中老鹳草素的分离纯化及其热稳定性

老鹳草素是一种天然来源的、具有显著生物活性的可水解鞣花单宁，前期研究发现红毛丹果皮富含老鹳草素。为了提高红毛丹果皮的利用率，本实验研究了中压液相色谱反相C18柱系统和制备型高效液相色谱对红毛丹果皮多酚制取物中老鹳草素的快速分离纯化技术，采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱系统对老鹳草素的热稳定性及其热降解产物进行了定性分析。结果发现真空冷冻干燥的红毛丹果皮中老鹳草素含量高达12.67 g /100 g（以果皮干质量计）；其多酚制取物经中压液相色谱反向C18柱系统和制备型高效液相色谱系统分离和洗脱，得到纯度为95.63%的老鹳草素产品，产率为6.00%（以果皮干质量计）。纯化后的老鹳草素不耐高温，60 ℃处理10 h，老鹳草素可降解损失17.13%；100 ℃处理2 h，降解损失率为73.97%。在老鹳草素的热降解体系中鉴定出没食子酸、柯里拉京、六羟基联苯二甲酸、云实酸、Galloyl-bis-HHDP-glucose、鞣花酸、云实素等分子质量更低的酚类物质。研究结果可为老鹳草素的可控降解及生物利用提供探讨。     

微波提取对蓝莓花色苷组分及抗氧化活性的影响

研究不同温度下微波提取对蓝莓花色苷组分及抗氧化活性的影响,采用pH示差法测定不同温度下蓝莓总花色苷含量;通过高效液相色谱-串联质谱法(High performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,HPLC-MS/MS)鉴定蓝莓花色苷组分;采用高效液相色谱法(High-performance liquid chromatography,HPLC)测定蓝莓花色苷单体含量,同时分析蓝莓总花色苷含量、组分以及抗氧化活性的动态变化规律。结果表明:蓝莓花色苷总含量随温度升高呈现先增加后减小的趋势,当温度在50 ℃时,花色苷总含量达到最大值207.39 mg/100 g。经HPLC-MS/MS鉴定蓝莓花色苷共有13种花色苷单体。当温度在30~70 ℃时,蓝莓中所有花色苷单体含量均呈现先增加后减小的趋势;在60 ℃时,仅有芍药-3-葡萄糖苷消失;在70 ℃时,芍药-3-葡萄糖苷和芍药-3-阿拉伯糖苷均消失。蓝莓花色苷的抗氧化活性随温度升高也呈现先增加后减小的趋势,其中对脂质体的抑制率、DPPH和ABTS+自由基清除率均高于Vc,而对.OH自由基的清除能力低于Vc。所建立的动力学模型能有效预测微波提取不同温度下花色苷含量和抗氧化活性的变化规律,研究结果可为蓝莓深加工提供理论依据。     

Accelerated,Microwave‐Assisted,and Conventional Solvent Extraction Methods Affect Anthocyanin Composition from Colored Grains

Anthocyanins are important dietary components with diverse positive functions in human health. This study investigates effects of accelerated solvent extraction (ASE) and microwave‐assisted extraction (MAE) on anthocyanin composition and extraction efficiency from blue wheat, purple corn, and black rice in comparison with the commonly used solvent extraction (CSE). Factorial experimental design was employed to study effects of ASE and MAE variables, and anthocyanin extracts were analyzed by spectrophotometry, high‐performance liquid chromatography‐diode array detector (DAD), and liquid chromatography–mass spectrometry chromatography. The extraction efficiency of ASE and MAE was comparable with CSE at the optimal conditions. The greatest extraction by ASE was achieved at 50 °C, 2500 psi, 10 min using 5 cycles, and 100% flush. For MAE, a combination of 70 °C, 300 W, and 10 min in MAE was the most effective in extracting anthocyanins from blue wheat and purple corn compared with 50 °C, 1200 W, and 20 min for black rice. The anthocyanin composition of grain extracts was influenced by the extraction method. The ASE extraction method seems to be more appropriate in extracting anthocyanins from the colored grains as being comparable with the CSE method based on changes in anthocyanin composition. The method caused lower structural changes in anthocaynins compared with the MAE method. Changes in blue wheat anthocyanins were lower in comparison with purple corn or black rice perhaps due to the absence of acylated anthocyanin compounds in blue wheat. The results show significant differences in anthocyanins among the 3 extraction methods, which indicate a need to standardize a method for valid comparisons among studies and for quality assurance purposes.