脱盐咸鸭蛋清促钙吸收肽的制备及脱酰胺修饰

为使咸鸭蛋清得到高值化利用,本实验以电渗析脱盐的咸鸭蛋清为原料,以可溶性钙结合量、水解度为指标,用Alcalase 2.4 L碱性蛋白酶、Neutrase 0.8 L中性蛋白酶、Protamex复合蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶对脱盐咸鸭蛋清进行酶解,筛选出最佳实验用酶为Protamex复合蛋白酶;进而对制备的蛋清肽进行了脱酰胺处理,分析蛋清肽的氨基酸含量。结果表明：适合Protamex复合蛋白酶的酶解条件为加酶量2×104 U/g、底物质量浓度30 g/L、温度50 ℃、pH 6.5,酶解3.5 h。在此条件下,水解度为21.97%,所得蛋清肽的可溶性钙结合量为29.22 μg/mL。再经脱酰胺修饰后,其可溶性钙结合量显著增加（P＜0.05）。氨基酸分析显示蛋清肽中含有较多与钙结合相关的氨基酸。以脱盐咸鸭蛋清为原料制备的肽具有较高的钙结合活性,脱酰胺修饰可使其钙结合能力显著提升。     

蛋清肽及肽钙配合物的制备

为获得高生物效价的补钙制剂及提高蛋清蛋白的附加值,首先对鸡蛋清进行酶法改性,筛选实验用酶,采用正交试验,分别对酶解条件及肽钙反应条件进行优化,并采用红外光谱法比较反应前后图谱的变化。结果表明：选择先碱性蛋白酶后中性蛋白酶进行双酶酶解,酶解条件为底物质量分数6%、碱性酶酶底比1:100、pH8.0、酶解时间3h;中性酶酶底比1:25、pH7.0、酶解时间3h。制备肽钙配合物最优反应条件为肽钙(CaCl2)质量比2.5:1、pH9.5、底物质量分数4%、温度55℃,在此条件下,可溶性钙含量为21.15mg/L,水解度为8.66%。制备蛋清肽时,使用双酶的水解效果优于单酶,蛋清肽与钙形成了双单齿配合物,其钙质量分数为8.75%。     

蛋清肽水解工艺及饮料配方的优化研究

以蛋清粉为原料,采用碱性蛋白酶水解蛋清蛋白制备蛋清肽饮料,利用正交试验设计优化蛋清蛋白的水解工艺和蛋清肽饮料的加工配方。结果表明,各因素对蛋清蛋白水解度影响的主次顺序为:pH温度时间。优化后蛋清蛋白的最佳水解条件为:酶解温度55℃, pH 8.5,酶解时间4 h。此条件下蛋清蛋白的水解度为32.9%,溶液DPPH清除率为42.10%。各因素对蛋清肽饮料感官评分影响的主次顺序为:蛋清水解液添加量体积分数柠檬酸添加量质量分数蔗糖添加量质量分数。优化后蛋清肽饮料的配方为:柠檬酸添加量质量分数0.4%、蛋清水解液添加量体积分数25%、蔗糖添加量质量分数12%。此条件下的蛋清肽饮料酸甜适中,滋味可口。     

花生肽钙复合物钙结合特性及氨基酸组成研究

利用花生分离蛋白通过酶解法制备花生肽,将花生肽脱酰胺处理,制备花生肽钙复合物。研究脱酰胺处理对花生肽钙结合量的影响,并分析花生肽钙复合物钙结合特性及氨基酸组成。结果表明:脱酰胺处理240 min后花生肽的钙结合量由82. 05 mg/g显著增加到135. 26 mg/g,表明脱酰胺处理可以显著提高花生肽的钙结合量;扫描电镜分析结果表明加钙反应后花生肽微观结构发生明显变化,由疏松片状结构聚合为颗粒状结构;傅里叶红外光谱分析结果表明花生肽肽链上的氨基及羧基是钙离子的主要结合位点,经脱酰胺处理羧基伸缩振动带进一步发生移动,表明脱酰胺后羧基上的氧原子与钙的配位作用得到增强,促进了花生肽钙结合量的提高;花生肽钙复合物中天冬氨酸含量为10. 76%,谷氨酸含量为23. 49%,表明酸性氨基酸含量是花生肽具有高钙结合量的重要因素。     

蛋清肽的制备及其对保加利亚乳杆菌促生长的作用

研究Alcalase碱性蛋白酶酶解蛋清制备蛋清肽和蛋清肽对保加利亚乳杆菌生长的影响。结果表明：通过Box-Behnken设计确定酶解的最佳工艺为：底物质量浓度4.5 g/100 mL、酶解pH 9.0、酶解温度64 ℃、加酶量（[E]/[S]）5.0%,此条件下,酶解3 h后水解度达21.89%。蛋清肽可显著促进保加利亚乳杆菌生长,当添加体积分数3.0%、酶解3 h的蛋清肽（分子质量主要集中在1 513 u）时,其促生长效果最好,此时,与未添加蛋清肽组相比,活菌数提高了1（lg（CFU/mL））。     

脱酰胺对葵花籽蛋白酶解肽的钙结合量及体外消化性的影响

通过谷氨酰胺酶对葵花籽蛋白酶解肽进行脱酰胺,得到脱酰胺的葵花籽蛋白酶解肽,以此为试样,研究脱酰胺对葵花籽蛋白酶解肽的钙结合能力的影响。结果发现,脱酰胺的葵花籽蛋白酶解肽的钙结合量由72.97mg/g显著增加到98.20 mg/g,说明脱酰胺可以显著提高葵花籽蛋白酶解肽的钙结合量;通过傅立叶红外光谱对脱酰胺前后葵花籽蛋白酶解肽的钙结合位点进行分析,发现葵花籽蛋白酶解肽与钙结合后,氨基的特征吸收峰均发生移动,N-H的伸缩振动带由3323cm-1移动至3340cm-1,酰胺Ⅱ带由1160cm-1移动至1656cm-1,酰胺Ⅲ带由1241cm-1移动至1246cm-1,同时脱酰胺使其酰胺Ⅰ带由1660cm-1移动至1656cm-1,说明葵花籽蛋白酶解物肽链上的氨基及羧基是钙的主要结合位点,且脱酰胺后C=0伸缩振动引起的酰胺Ⅰ带进一步向低频移动,表明脱酰胺后羧基上的氧原子与钙的配位作用得到增强,促进了葵花籽蛋白酶解肽钙结合量的提高;另一方面研究还发现脱酰胺后葵花籽蛋白酶解肽钙复合物的钙结合量能保持86%以上,与未脱酰胺的花籽肽钙复合物相比消化后的钙结合量提高24%以上。表明脱酰胺能够显著提高葵花籽蛋白酶解肽钙复合物的消化稳定性,即提高葵花籽蛋白酶解肽的钙结合稳定性。     

大豆肽螯合钙能力影响因素的研究

研究脱酰胺改性方法及改性方式、肽钙比及肽段的金属离子亲和特性对大豆肽螯合钙能力的影响。结果表明:酸法脱酰胺对大豆肽螯合钙能力的改善要优于Glutaminase酶法脱酰胺的效果;并且先酶解再脱酰胺方式的效果要优于先脱酰胺再酶解的方式;将肽钙比扩大至1∶2(质量摩尔比)后,大豆肽B的钙结合量增幅最大,由93.67 mg/g增加至129.32 mg/g;肽段的金属离子亲和能力越强,钙螯合效果越好;羧基中O原子及氨基中N原子是主要配位原子;肽键也参与了螯合;相对分子质量大于1 k Da的肽段较相对分子质量小于1 k Da的肽段更易参与钙螯合物的形成。     

油菜籽脱皮冷榨制备菜籽多肽的研究

油菜籽经脱皮冷榨得到冷榨饼,再经低温浸出脱溶得到低温粕,对低温粕提取菜籽蛋白,然后用中性蛋白酶AS1.398水解菜籽蛋白得到菜籽多肽.通过正交实验得到的最佳酶解条件是:pH7.2、温度45℃、加酶量5%(酶与原料液的质量比)、酶解时间2 h,酶解后有75%左右的蛋白质转化为可溶性肽,所得到的菜籽多肽流动性好,黏度低,热稳定性较好.     

复合酶法制备高纯度鱼基质胶原蛋白肽

利用废弃的青鱼鱼鳞制备胶原蛋白肽,不仅能够减少环境污染,还可以明显提高鱼类加工废弃物的综合利用,提高经济效益。采用青鱼鱼鳞为原料,通过测定胶原蛋白溶出率及脱钙率,优化温水清洗及盐酸脱钙的预处理条件;测定酶解液水解度及低聚肽占成品百分含量,确定并优化复合酶水解的条件,得到所需的肽。最佳工艺条件:(1)采用料液比为1∶15的50℃温水水洗2 h,可得表面无杂质、胶原蛋白溶出率仅为2.2%的鱼鳞;(2)在0.4 mol/L盐酸与料液比为1∶10条件脱钙30 min,脱钙率达94%,而其工艺过程中的胶原蛋白溶出率仅有0.15%;(3)采用2 000 U/g的木瓜+菠萝+碱性蛋白酶(1∶1∶2),50℃自然p H下酶解5 h,获得水解度47%的胶原蛋白低聚肽,其分子质量主要分布在180~1 000 u和1 000~2 000 u两段,含量分别为73.3%和16.6%。成品胶原蛋白低聚肽颜色为白色泛微黄,具有很好的溶解性。     

酸法脱酰胺结合酶解制备米蛋白肽及其与亚铁螯合工艺研究

采用米蛋白为原料,经酸法脱酰胺、蛋白酶酶解后,以FeCl_2作为铁源制备米蛋白肽亚铁螯合物。结果表明,碱性蛋白酶对米蛋白的水解效果最好,经4 h酶解后蛋白的水解度和蛋白肽得率分别达到23.4%和73.4%。酸法脱酰胺处理能有效提高米蛋白肽的得率。采用0.4 mol/L HCl在95℃处理3 h制备的脱酰胺米蛋白,其水解度和蛋白肽得率分别达到27.1%和92.6%;单因素试验表明反应温度、pH和质量比均对米蛋白肽亚铁螯合物的产品得率和螯合能力有显著影响;米蛋白肽与亚铁盐的最佳螯合工艺条件为:反应温度50℃、蛋白肽与亚铁盐的质量比2:1、pH 6.5;在此条件下其产品得率为65.2%,亚铁螯合能力最大为21.6 mg/g。