不同副溶血性弧菌菌株成膜能力及成膜影响因子的研究

目的:研究不同来源副溶血性弧菌的生物膜形成及粘附情况,并对多因素影响副溶血性弧菌成膜进行探究。方法:采用改良试管法和微孔板法对不同影响因子(p H 6.5~9.5;Na Cl 2%~4%)下21株副溶血性弧菌的生物膜粘附程度和生物膜量进行测定,然后运用改良微孔板法对成膜效果较好的菌株以及标准菌株Vp BJ1.1616的成膜特性进行初步研究。结果:21株菌在实验条件下成膜能力与菌株来源和细菌致病性并没有表现出明显相关性,且Vp F29成膜效果最好;在p H6.5~9.5,Na Cl 2%~4%条件下,不同菌株平均OD570nm值变异系数(CV=标准偏差/平均值)分别从0.357变化到0.447,从0.383变化到0.472;在胰蛋白胨大豆肉汤(TSB)浓度为2.4%~9.6%时,Vp F29在32~37℃条件以及Vp BJ1.1616在37℃条件下都能形成大量生物膜。结论:不同环境条件下的成膜情况说明,副溶血弧菌成膜能力的强弱具有菌株多样性以及特性规律,为研究生物膜引起的食品安全问题提供理论依据。      

水飞蓟素对副溶血性弧菌的抑制作用

目的 以两种副溶血性弧菌为研究对象,探究水飞蓟素对于副溶血性弧菌的抑制及其作用机制。方法 通过琼脂板稀释法和肉汤稀释法确定水飞蓟素对两株菌的最小抑制浓度（MIC）,然后进一步通过研究水飞蓟素在不同培养基上处理后的副溶血性弧菌的生长曲线、生物膜形成情况、细胞膜完整性及钾离子外流情况的变化,探究水飞蓟素在不同培养基上对副溶血性弧菌的抑制作用及可能的作用机制。结果 水飞蓟素能够抑制生物膜的形成,损害细胞膜,导致细胞变形,显著增加钾离子外流,来抑制副溶血性弧菌的生长,并且不同培养基的抑制作用是不一样的。结论 水飞蓟素能够对副溶血性弧菌产生较强的抑制作用,有作为天然的抗菌物质应用于食品工业的潜力。     

副溶血弧菌生物膜的形成及壳聚糖的抑制作用

考察了不同来源的副溶血弧菌生物膜的形成能力,分析了不同培养条件对副溶血弧菌生物膜形成的影响,并进一步研究了壳聚糖对生物膜形成的抑制作用。采用结晶紫法测定生物膜形成量,XTT法检测生物膜的代谢活性,苯酚-硫酸法测定生物膜的胞外多糖,分析不同浓度壳聚糖对副溶血弧菌生物膜的抑制效果。结果表明,不同菌株生物膜形成条件不同,成膜能力不同,在蟹壳上更易形成生物膜。壳聚糖表现出了较好的抑制副溶血弧菌生物膜形成的能力,最低抑菌浓度下对生物膜形成的抑制率可达70.98%,胞外多糖的减少率为78.04%,代谢活性抑制率为46.83%。     

海产品副溶血性弧菌控制研究进展

副溶血性弧菌是引起海产品食物中毒的主要致病因子。文章拟从物理、化学和生物三个方面对海产品中的副溶血性弧菌现有的控制措施进行概述,并展望未来的发展方向,以期为相关技术的应用和后续研究提供借鉴。     

副溶血性弧菌诊断血清的比较

目的比较我国自主生产和进口的副溶血性弧菌诊断血清在检出率、反应强度和特异性等方面的差异。方法使用进口和我国自主生产的诊断血清同时对35株副溶血性弧菌标准菌株和60株临床菌株进行玻片凝集,以检测其血清型。结果对于参考菌株,两者的检出率均为100%,对于临床株,两者的一致率为95%;且两者的特异性均良好。结论我国自主生产的副溶血性弧菌诊断血清性能良好,可以用于副溶血性弧菌分型鉴定。     

培养条件及表面活性剂的添加对纳豆芽孢杆菌生物膜形成的影响

采用改良的微孔板法培养纳豆芽孢杆菌(Bacillus subtilis natto),通过结晶紫染色定量分析产生的生物膜。结果表明:培养条件为pH 7、温度37℃、培养72 h且在5 g/100 mL葡萄糖-5 g/100 mL NaCl条件下成膜能力最佳。柠檬酸二铵和聚乙二醇-200(polyethylene glycol-200,PEG-200)随着质量浓度的增加对生物膜的形成量呈现先下降后上升的趋势,十二烷基磺酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)抑制生物膜的形成,十六烷基三甲基溴化铵(cetyl trimethyl ammonium bromide,CTAB)促进生物膜的形成。所以低温抑制生物膜的形成,一定浓度的NaCl和葡萄糖促进生物膜形成,不同的表面活性剂对其生物膜的影响机制不同,为纳豆芽孢杆菌生物膜的研究提供理论基础。     

丁酸钠对副溶血性弧菌毒性的影响及机制研究

目的 探究丁酸钠对副溶血性弧菌毒性的影响及机制.方法 通过测定丁酸钠对副溶血性弧菌生物膜形成能力及黏附宿主细胞能力,评估其对副溶血性弧菌毒性的影响;通过傅里叶变换红外光谱法(Fourier transform infrared spectroscopy,FT-IR)和拉曼光谱法检测胞外成分变化;逆转录聚合酶链反应(re...     

生物膜降解酶对304不锈钢上副溶血弧菌生物膜形成的抑制作用

以副溶血弧菌生物膜基质为靶点,采用96孔板结晶紫染色法筛选出纤维素酶、脂肪酶、蛋白酶k为单酶,将单酶组合为复合酶,在单因素实验的基础上,采用响应面分析法优化组合酶浓度。通过结晶紫染色、菌落计数、扫描电镜等,评价组合酶对304不锈钢上副溶血弧菌生物膜的抑制作用。响应面优化得到的组合酶中纤维素酶浓度为1.00 mg/mL,脂肪酶浓度为1.10 mg/mL,蛋白酶k浓度为1.50μg/mL时生物膜抑制率最大,为89.73%,比优化之前的各单酶相比,对副溶血弧菌生物膜的抑制率有显著性提高,与预测基本相符,说明模型拟合良好,组合酶中各单酶浓度准确可行。优化得到的组合酶有效抑制了304不锈钢上副溶血弧菌生物膜的生长,抑制率为59.35%,扫描电镜图也证实了复合酶的抑制效果。生物膜降解酶复合有效提升了对生物膜的抑制率,为致病菌生物膜的降解及消除提供了新的思路。     

副溶血性弧菌的温度预测模型

采用预测食品微生物学的方法研究了副溶血性弧菌的生长规律,测定了4～40 ℃副溶血性弧菌的生长曲线,并在此基础上建立了副溶血性弧菌的初级和二级预测模型.结果表明,在10～40 ℃,副溶血性弧菌的生长曲线呈典型的S形,适合用Gompertz和logistic模型拟合;当温度在4～10 ℃时,适合用线性回归方程拟合.副溶血弧菌的温度模型符合Ratkowsky3式,根据预测模型,副溶血弧菌的最低生长温度Tmin为5.5 ℃,最高生长温度Tmax为47.3 ℃,最适生长温度为34.6 ℃.最后,对模型进行了验证.     

香辛料提取物对副溶血弧菌生物膜的抑制作用

对大蒜、肉桂等6种天然的香辛料分别采用水和80%乙醇进行提取并筛选出对副溶血弧菌抑菌能力较强的提取物,探究这些香辛料提取物对副溶血弧菌生物膜的抑制作用。研究结果表明大蒜、肉桂、丁香具有较强的抗菌作用,而花椒、小茴香、迷迭香则相对较弱。肉桂和大蒜的乙醇提取物对副溶血弧菌的最低抑菌浓度(Minimum inhibitory concentration,MIC)皆为6.25 mg/m L。亚抑菌浓度的提取物除了能够抑制副溶血弧菌生物膜的形成,还能抑制生物膜内细菌的代谢活性,减少细菌胞外多糖的分泌。激光共聚焦扫描显微镜(Confocal Laser Scanning Microscope,CLSM)观察发现,处理后死细胞的数量明显增多,且生物膜内多糖的含量明显变少。      

副溶血弧菌在玻璃表面生物菌膜的生长特性及超声波法解离作用

本文研究了副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)在玻璃表面生物菌膜(biofilm,BF)的生长特性,生长过程中环境因素的影响及超声波对其的解离作用。采用结晶紫染色法观察生物菌膜在玻璃表面的生长形态;酶标仪在595 nm波长处测量不同培养条件下生物菌膜的生物量;平板菌落计数法衡量超声波对菌膜的解离效果。结果表明:结晶紫染色法可直观清晰观察副溶血弧菌在玻璃表面形成的生物菌膜,且随着培养时间的延长,副溶血弧菌生物菌膜形成的网状结构越来越致密。根据酶标仪测得的生物菌膜生物量的大小可得到在玻璃表面菌膜生长的最佳条件,当培养基盐度为3%,培养时间为24 h,培养时转速为70 r/min得到的副溶血弧菌生物菌膜已经成熟且菌体个数达到2.56×107 CFU/cm2。用50 k Hz超声波,采用间歇式超声波处理方法(每作用30 s间隔30 s)作用总时间4 min在保持菌体活性的同时能达到最佳解离效果。     

副溶血性弧菌生物被膜动态形成机制的转录组分析

为探究副溶血性弧菌生物被膜形成机制,在菌株生理特性分析的基础上,结合转录组测序技术,对生物被膜形成过程中的基因表达调控规律进行探究。实验测定了2株被膜差异菌株（ATCC 17802和VP-0）的胞外多糖、胞外蛋白、信号分子AI-2、细胞渗透性和生物被膜微观形态等生理指标,研究被膜差异菌株的动态形成过程。结果显示：供试菌株生物被膜形成过程,0～12 h为可逆黏附阶段,12～48 h为不可逆黏附和微菌落形成阶段,48～72 h为成熟阶段,72～144 h为解离阶段。ATCC 17802胞外多糖和蛋白在生物被膜成熟期分泌量分别是VP-0的1.67倍和2.3倍,在生物被膜形成过程中信号分子含量相差不显著（P>0.05）,激光共聚焦显微镜显示ATCC 17802呈现更聚集状态。根据转录组测序结果分析可知,3个处理组（72 h vs 8 h、48 h vs 8 h和72 h vs 48 h）分别鉴别出802、1 061个和267个显著性差异表达基因,其中分别有506、655个和96个差异基因下调,296、406个和171个差异基因上调。这些差异主要体现在能量代谢、鞭毛系统、转运系统等与生物被...     

4种防腐剂对副溶血弧菌生物膜形成的抑制作用

在确定4种防腐剂壳聚糖、山梨酸钾、脱氢乙酸钠和ε-聚赖氨酸对副溶血弧菌(Vibro parahaemolyticus)的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)的基础上,研究其对副溶血弧菌生物膜的抑制作用。采用结晶紫染色法测生物膜形成量,XTT法测生物膜代谢活性,硫酸-苯酚法测定生物膜中胞外多糖的分泌量。结果表明,壳聚糖的MIC最小,为1.25 mg/m L。4种防腐剂在MIC以及亚抑菌浓度条件下对副溶血弧菌生物膜均有明显的抑制作用,不仅抑制生物膜的形成,而且能显著降低细菌的代谢活性,减少胞外多糖的分泌,其中壳聚糖对副溶血弧菌生物膜的抑制作用最强。     

致病性与非致病性副溶血性弧菌在不同温度和接触材料表面生物被膜形成情况分析

采用结晶紫染色法分析了致病性(22株)与非致病性(17株)副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)在不同温度(4,10,15,25,37℃)及不同接触材料(聚苯乙烯、玻璃和不锈钢)表面生物被膜的形成情况。结果表明,VP生物被膜形成能力在高温条件下(25,37℃)明显强于低温条件(4~15℃),25℃是生物被膜形成的最适温度。对比3种常见的接触材料,VP在玻璃表面生物被膜形成能力最强,聚苯乙烯表面次之,不锈钢表面最弱。通过变异系数分析可知,温度对VP生物被膜形成能力影响最大,其次为接触材料。进一步分析发现,致病性菌株生物被膜形成能力显著强于非致病性菌株(p0.05)。研究表明:致病性与非致病性VP在不同温度及接触材料表面生物被膜形成能力存在差异,建议今后在食品加工过程中,可通过控温或改换接触材料,进而有效控制VP生物被膜导致的危害。     

Bactericidal effects of wine on Vibrio parahaemolyticus in oysters

The bactericidal effects of wines on Vibrio parahaemolyticus in oysters were studied to evaluate potential inactivation of V. parahaemolyticus in contaminated oysters by wine consumption. Shucked whole oyster and oyster meat homogenate were inoculated with V. parahaemolyticus and mixed with red or white wine. Survivals of V. parahaemolyticus in inoculated oysters were determined at 7 and 25 degrees C. Populations of V. parahaemolyticus in inoculated whole oysters (5.52 log most probable number [MPN] per g) decreased slightly to 4.90 log MPN/g (a 0.62-log reduction) after 24 h at 7 degrees C but increased to 7.37 log MPN/g over the same period at 25 degrees C. However, the populations in wine-treated whole oysters decreased by >1.7 and >1.9 log MPN/g after 24 h at 7 and 25 degrees C, respectively. Both red and white wines were more effective in inactivating V. parahaemolyticus in oyster meat homogenate than in whole oyster. Populations of V. parahaemolyticus in oyster meat homogenate (7.8 x 10(3) MPN/g) decreased rapidly to nondetectable levels (< 3 MPN/g) after 30 min of mixing with wine at 25 degrees C (a 3.89-log MPN/g reduction). These results suggest that chewing oysters before swallowing when eating raw oysters may result in greater inactivation of V. parahaemolyticus if wine is consumed. More studies are needed to determine the bactericidal effects of wine on V. parahaemolyticus in the complicated stomach environment.     

An Overview of Vibrio vulnificus and Vibrio parahaemolyticus

ABSTRACT: The Vibrionaceae are environmentally ubiquitous to estuarine waters. Two species in particular, V. vulnificus and V. parahaemolyticus, are important human pathogens that are transmitted by the consumption of contaminated molluscan shellfish. This document provides a comprehensive review of the current state of knowledge about these important foodborne disease agents. Topics include the epidemiology of human disease; biotypes and virulence factors; cultural and molecular‐based detection methods; phenotyping and genotyping approaches; microbial ecology; and candidate control strategies. Recent international risk assessment efforts are also described. The reader will gain an understanding of why these organisms pose a public health risk and how improving our understanding of their behavior in the environment and the host can aid in reducing that risk in the future.