桑叶浸出液抑制MDA-MB-231细胞增殖和抑制Survivin蛋白表达

为了研究桑叶浸出液对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和对凋亡抑制蛋白Survivin的作用。本实验采用体外培养MDA-MB-231细胞,倒置显微镜观察桑叶浸出液作用后细胞形态变化;CCK-8法检测桑叶浸出液对MDA-MB-231细胞增殖的影响;流式细胞仪分析桑叶浸出液对MDA-MB-231细胞凋亡及周期的影响;Western Blot印迹法检测桑叶浸出液对凋亡抑制蛋白Survivin表达的影响。结果表明桑叶浸出液会引起MDA-MB-231生长形态的变化,抑制细胞增殖,增加细胞凋亡数量,且在桑叶浸出液作用后MDA-MB-231细胞的G0/G1期细胞明显高于正常组(p<0.05),同时桑叶浸出液降低凋亡抑制蛋白Survivin的表达,且表达量随着桑叶浸出液浓度的升高而降低。研究表明,桑叶浸出液能够抑制MDA-MB-231细胞的增殖,促进细胞凋亡及导致G0/G1期阻滞,同时能够降低凋亡抑制蛋白Survivin的表达。     

5﹣十七烷基间苯二酚对三阴性乳腺癌MDA﹣MB﹣231细胞增殖的抑制作用

为研究5-十七烷基间苯二酚(AR-C17)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的作用及其潜在机制,采用CCK-8方法检测不同处理下的细胞存活率变化;DCF-DA荧光探针法检测活性氧(reactive oxygen species, ROS)变化情况;流式细胞术测定胞内肿瘤增殖标记物Ki-67的表达,细胞凋亡的变化,线粒体膜电位的变化及自噬体的形成情况;蛋白印迹法检测Bax、Bcl-2、LC3-Ⅱ等凋亡、自噬相关蛋白的表达情况。结果表明,与对照组相比,AR-C17显著抑制了MDA-MB-231细胞存活率,促进胞内ROS的生成,降低肿瘤增殖标志物Ki-67的表达,降低线粒体膜电位,上调Bax/Bcl-2的蛋白表达比率,增加活性Caspase的表达量,诱导MDA-MB-231细胞发生线粒体途径的凋亡;同时,AR-C17能够增加LC3-Ⅱ蛋白表达量,促进自噬体形成,诱导细胞发生自噬;此外,采用自噬抑制剂与AR-C17共同作用能够降低细胞存活率,进一步促进细胞凋亡。研究结果表明,AR-C17能够诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞发生凋亡和自噬,达到抑制乳腺癌细胞增殖的作用。     

柘树果实的抗乳腺癌活性部分的提取、分离及结构鉴定

为了得到柘树果实中具有抗乳腺癌活性的化合物,以人乳腺癌细胞MDA-MB-231和人乳腺癌细胞MCF-7为细胞模型,通过噻唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）比色法评价柘树果实石油醚浸膏、乙酸乙酯浸膏、以及正丁醇浸膏粗提取物部位的功能,实验发现乙酸乙酯部位具有明显的抑制乳腺癌细胞的活性,其对乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7的IC50分别为：75.4 μg/mL和66.8 μg/mL。采用Sephadex LH-20柱层析和硅胶柱层析对乙酸乙酯部位进行分离,采用单晶X衍射对得到的化合物进行结构鉴定,得到2 种晶体主成分,分别为4’-O-甲基-吡喃异黄酮、吡喃异黄酮。采用MTT方法对获得的2 种单体进行抗乳腺癌活性研究,发现吡喃异黄酮对乳腺癌细胞MCF-7的生长抑制率达到56.7%。结果表明,柘树果实乙酸乙酯部位含有抗乳腺癌成分,且分离得到2 种类异黄酮化合物,其中吡喃异黄酮体现出一定的抗乳腺癌活性。     

飞燕草素对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞糖酵解的影响

目的:探讨飞燕草素对乳腺癌MDA-MB-231细胞糖代谢的影响。方法:以不同浓度的飞燕草素作用MDA-MB-231细胞,CCK-8检测细胞活性,免疫组化染色检测Ki67表达,划痕试验检测细胞的迁移能力;葡萄糖摄取、乳糖和三磷酸腺苷(ATP)测定试剂盒检测MDA-MB-231细胞葡萄糖摄取、乳糖和ATP的生成,己糖激酶(HK)活性试剂盒检测HK活性;蛋白质印迹法检测HK、丙酮酸激酶(PK)、乳酸脱氢酶A(LDHA)和M2-型丙酮酸激酶 2(PKM2)表达。结果:飞燕草素能明显抑制MDA-MB-231细胞增殖,20和40 μmol/L飞燕草素能分别降低细胞存活率至75%和72%(P<0.05);20、40 μmol/L飞燕草素能降低乳腺癌MDA-MB-231细胞Ki67表达阳性的细胞数量,差异有统计学意义(P<0.01);飞燕草素能降低乳腺癌细胞葡萄糖的摄取,降低细胞乳糖和ATP的生成,抑制PKM2、HK和LDHA蛋白的表达,降低p-Akt和p-mTOR蛋白表达。结论:飞燕草素能抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞糖代谢,抑制Akt/mTOR通路活性可能是飞燕草素抑制乳腺癌细胞糖酵解的机制。     

羊肚菌多糖抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和诱导细胞凋亡研究

以黑脉羊肚菌多糖为原料,研究羊肚菌多糖对人乳腺癌细胞MDA-MB-231（以下简称MDA）增殖和凋亡的影响。结果表明：在无细胞毒性范围内,羊肚菌多糖能显著抑制人乳腺癌细胞MDA的增殖,半数有效浓度（median effective concentration,EC50）值为0.096 mg/mL,同时人乳腺癌细胞MDA表现出多种细胞凋亡的形态学变化。免疫印迹检测实验结果显示,羊肚菌多糖能抑制B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）蛋白表达,促进Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein,Bax）表达,同时增加Bax/Bcl-2蛋白表达比值,并呈现出剂量依赖效应。说明羊肚菌多糖能抑制人乳腺癌细胞MDA增殖,促进细胞凋亡。     

野生苦菜体外抗氧化及抑制肿瘤活性研究

以野生苦菜为原料,采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)清除能力、2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)清除能力、羟基自由基清除能力和铁离子还原能力法评定其抗氧化能力,采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法评定苦菜提取物对雌激素依赖性人类乳腺癌细胞MCF-7和雌激素非依赖性人乳腺癌细胞MDA-MB-231的抑制活性。结果表明,苦菜甲醇提取物对ABTS、DPPH都具有较强的清除能力,且具有较强的铁离子还原能力,对雌激素依赖性人类乳腺癌细胞MCF-7和雌激素非依赖性人乳腺癌细胞MDA-MB-231均有显著的抑制活性。苦菜的甲醇提取物对MCF-7和MDA-MB-231半抑制率分别为99、107μg/mL。     

鲍鱼肽的制备及其抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖作用

将鲍鱼内脏进行蛋白酶解、超滤和纳滤制备鲍鱼肽,研究不同质量浓度鲍鱼肽对体外培养人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响。结果表明：鲍鱼肽中除含有71.62%（质量分数,下同）蛋白以外,还含有3.38%碳水化合物和11.48%灰分;鲍鱼肽的分子质量主要分布在350～1 000 Da,丰度较高的蛋白肽分子质量分布在350 Da 附近,表明鲍鱼肽中由2～3 个氨基酸组成的寡肽占比较高。根据四甲基偶氮唑蓝法检测的结果,发现不同质量浓度（1、2、4、8 mg/mL）鲍鱼肽均能抑制MDA-MB-231细胞的生长增殖,并呈现出明显的剂量依赖性。伴随鲍鱼肽质量浓度的增加,贴壁细胞数量逐渐减少,细胞变圆,且部分细胞核出现浓缩。流式细胞术分析结果表明,鲍鱼肽主要将MDA-MB-231细胞阻滞在S期和G2期,诱导MDA-MB-231细胞凋亡和坏死,进而抑制肿瘤细胞增殖。因此,利用鲍鱼内脏制备的蛋白肽是一种具有发展潜力的辅助抗肿瘤功能性食品。     

Delphinidin抗乳腺癌EMT体外效应研究

研究飞燕草素(Delphinidin,Dp)抑制HER-2~+乳腺癌细胞(MDA-MB-453)和HER-2~-乳腺癌细胞(MCF-7)上皮细胞-间充质转化(EMT)效应。将不同浓度Dp分别处理MDA-MB-453和MCF-7细胞48 h,于倒置显微镜观察细胞形态及数量变化后,用蛋白质免疫印迹法和逆转录聚合酶链反应检测EMT标志性蛋白E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Fibronectin及关键调控因子锌指转录因子(Snail 1)表达。80μmol/L和100μmol/L的Dp能使MDA-MB-453和MCF-7乳腺癌细胞的E-cadherin标志蛋白表达上调,而降低与细胞迁移和侵袭能力有关的N-cadherin、Vimentin、Fibronectin及Snail因子表达水平。Dp体外具有抗MDA-MB-453和MCF-7乳腺癌EMT的效应,研究结果可为植物黄酮类化合物抗乳腺癌转移及辅助治疗提供新支撑。     

蒲公英萜醇对人乳腺癌细胞MCF-7增殖及凋亡的影响

目的：探讨蒲公英萜醇对人乳腺癌细胞MCF-7增殖、凋亡的影响及其可能的分子机制。方法：体外培养人 乳腺癌细胞MCF-7,采用噻唑蓝比色法和平板克隆实验检测蒲公英萜醇对MCF-7细胞增殖的影响;Hoechst 33342荧 光染色法检测细胞凋亡的形态变化;Western blot法检测凋亡相关蛋白的表达。结果：蒲公英萜醇对人乳腺癌细胞 MCF-7有明显的增殖抑制作用（P＜0.05）;Hoechst染色结果显示,给药后细胞核内染色质凝集,核固缩,可见凋 亡小体;Western blot结果显示,蒲公英萜醇可极显著提高Bax/Bcl-2的比值（P＜0.01）以及上调活化型Caspase-3/9 的表达（P＜0.01）,下调PARP的表达（P＜0.01）。结论：蒲公英萜醇能够明显抑制人乳腺癌细胞MCF-7增殖, 并通过线粒体途径诱导其凋亡。     

纳豆脂肽对人乳腺癌细胞MCF-7的作用

目的:研究纳豆脂肽对人乳腺癌细胞MCF-7的作用。方法:通过酸沉、有机溶剂提取以及活性炭吸附等方法从纳豆发酵液中提取纳豆脂肽。MTT法测定纳豆脂肽对MCF-7细胞增殖的影响;流式细胞仪检测纳豆脂肽对MCF-7细胞凋亡和周期的影响。结果:纳豆脂肽对人乳腺癌细胞MCF-7的增殖有显著抑制作用且抑制率随纳豆脂肽浓度的增加而上升,其IC50为3.68μg/mL。纳豆脂肽可以影响MCF-7细胞的凋亡率,并将细胞周期阻滞在S期。结论:纳豆脂肽能显著抑制体外培养的人乳腺癌细胞MCF-7的增殖,引起人乳腺癌细胞MCF-7的凋亡。     

beta-Sitosterol enhances tamoxifen effectiveness on breast cancer cells by affecting ceramide metabolism

The objective of this study was to investigate the effects of the dietary phytosterol beta-sitosterol (SIT) and the antiestrogen drug tamoxifen (TAM) on cell growth and ceramide (CER) metabolism in MCF-7 and MDA-MB-231 human breast cancer cells. The MCF-7 and MDA-MB-231 cell lines were studied as models of estrogen receptor positive and estrogen receptor negative breast cancer cells. Growth of both cell lines as determined using the sulforhodamine B assay was inhibited by treatment with 16 microM SIT but only MCF-7 cell growth was inhibited by treatment with 1 microM TAM. The combination of SIT and TAM further inhibited growth in both cell lines, most significantly in MDA-MB-231 cells. CER is a proapoptotic signal and CER levels were increased in both MCF-7 and MDA-MB-231 cells by individual treatment with SIT and TAM and the combined treatment raised cellular CER content even further. SIT and TAM raised CER levels by different means. SIT potently activated de novo CER synthesis in both MCF-7 and MDA-MB-231 cells by stimulating serine palmitoyltransferase activity; whereas TAM promoted CER accumulation in both cell types by inhibiting CER glycosylation. These results suggest that the combination regimen of dietary SIT and TAM chemotherapy may be beneficial in the management of breast cancer patients.     

豆粕中大豆异黄酮的超声辅助提取工艺研究

以大豆异黄酮提取率为指标,豆粕为原料,采用超声波辅助提取大豆异黄酮。在单因素的基础上,通过正交试验确定提取豆粕中大豆异黄酮的最佳工艺条件。结果表明,从豆粕中提取大豆异黄酮的最佳工艺条件为:料液比为1∶20,乙醇浓度为80%,超声时间为30 min,超声温度为60℃。在此工艺条件下,大豆异黄酮的平均提取率为0.3522%。     

大豆豆脐中异黄酮的提取工艺优化

为了提高大豆豆脐在大豆加工行业的利用率以及更大程度地发挥大豆豆脐的营养价值,本文在国标大豆异黄酮检测方法的基础上,建立了一套适用于测定大豆豆脐中异黄酮含量的高效液相色谱方法。本实验以大豆豆脐为原料,采用乙醇-水溶液作为提取溶剂,通过单因素实验和正交实验确定超声波辅助提取大豆异黄酮的最佳工艺,结果表明:各因素对大豆异黄酮提取率影响大小的顺序为:提取温度(B)>提取时间(C)>料液比(D)>乙醇浓度(A);在乙醇浓度为80%、提取温度为80℃、提取时间为1.5h、料液比为1:35 g/mL时提取三次,大豆异黄酮的提取率可达10.88±0.120 mg/g。本方法准确、高效,能够提取出原料中90%以上的大豆异黄酮,该提取工艺稳定可行,可为大豆豆脐中异黄酮的提取提供理论依据。     

发芽大豆异黄酮提取工艺条件的研究

首先采用大豆为原料制备发芽大豆,以异黄酮得率为指标,确定最佳发芽时间为96h.继而对发芽大豆中异黄酮的提取工艺条件进行研究,在单因素实验结果的基础上,进行正交实验确定最佳提取工艺条件,其结果为超声功率400W、超声波时间40min、乙醇浓度80%、回流时间1.5h,在此条件下异黄酮得率为3.774mg/g.     

Evaluation of biological activities of a groundnut (Apios americana Medik) extract containing a novel isoflavone

Groundnut (Apios americana Medik) contains a novel isoflavone, genistein-7-O-gentiobioside. In the present study, we examined the biological activities of an alcohol extract of groundnut containing genistein-7-O-gentiobioside as the main component. Although the groundnut extract by itself did not show antioxidative activity, it drove the antioxidative system in cells. Pretreatment of human breast carcinoma MCF-7 cells for 24 h with the groundnut extract and soybean isoflavone increased gene expression of heme oxygenase-1 (HO-1), a major antioxidative stress enzyme. These groundnut extract-treated cells showed antioxidative activity against free radicals derived from a radical initiator. Pretreatment of cells with 100 μg/mL groundnut extract prevented the depletion of glutathione by the radical initiator; however, treatment with 100 μg/mL of soybean isoflavone injured the cell membrane, indicating that glutathione might be released to the extracellular environment. These results suggest that the groundnut extract had isoflavone-like activity. Like soybean, groundnuts are a good source of isoflavones.     

Urinary isoflavone excretion in Korean adults: comparisons of fermented soybean paste and unfermented soy flour

BACKGROUND: This study compared the 24 h urinary excretion of isoflavone algycones after the consumption of fermented soybean paste or unfermented soy flour in a population of healthy Koreans (four males and five females). An equivalent amount (20 mg) of total isoflavone was consumed as either 52 g of soybean paste or 12.2 g of soy flour in a randomised, crossover trial consisting of two single‐time‐point feedings and having 3 day run‐in and washout periods between feedings. RESULTS: Analysis of starting materials indicated that daidzein (1.4%) and genistein (1.4%) constituted a smaller proportion of the total isoflavones in soy flour as compared with soybean paste (55.3% daidzein and 45.7% genistein). Free and glycosidic forms of isoflavones differed significantly between the two soy products. Levels of β‐glycosides as well as total glycosides (β‐glycosides, malonyl and acetyl forms) were two‐fold higher in soy flour as compared with soybean paste. Malonyl forms predominated in soy flour. CONCLUSIONS: The consumption of soybean paste resulted in significantly higher urinary excretion of both daidzein and genistein as compared with soy flour (P < 0.05 and P < 0.01 respectively). Copyright © 2007 Society of Chemical Industry     

亚临界水提取大豆胚芽中异黄酮及低聚糖的研究

以大豆胚芽为原料、高压反应釜为反应容器,应用亚临界水为溶剂、采用高纯氮气加压提取大豆胚芽中异黄酮及大豆低聚糖。利用紫外分光光度法测定大豆异黄酮的含量。选取液料比、提取时间、提取温度、压力4个因素进行单因素试验,再进行正交试验优化亚临界水提取大豆异黄酮的条件。结果表明:在液料比25:1,浸提温度120℃,浸提时间40 min,浸提压力1.9 MPa的条件下,大豆异黄酮的得率是1.09%,大豆异黄酮粗提物的产率为6.52%,粗提物纯度是2.60%;大豆低聚糖粗提物产率是35.2%。     

大豆异黄酮提取及其生物转化的研究进展

大豆异黄酮是大豆生长过程中形成的一种次级代谢产物,主要以糖苷和游离苷元的形式分布于大豆的子叶和胚轴中。研究表明,游离型大豆异黄酮具有许多重要的生理功能,诸如抗氧化、抗癌抑癌、保护心血管、预防骨质疏松及女性更年期综合症等。随着科学技术的进步,大豆异黄酮的应用日趋广泛。对国内外大豆中异黄酮的提取方法及其优缺点,以及由糖苷型大豆异黄酮转化为游离苷元的方法进行综述,以期为大豆异黄酮的应用研究提供帮助。     

大豆萌发过程中异黄酮变化及提升策略

异黄酮在人体内具有丰富的生理活性，被证明在抗氧化及预防乳腺癌、前列腺癌、骨质疏松症和心血管疾病等方面都有积极的作用，因而逐渐受到功能性食品开发的青睐。萌发是改善植物中营养价值的常见手段，而大量研究结果表明，胁迫环境下的萌发能进一步的提升大豆中异黄酮含量、改善其异黄酮组成。因此多种胁迫萌发的条件被用于评估大豆异黄酮含量的提升效果。本文阐述了萌发以及萌发的环境因素对大豆异黄酮含量的影响以及萌发过程中豆芽不同部位中异黄酮含量的变化差异，并重点介绍了多种提升豆芽异黄酮含量的胁迫策略。以期能够为功能性食品的开发提供帮助，并更加全面了解该领域的研究进展。