茯苓菌丝蛋白双向电泳体系的建立及质谱鉴定

为建立茯苓菌丝体蛋白双向电泳体系并鉴定部分蛋白质,作者采用双向电泳技术对摇瓶培养的茯苓菌丝体蛋白进行分离,并利用MALDI-TOF/TOF对部分蛋白质进行鉴定。结果表明,2-DE图谱获得蛋白质点数较多、清晰、蛋白质点分离较完全且图谱背景清晰,挑取蛋白质点进行了鉴定。本研究确定的双向电泳条件分离蛋白质效果及重复性好,为下一步利用该方法寻找具有重要功能的新茯苓菌丝体蛋白创造了条件。     

MALDI-TOF-MS鉴定3种水稻细菌的方法

用哥伦比亚培养基培养了水稻细菌性谷枯病菌(NCPPB 2391,NCPPB 3591)、水稻细菌性条斑病菌(NCPPB 1585)、水稻细菌性褐斑病菌(NCPPB 2844),菌落采用乙醇/甲酸处理法处理后用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析其蛋白质指纹图谱。除水稻细菌性条斑病菌无匹配结果外,其它2种细菌均有正确的鉴定结果。用Bruker公司标准方法建立了水稻细菌性条斑病菌蛋白质指纹图谱库。采用水稻叶片作为空白样品添加了上述3种植物病菌,回收实验结果表明3种植物病菌均可以用本方法检测。该研究为应用MALDI-TOF-MS方法检测水稻细菌奠定了基础。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法鉴定食品中金黄色葡萄球菌

目的评价基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)对食源性金黄色葡萄球菌的鉴定效果。方法应用MALDI-TOF MS对210株食源性金黄色葡萄球菌进行鉴定,与传统的生化鉴定结果进行比较,并用SPSS19.0软件分析鉴定结果。结果 MALDI-TOF MS将210株金黄色葡萄球菌鉴定到种、属水平分别为98.10%和1.43%,与VITEK 2鉴定方法无差异(P0.05)。结论 MALDI-TOF MS具有简便、快速、准确等优点,适用于对食源性金黄色葡萄球菌进行高通量、低成本的快速鉴定。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱定性分析啤酒中糖类条件的优化

通过选择不同基质(2,5-二羟基苯甲酸、super DHB、2,4,6-三羟基苯乙酮)和设置不同啤酒样品稀释倍数(从原液到1 000倍稀释),优化了MALDI TOF MS定性分析啤酒中糖类的试验条件。研究结果显示,3种基质中,2,4,6-三羟基苯乙酮应用于MALDI TOF MS对啤酒中糖类表征的能力优于另外两种基质。当以2,4,6-三羟基苯乙酮为基质,啤酒样品稀释10倍时,MALDI TOF MS可达良好的定性分析效果。     

几种不同血清型沙门氏菌生化结果及基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱离子峰的差异性分析

目的了解不同血清型沙门氏菌生化结果差异及飞行质谱离子峰的差异性。方法选取10种不同血清型的沙门氏菌,确认其血清种类,使用VITEK2全自动微生物鉴定仪迚行生化分析,采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法(matrix-assisted laserdesorption ionization time-of-flight mass spectrometry, MALDI-TOFMS)获得蛋白质指纹图谱,幵迚行离子峰差异性分析。结果 10株不同血清型沙门氏菌尿素酶、赖氨酸、H_2S等33种生化结果无差异,而L-脯氨酸芳胺酶、乳酸盐产碱、O/129耐受等14个反应结果有个别差异;建立了10株沙门氏菌鉴定分型主要差异的离子峰数据库,幵収现菌株存在完全不同的离子峰:Sal-01具有8370.144离子峰, Sal-03具有5462.553、10927.51离子峰, Sal-06具有3013.925、6035.049离子峰, Sal-07具有3030.747、6026.629、6067.12离子峰。结论不同血清型沙门氏菌在生化结果上有一定的差异,通过MALDI-TOF-MS分析能够获得不同血清型的沙门氏菌具有差异性离子峰基础数据。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱与VITEK和rpoB基因测序三种方法对食品中葡萄球菌鉴定效果的比较

目的 比较基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flightmass spectrometry,MALDI-TOF MS)、rpoB基因测序和VITEK 2 Compact三种方法对葡萄球菌的鉴定效果.方法 同时采用三种...     

基于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱的 溶藻弧菌鉴定研究

目的建立快速检测和鉴定溶藻弧菌的方法,采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDITOF-MS)和SARAMIS分析软件,对来自水产品中的溶藻弧菌进行了检测和鉴定。方法将从样品中分离得到的可疑菌落于37℃纯化培养24、48、72 h后,分别用微生物API生化鉴定系统和MALDI-TOF-MS方法进行分析鉴定,并对MALDI-TOF-MS鉴定方法的稳定性、准确性和重复性进行初步探讨。结果不同的培养时间,24、48和72 h对MALDI-TOF-MS检测的蛋白质谱图影响较小,鉴定值分别为94.10%,93.90%,92.70%;同时用微生物API-20E生化鉴定试剂盒进行辅助分析鉴定,培养24 h后,鉴定值为97.7%,T值为0.47,但培养72 h后,鉴定值为52.4%,T值为0.15。同一样品点样2次,得到的6张图谱显示出峰位置基本一致。用标准菌株大肠埃希菌ATCC 8739和溶藻弧菌ATCC 17749纯化培养24 h后,鉴定值分别为99.90%和97.60%。结论与传统的生化鉴定方法相比,MALDI-TOF-MS和SARAMIS软件分析方法具有较高的稳定性、重复性和准确性,可以快速、准确地鉴定溶藻弧菌,可用于水产品中溶藻弧菌的高通量、低成本的快速检测鉴定。     

玉米赤霉烯酮全抗原的合成及鉴定

目的合成玉米赤霉烯酮(ZEN)的全抗原。方法将烯醇化的ZEN与阳离子化的载体蛋白(BSA)偶联,制备高特异性的全抗原,用高性能基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱仪MALDI-TOF检测偶联物及载体蛋白的分子量,用商品化的ZEN免疫试剂盒对偶联物进行棋盘滴定验证。结果全抗原及载体蛋白BSA的分子量分别为69693.5 Da、66297.7 Da,平均每个BSA连上的ZEN分子个数为10.68个;平均每个OVA上连上的ZEN分子个数为5.32个;偶联物与免疫试剂盒中ZEN的抗体呈阳性反应。结论合成的ZEN全抗原为ZEN抗体的制备及免疫学方法的建立奠定了基础。     

克罗诺杆菌属食品分离株种水平鉴定方法比较研究

目的研究食品中分离克罗诺杆菌属种的鉴定方法,旨在建立稳定、可靠的种的鉴定方法。方法本研究选择三种鉴定方法,包括生化鉴定(VITEK 2 Compact)法、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)、全基因组测序,通过比较分析三种方法对19株克罗诺杆菌属的鉴定结果,阐述三种鉴定方法的优缺点及其适用性。结果本研究中19株克罗诺杆菌属的鉴定结果显示,VITEK 2 Compact对阪崎克罗诺杆菌和丙二酸盐克罗诺杆菌的鉴定准确率只有67%和66%,而MALDI-TOF MS和全基因组测序的鉴定结果一致,因此可以判定MALDI-TOF MS能够快速、准确、高通量对克罗诺杆菌属进行种的鉴定。但是MALDI-TOF MS受限于数据库,不能鉴定到亚种的水平。结论本研究结果提示VITEK 2 Compact法不适用于克罗诺杆菌属种的鉴定;全基因组测序鉴定结果准确可靠;MALDI-TOF MS可以实现快速、高通量、准确的鉴定,仍需要进一步研究克罗诺杆菌属3个亚种的蛋白指纹图谱特点,丰富蛋白指纹图谱数据库,使其能够准确鉴定克罗诺杆菌属的7个种和3个亚种。     

金黄色葡萄球菌基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱的鉴定与聚类分型

目的 建立基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱法(matrix assisted laser desorption lonization-time of flight mass spectrometer, MALDI-TOF MS)快速鉴定金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus, S. aureus)并自建数据库, 进行聚类分型。方法 基于MALDI-TOF MS技术, 对经全自动微生物分析仪(VITEK2 COMPACT)鉴定为S. aureus的25株分离株和1株标准菌株(ATCC 25923)进行鉴定。并进一步采集26株S. aureus特征性蛋白质指纹图谱, 使用flex Analysis软件进行分析, 汇总成标准图谱并构建本地分离株S. aureus的鉴定数据库, 命名为Staphylococcus aureus。结果 经标准菌株ATCC 25923验证, 自建数据库对S. aureus鉴定结果的可信度较设备自带数据库明显提高, 鉴定分值由2.251提高到了2.845。自建数据库进一步对26株S. aureus进行聚类分型, 在差异水平100时, 24株不同来源S. aureus被聚类成24个分支, 将食品中不同来源分离的S. aureus分为24个型。结论 MALDI-TOF MS作为一种快速、准确、高通量的全新微生物鉴定技术, 实现了对S. aureus的特异性快速鉴定与分型, 能够满足公共安全卫生、突发食品安全事件和口岸快速通关方面的需求。     

鸡蛋清磷酸化蛋白质组鉴定与分析

为了系统地阐明鸡蛋清磷酸化蛋白质的结构和功能特性,本研究采用蛋白质组学策略对鸡蛋清的磷酸化修饰蛋白质组进行鉴定与分析。鸡蛋清酶解产物首先经固定化金属螯合亲和层析分离富集磷酸肽,再经纳升液相色谱-串联质谱分析和鉴定。通过数据库检索匹配,共鉴定出33 个特异性磷酸化修饰多肽,包含41 个磷酸化修饰位点,归属于25 种鸡蛋清磷酸化蛋白。基序分析显示,大多数磷酸化修饰位点的序列特征为“S-X-E”;基因本体功能注释分析表明,鸡蛋清磷酸化蛋白质主要参与“生物调节”、“刺激反应”、“发育过程”等生物学过程,主要涉及“结合”、“催化”等分子功能。本研究结果将为鸡蛋清蛋白质相关研究提供关键的磷酸化修饰结构信息。     

蛋清肽的抗氧化稳定性与功能特性

选用胃蛋白酶水解冻干蛋清制得蛋清肽,测定蛋清肽的抗氧化稳定性及功能特性。研究温度和pH值对蛋清肽抗氧化稳定性的影响以及蛋清肽的乳化性、吸水能力和吸油能力。结果表明：随着蛋清肽质量浓度的增加其清除羟自由基( ·OH)、超氧阴离子自由基(O2－ ·)及DPPH自由基的能力均随之增加;温度与pH值对蛋清肽的抗氧化活性影响较大,在pH12.0条件下存放4h后其抗氧化活性消失;蛋清肽具有较好的乳化能力、乳化稳定性、吸油和吸水能力,这些均有利于其在食品和化妆品行业中的应用。     

脱盐咸鸭蛋清促钙吸收肽的制备及脱酰胺修饰

为使咸鸭蛋清得到高值化利用,本实验以电渗析脱盐的咸鸭蛋清为原料,以可溶性钙结合量、水解度为指标,用Alcalase 2.4 L碱性蛋白酶、Neutrase 0.8 L中性蛋白酶、Protamex复合蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶对脱盐咸鸭蛋清进行酶解,筛选出最佳实验用酶为Protamex复合蛋白酶;进而对制备的蛋清肽进行了脱酰胺处理,分析蛋清肽的氨基酸含量。结果表明：适合Protamex复合蛋白酶的酶解条件为加酶量2×104 U/g、底物质量浓度30 g/L、温度50 ℃、pH 6.5,酶解3.5 h。在此条件下,水解度为21.97%,所得蛋清肽的可溶性钙结合量为29.22 μg/mL。再经脱酰胺修饰后,其可溶性钙结合量显著增加（P＜0.05）。氨基酸分析显示蛋清肽中含有较多与钙结合相关的氨基酸。以脱盐咸鸭蛋清为原料制备的肽具有较高的钙结合活性,脱酰胺修饰可使其钙结合能力显著提升。     

蛋清抗氧化肽分离纯化及结构鉴定

为了获得高活性、高纯度的蛋清抗氧化肽,以蛋清酶解物为原料,依次釆用超滤、离子交换色谱、凝胶色谱分离纯化抗氧化活性较强的肽段,运用基质辅助激光解吸离子化质谱解析肽链的氨基酸序列。结果表明:超滤法分离纯化EWPH所得的三个组分中,EWPH-Ⅲ(M_W<3 kDa)组分的DPPH自由基清除率最高,达到79.62%。离子交换层析分离纯化EWPH-III所得到的碱性组分B的DPPH自由基清除率最高,达到82.05%。凝胶过滤色谱分离EWPH-III-B所得到4组分中E组分的DPPH自由基清除率最高,为88.49%。高活性高纯度EWPH-III-B-E组分的相对分子质量为237.575,该二肽的氨基酸序列为丙氨酸-甲硫氨酸。     

蛋清蛋白质降压肽的化学及酶稳定性研究

以血管紧张素转化酶抑制活性为指标,通过Plackett-Burman 设计研究影响蛋清蛋白质降压肽化学稳定性的因素,同时考察蛋清蛋白质降压肽在模拟胃肠道环境中的抗胃蛋白酶和胰蛋白酶裂解的稳定性。结果表明：pH值、温度、光照、空气、贮藏肽溶液的质量浓度、巴氏灭菌处理、超声波及镁离子等因素对蛋清蛋白质降压肽的化学稳定性影响不显著(P ＞ 0.05);蛋清蛋白质降压肽经胃蛋白酶和胰蛋白酶水解后活性由46.0% 分别下降为13.0% 和4.0%,对胃蛋白酶和胰蛋白酶均没有良好的耐受性。     

酶解蛋清蛋白制备ACE抑制肽的工艺研究

为获取酶解蛋清蛋白制备血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽的工艺参数,研究4种蛋白酶酶解蛋清蛋白所得产物对ACE的抑制活性,筛选出胰蛋白酶作为制备蛋清蛋白ACE抑制肽的适宜用酶。运用响应曲面法研究酶解时间、底物浓度([S])和酶与底物质量比([E]/[S])对制备ACE抑制肽工艺的影响,建立以上3因素与ACE抑制率关系的数学模型。结果确定胰蛋白酶酶解蛋清蛋白制备ACE抑制肽的适宜酶解条件为酶解时间4.87h、[S]3.06%、[E]/[S]2.91%、酶解温度45℃、pH7.4,此条件下制备的蛋清蛋白酶解产物ACE抑制率达到50.73%。     

蛋清蛋白源血管紧张素转化酶抑制肽研究进展

在分析蛋清蛋白的组成及酶解性质的基础上,综述了国外蛋清血管紧张素转化酶抑制肽来源、制备方法、降压活性、酶解动力学、结构修饰和包埋技术的研究现状,并对其在食品、医药领域研究和应用的方向进行了展望。以期为我国蛋清蛋白降压肽的研究与开发提供参考。     

蛋清中溶菌酶的提取

研究了从新鲜蛋清中提取溶菌酶的方法。通过控制温度，调酸和加盐，可以使溶菌酶得到分离和纯化。采用超滤的方法将溶菌酶提取液浓缩及脱盐并进一步纯化。最后采用喷雾干燥的方法制成产品。产品活力可达１１０００ｕ／ｍｇ．