产蛋白酶波茨坦短芽孢杆菌的鉴定及产酶条件优化

该研究旨在提高一株环境分离菌株的产酶效率,为后续菌株及其蛋白酶的应用提供前期实验基础。通过水解圈法初步检测菌株S8的产蛋白酶能力,并通过16S rRNA序列比对确认其为波茨坦短芽孢杆菌。通过单因素试验确定了最佳培养条件和培养基添加成分。并采用Plackett-Burman设计和最陡爬坡试验对培养条件和培养基进行响应面优化。优化结果显示,在发酵时间为38.70 h、菌液接种量为1.84%（V/V）、发酵温度为35 ℃、酵母粉添加量为23.70 g/L、胰蛋白胨添加量为11.70 g/L、MgSO4添加量为20.20 g/L的条件下,菌株的产酶活力可达到114.79 U/mL,相比优化前提升了209.70%。研究结果为该菌株的后续发酵应用提供了科学数据。     

浓香型酒醅中一株高产蛋白酶菌株的鉴定及产酶条件的优化

菌株J-1为实验室保存的高产蛋白酶菌株,分离自浓香型发酵酒醅。经过形态学及分子生物学鉴定菌株J-1为解淀粉芽孢杆菌。以蛋白酶活力为指标,通过单因素实验优化产酶条件得出：选用牛肉膏蛋白胨培养基、摇床转速200 r/min、培养温度37℃的实验条件,解淀粉芽孢杆菌所产蛋白酶活力最高,可达到39.6 U/mL。在最优条件下测定蛋白酶最适p H值和最适温度,结果显示：解淀粉芽孢杆菌所产蛋白酶的最适p H值为4.0、最适温度为30℃,并在此条件下蛋白酶活力为45.3 U/mL。结果表明：通过对解淀粉芽孢杆菌产酶条件的优化,提高了菌株蛋白酶活力。期望通过对糟醅中蛋白酶及其产酶条件的研究,能够为白酒酿造生产提供科学理论指导。     

一株产大豆蛋白酶的芽孢杆菌发酵条件的优化

对一株产大豆蛋白酶芽孢杆菌(Bacillussp.D-16-9)的发酵条件进行了优化,研究各种碳源、氮源及无机盐对产酶的影响,应用正交试验优化发酵培养基组成。结果发现菌株D-16-9可以利用无机氮源生长,但用来产酶则很差;有机氮源利于生长和产酶,适当添加诱导物更利于产酶;酶合成模式属于滞后合成型,大量收获在菌体生长的稳定期。通过试验确定发酵培养基的最佳组成:5.0%玉米粉、3.0%大豆豆粕、0.05%氯化钾0、.05%硫酸镁;确定最适发酵条件为:起始pH10,培养温度30℃、种龄24 h、接种量10%,250 mL三角瓶中装入100 mL发酵培养基,摇瓶转速170 r/min,发酵时间120 h。综合最佳的培养基组成和培养条件,最终大豆蛋白酶活达6 500 U/mL。优化后蛋白酶活性由4423.20U/mL提高到6505.60U/mL。     

一株产中性蛋白酶菌株的筛选及其发酵产酶条件优化

目前,低酶活及原料高成本严重制约了蛋白酶工业的发展,本研究采用透明圈法和摇瓶发酵法筛选出1株产中性蛋白酶的菌株,经形态学观察、生理生化实验以及16S rDNA序列分析鉴定为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）,并命名为ppr3,通过单因素实验和响应面试验对发酵培养基成分及发酵条件进行优化,结果表明:当发酵温度33 ℃,接种量8.5%（v/v）,初始pH5.7,乳糖5.55 g/L、菜粕31.89 g/L、酵母浸粉7.09 g/L、吐温80 0.03%、MgSO₄ 0.04%、K₂HPO₄ 0.04%时,蛋白酶活为500 U/mL,相较于未优化前提高了132%。将菜粕作为培养基的发酵氮源,在一定程度上降低了成本,为农副产品的再利用提供了一个新途径,也为后续工业化生产奠定了研究基础。     

窖泥中酯化型细菌的筛选及产酶条件优化

为了提高浓香型白酒的品质,提升人工窖泥质量,对赊店老酒窖泥中酯化型细菌进行筛选,从中筛选出一株产酯化酶活力较高的细菌S2D27,并对其进行鉴定及发酵条件优化。结果表明,通过形态观察及分子生物学鉴定,确定其为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）。在单因素试验的基础上,以酯化酶活力为响应值,响应面法优化该菌株产酶条件为：豆粕添加量1.3%、培养基初始pH值5.0、培养时间3 d。在此优化条件下,酯化酶活力可达17.25 U/mL,是优化前的1.65倍。     

一株红色素产生菌的鉴定及发酵条件优化

将一株从四川自贡砂质土壤中分离得到的产红色素菌株XF105采用生理生化及分子生物学鉴定,根据菌株的16SrDNA序列分析结果及生理生化特性,该菌株XF105归属为P.agaridevorans属。以此菌株为出发菌株,分别从发酵温度、p H、装液量、接种量4个单因素研究发酵条件,在单因素实验基础上采用响应曲面设计实验,对Paenibacillus agaridevorans XF-105产红色素的发酵条件进行优化。优化结果表明,Paenibacillus agaridevorans XF-105产红色素最优发酵条件为温度27℃,p H6.15,装液量为22.4%(v/v),接种量为9.78%(v/v),在此条件下红色素的吸光度为0.415,回归模型的预测值为0.3996,发酵效果最佳。     

一株产己酸乙酯酯化酶霉菌的分离鉴定及产酶条件研究

从浓香型大曲中分离得到1株产己酸乙酯酯化酶霉菌,经Biolog微生物自动分析系统鉴定为黄曲霉。在液体发酵培养基中,36℃、150r／min恒温振荡培养72h,发酵液酶活可达6．75u／mL。对该菌株产酯化酶的培养条件进行研究,结果表明,以黄豆粉为N源,淀粉为C源,初始pH6．0,36℃下培养72h,酶活可达9．16u／mL。     

一株产γ-PGA的芽孢杆菌的分离鉴定及发酵条件的优化

目的:筛选一株高产γ-聚谷氨酸(γ-PGA)的菌株,并优化其发酵条件。方法:从豆腐作坊周边土地取样,采用平板稀释涂布法,筛选高产γ-PGA的菌株,通过菌落形态、分子生物学方法对其进行鉴定;以γ-PGA产量为响应值,在单因素实验的基础上,以温度、pH、转速、底物浓度为实验因素,采用Box-Behnken法设计四因素三水平试验进行响应面优化,确定其产γ-PGA最佳发酵条件。结果:筛选获得一株高产γ-PGA的芽孢杆菌B-6578,鉴定为暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis);通过单因素和响应面最终获得该芽孢杆菌发酵产γ-PGA的最佳条件为:温度37.5 ℃,pH7.48,转速240 r/min,底物浓度52.70 g/L,摇瓶发酵36 h,γ-PGA的产量达到24.82 g/L,γ-PGA转化率为47.10%,比优化前提高了25.19%。结论:采用响应面法优化得到的发酵条件方便可行,利于γ-PGA的进一步开发利用。     

产蛋白酶菌株的筛选及以菜籽粕为氮源的产酶条件优化

从大学食堂污水中筛选出1株高产蛋白酶菌株CL-10,通过生理生化实验以及16S rRNA测序鉴定为解淀粉芽孢杆菌.以廉价菜籽粕为氮源,以蛋白酶活力为指标,通过对培养基成分单因素试验探讨不同因素对发酵产蛋白酶的影响,在此基础上,通过响应面优化菜籽粕、玉米粉、麸皮的含量.结果表明:最优产酶条件为菜籽粕质量分数6.1％、玉米...     

产β-甘露聚糖酶菌株的筛选鉴定及产酶条件优化

为获得产β-甘露聚糖酶菌株,取常年种植魔芋的土壤,通过富集培养与筛选鉴定获得目标菌株,并对其产酶条件进行优化。结果表明,分离到6株可以降解魔芋粉的菌株,其中菌株HKS018产生的降解圈最明显,且酶活最高。对菌株HKS018的16S rDNA基因序列和gyrB基因序列进行扩增,通过序列比对及构建系统发育树,结合形态特征、生理生化特征鉴定菌株HKS018为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。其最优发酵条件为：发酵温度30 ℃、发酵时间48 h、初始pH值为7.0、接种量1.0%、装液量50 mL/250 mL、转速180 r/min。在此优化条件下,β-甘露聚糖酶酶活为68.28 U/mL,比优化前酶活力提高了5.29倍。     

产低温β-半乳糖苷酶菌株的筛选及其酶学性质研究

从新疆高寒冻土、冷冻乳制品及生乳中分离到101株耐冷菌,利用低温β-半乳糖苷酶筛选模型,获得1株低温酶高产菌株L2004,根据其形态特征、生理生化特性,鉴定为短芽孢杆菌属(BrevibacillusShida,1996)。在以乳糖为主要碳源的发酵培养基中,L2004菌最适生长温度和最适产酶温度分别为20、15℃。该低温酶的最适pH值为6.5,最适作用温度为33℃,0℃相对酶活为总酶活的25%,在0～0℃范围内,具有较好的稳定性。不同金属离子对β-半乳糖苷酶活性的影响为:Mn2 >Mg2 >K >Na >Ca2 >Fe2 >Hg2 >Cu2 >Zn2 。Mn2 、Mg2 增强酶活,而Hg2 、Cu2 、Zn2 抑制酶活。该酶Km值为5.29mmol/L,具低温酶特性。     

产中性纤维素酶细菌的筛选及培养基优化

从土壤中筛选到一株产中性纤维素酶的细菌,初步鉴定为芽孢杆菌属。以其为出发菌株,利用单因素及析因试验、爬坡实验、中心组合实验,建立其发酵产酶过程的响应面(RSM)模型,通过对RSM模型分析,得到最优培养基碳氮源组成:麦芽糖质量浓度1.97g/dL、酵母粉-蛋白胨混合氮源(1∶4)2.03g/dL。验证发现,优化后酶活从130.40U/mL提高到194.23U/mL。     

浓香型白酒窖泥产酸菌协同发酵条件优化

浓香型白酒中己酸和丁酸的含量影响着己酸乙酯和丁酸乙酯的含量,从而影响白酒的风味.为提高浓香型白酒中己酸和丁酸的含量,本文以特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis)、空气芽孢杆菌(Bacillus aerius)、丁酸梭菌亚种(Clostridium butyricum subsp)3株窖泥产酸功能菌进...     

响应面法对产甘露醇发酵乳杆菌发酵条件的优化

为提高发酵乳杆菌（Lactobacillus fermentation）LS33发酵产甘露醇的产率,对其发酵条件进行了研究。在单因素试验结果的基础上,采用响应面法进行试验设计,利用Design Expert 7.0软件建立果糖质量浓度、初始pH和温度的二次回归模型。确定LS33发酵产甘露醇的最佳参数为：果糖质量浓度75 g/L、初始pH 6.9、温度42℃、接种量10%、摇床转速120 r/min。此条件下甘露醇产率为53.66%,较优化前（45.12%）提高了18.93%。     

一株产酯化酶菌株的分离鉴定及产酶

从浓香大曲中分离筛选得到一株产酯化酶的菌株,鉴定并研究了其产酯化酶的特性。利用微生物分离技术筛选得到产酯化酶的红曲霉FBKL3.0018,根据形态特征、培养特征、生理生化特征并结合分子生物学方法进行鉴定。结果鉴定菌株FBKL3.0018为红曲属的紫色红曲霉(Monascuspurpureus)。菌株的酯化力较高,可用于生产酯化酶制剂和高酯化大曲等。     

聚乙烯醇降解菌的筛选与降解条件优化

为了实现纺织工业废水中PVA1799的生物降解,从纺织印染厂区筛选到一个能快速降解培养基中PVA1799的混合菌系,命名为SH-TD。从中分离出3株纯培养菌株,分别命名鉴定为SH1(Aeromonas sp.),TD5(Pseudomonas sp.),TD33(Acinetobacter sp.)。通过对含PVA1799出发培养基进行单因素及Placckett-Burman实验筛选出三个对PVA1799降解有显著影响的因素分别为Yeast-Extract、(NH4)2HPO4、Ca Cl2·2H2O。然后进行最陡爬坡实验逼近最佳响应面区域,最后通过Box-Behnken设计,利用Design-Expert软件进行回归分析,得到各因素的最佳质量浓度组成为(g/L):Yeast-Extract 0.04、(NH4)2HPO448.42、Ba Cl20.06。在最优条件下,24 h PVA降解率从原先的30%提高到80%。     

瑞士乳杆菌发酵乳制备ACE 抑制肽的条件优化

本研究以脱脂乳为主要原料,对瑞士乳杆菌发酵产生血管紧张素转化酶(angiotensin I-converting enzyme,ACE)抑制肽工艺条件进行研究。通过单因素试验和响应面试验设计,确定瑞士乳杆菌发酵脱脂乳生产ACE 抑制肽的最佳工艺条件为：脱脂乳浓度9.67%(m/V)、底物灭菌时间30min、接种量3%(V/V),温度38.82℃、发酵时间6.26h,测得ACE 抑制率为92.26%。研究结果证实利用发酵法生产乳源ACE 抑制活性肽对控制高血压具有重要意义。     

埃博霉素B高产菌株的选育及发酵工艺优化

以纤维堆囊菌(Sorangium cellulosum)So F5-76为诱变出发菌株,经紫外(UV)和亚硝基胍(NTG)复合诱变和筛选,获得一株高产突变菌株So F5-H23,其发酵产埃博霉素B的量可达79.83 mg/L,比出发菌株提高了1.27倍。通过Plackett-Burman实验和响应面分析法对纤维堆囊菌产埃博霉素B的发酵工艺进行优化。得到最佳发酵工艺为:马铃薯淀粉4.8 g/L,葡萄糖0.5 g/L,脱脂奶粉2.3 g/L,豆饼粉2 g/L,七水硫酸镁2 g/L,无水氯化钙2 g/L,EDTA-Fe3+2 m L/L,微量元素(TE)0.5 m L/L,吸附树脂2%,培养基初始p H 7.4,装液量50 m L,接种体积分数8%,温度30℃。在此最优条件下埃博霉素B产量为108.67 mg/L,比优化前提高了36.13%,此产量是国内外报道的埃博霉素最高产量。     

1株纤溶酶菌株的筛选鉴定及提高产酶量的方法研究

从齐齐哈尔市拜泉县的自酿农家豆酱制品中分离筛选出1株产纤溶酶菌株HDBF-DJ3,对其进行菌体、菌落、生理生化特征分析,并结合16S rDNA序列分析结果,鉴定其为枯草芽孢杆菌.经亚硝基胍诱变筛选得到突变株HDBF-DJ3N7,其纤溶酶活力为368.78 IU/mL,是出发菌株的2.1倍.对菌株HDBF-DJ3N7进行连续10代的培养,结果表明该突变株的高产纤溶酶特性能够稳定遗传.该菌株有望应用到生产领域.