异丙威单克隆抗体的制备及鉴定

异丙威是我国农业生产中常见的杀虫剂,在果蔬、粮食和烟草等中都有广泛应用,然而这类农药也具有较强生物毒性。为了制备异丙威单克隆抗体,以实现对农药异丙威药物的快速检测。本文以2-异丙基苯酚等为原料,合成异丙威半抗原及人工抗原,并通过免疫小鼠、细胞融合、克隆、筛选获得单克隆抗体细胞株,经腹水诱导法及辛酸-硫酸铵沉淀法制得异丙威单克隆抗体,通过间接竞争ELISA法对抗体的特异性进行鉴定。结果表明,制备的异丙威单克隆抗体检测范围为1.88~82.80 ng/m L,抗体的IC50为11.70ng/m L,最低检测限为0.54 ng/m L,抗体与克百威、西维因、涕灭威、灭多威、2-异丙基苯酚5种异丙威结构类似物均无明显交叉反应,具有高特异性,能够满足农产品中异丙威残留检测的要求。异丙威单克隆抗体的制备为异丙威快速检测产品的开发奠定了基础。     

呋喃唑酮残留标示物人工抗原合成与抗体制备

以乙醇肼和碳酸二甲酯为原料,合成2种半抗原3-氨基-2-恶唑烷酮(AOZ)和3-(4-羧基苯亚甲基)-氨基-2-恶唑烷酮(CPAOZ),经戊二醛法和碳二亚胺法将半抗原与牛血清蛋白(BSA)偶联合成2种人工抗原AOZ-BSA和CPAOZ-BSA,产物经紫外光谱扫描分析鉴定。用2种人工抗原采取不同程序免疫新西兰大白兔,获得8组多克隆抗体。AOZ-BSA抗体效价1:0.8×104～1:3.2×104,对AOZ灵敏度低,IC50均大于100μg/ml。CPAOZ-BSA抗体效价1:1.6×105～1:6.4×105,对AOZ与苯甲醛衍生物N-苯亚甲基-3-氨基-2-恶唑烷酮(PAOZ)灵敏度高,IC500.91～11.56ng/ml,特异性好,仅与呋喃唑酮(交叉反应率6.15%)、3-(2-硝基苯亚甲基)-氨基-2-恶唑烷酮(NPAOZ,交叉反应率5.73%)有交叉反应,与衍生试剂苯甲醛和其他药物没有交叉反应(交叉反应率<0.01%)。本研究制备出AOZ特异性抗体,为我国开发AOZ酶联免疫试剂盒奠定基础。     

一种检测杂环胺类化合物的酶联免疫检测方法的建立

为了制备一种广谱性杂环胺抗体,并建立一种可以实现多种杂环胺同时检测的快速分析方法。以杂环胺2-氨基-3,4-二甲基咪唑[4,5-f]喹喔啉(MeIQx)为原料,将其与丁二酸单甲酯酰氯(MCO)反应合成杂环胺半抗原,通过活化酯法将半抗原与蛋白偶联制备免疫原进一步制备多克隆抗体,最终建立间接竞争酶联免疫分析方法(ic-ELISA)。该方法灵敏度(IC₅₀,以MeIQx计)为81.16 μg/L,检测限(IC₁₅)为12.07 μg/L。方法对喹啉类杂环胺(IQ、MeIQ)、喹喔啉类杂环胺(IQx、MeIQx、4,8-DiMeIQx、7,8-DiMeIQx、4,7,8-TriMeIQx)以及吡啶类杂环胺(PhIP)具有相同的识别能力,交叉反应率均达到93%以上。油炸牛肉和肉松样品中杂环胺(MeIQx)添加回收率在91.18%~98.64%之间,检测结果与液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)有很好的一致性(R2=0.9927)。本文建立的酶联免疫分析方法可以实现喹啉类、喹喔啉类以及吡啶类杂环胺总量的检测,为热加工肉制品中杂环胺的检测提供了一种简单、准确的快速检测方法。     

呋喃它酮代谢物5-甲基吗啉-3-氨基-2-恶唑烷酮单克隆抗体的制备、鉴定与胶体金免疫层析试纸条的研制

目的:制备5-甲基吗啉-3-氨基-2-恶唑烷酮(AMOZ)单克隆抗体,并建立AMOZ胶体金试纸条检测方法.方法:AMOZ与对醛基苯甲酸反应生成半抗原CP-AMOZ,将CP-AMOZ与BSA、OVA偶联制备完全抗原.免疫小鼠后制备腹水型抗体,ELISA检测抗体效价与其对CP-AMOZ半抑制浓度(IC50)和最低检测限(LOD),并检测抗体的特异性.胶体金与单抗偶联,同时在NC膜上包被完全抗原、兔抗鼠多抗分别作为检测线和质控线,制备免疫层析试纸条,测定试纸条的灵敏度与特异性.结果:成功制备CP-AMOZ-BSA、CP-AMOZ-OVA完全抗原及抗CP-AMOZ的单抗,抗体效价为1∶1.6×105,对CP-AMOZ IC50为0.86μg/L,LOD 0.07 μg/L,与其他硝基呋喃类药物代谢物及其衍生物均无交叉反应.制备的胶体金试纸条灵敏度5 μg/L.结论:成功合成了CP-AMOZ的完全抗原,免疫小鼠后制备了特异性强的单抗,并以此为基础研制出敏感、特异的胶体金快速检测试纸条.     

五种药食同源花提取物体外协同抗氧化作用

通过1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除试验和2,2-偶氮二(2-甲基丙基咪)二盐酸盐(2,2-azobis-(2-amidinopropane)dihydrochloride,AAPH)诱导红细胞溶血试验评价菊花、金银花、槐花、代代花、白扁豆花水提物和水提物的复配物(菊花50%,槐花18%,白扁豆花15%,代代花12%,金银花5%)的抗氧化性,并讨论五种药食同源花的协同抗氧化作用。结果表明五种药食同源花的提取物及其复配物均具有一定程度的抗氧化能力。在DPPH体系中,根据自由基的半数清除率(IC₅₀值),各提取物抗氧化能力大小顺序为复配物(IC₅₀=97.83 μg/mL) > 槐花(IC₅₀=98.63 μg/mL) > 菊花(IC₅₀=140.79 μg/mL) > 金银花(IC₅₀=146.35 μg/mL) > 代代花(IC₅₀=692.24 μg/mL) > 白扁豆花(IC₅₀=701.51 μg/mL),复配物表现出明显的协同抗氧化效果。AAPH诱导红细胞溶血体系中,复配物和槐花提取物表现出很强的溶血抑制作用,而金银花、菊花、代代花以及白扁豆花提取物仅表现出较弱的抑制作用。剂量在50~300 μg/mL时槐花提取物对红细胞的溶血抑制率小于复配物,当剂量达到300 μg/mL时,槐花提取物和复配物对红细胞的溶血抑制率分别为77.83%±1.85%和80.94%±1.46%,这说明五种药食同源花提取物之间存在协同抗氧化作用。     

液相色谱-串联质谱法测定植物源性食品中 16种氨基甲酸酯类农药及其代谢物

目的 建立液相色谱-串联质谱法测定植物源性食品中16种氨基甲酸酯类农药及其代谢物(涕灭威、涕灭威亚砜、涕灭威砜、灭害威、恶虫威、甲萘威、克百威、乙霉威、仲丁威、茚虫威、异丙威、灭多威、速灭威、杀线威、抗蚜威和残杀威)残留量的方法。方法 样品用0.1%冰醋酸-乙腈提取, 提取液经过滤、浓缩后用石墨化炭黑/氨基固相萃取柱净化, 采用多反应监测(multi-reaction monitoring, MRM)正离子扫描模式进行准确的定性和定量分析。结果 16 种氨基甲酸酯类农药在5~500 ng/mL浓度范围内均呈良好线性。16种农药在苹果、菠菜、山药、大米、大豆和生姜6种基质中的检出限和定量下限为2.0 μg/kg和5.0 μg/kg, 在低、中、高3 个水平的加标回收率为71.0%~108.0%之间, RSDs (relative standard deviations)为2.03%~11.30%。结论 该方法简单快速,其灵敏度、准确度和精密度均能满足农药残留分析的要求。     

花生致敏蛋白Ara h 3单克隆抗体的制备及其免疫学特性鉴定

以Ara h 3为免疫原免疫小鼠。选取血清效价高的小鼠再次免疫，制备出脾细胞后与骨髓瘤细胞一起进行细胞融合，得到杂交瘤细胞株，筛选阳性株制备大量单克隆抗体。通过酶联免疫吸附试验(ELISA)对制备的单克隆抗体进行效价测定、敏感性测定和特异性测定。通过蛋白质免疫印迹试验进一步验证其特异性。结果表明：免疫性较好的4B2单克隆抗体经纯化后的效价为1∶5.12×10⁵。由敏感性测定得知4B2单克隆抗体的半抑制浓度(IC₅₀)为389 ng/mL,证明其具有较好的敏感性，交叉反应率小于0.5%,成功制备出纯度高、效价高、敏感性好、特异性强的Ara h 3鼠源单克隆抗体，为建立免疫学快速检测方法奠定了基础。     

一种异丙威胶体金免疫快速检测试纸条的研制

农产品的农药残留检测方法较多，异丙威作为速效性农药，应用较为广泛，但是检测异丙威的快速检测方法极少。该研究通过制备异丙威半抗原，研制出一种能够检测蔬菜、水果中异丙威的胶体金免疫层析试纸条。结果表明，该试纸条对蔬菜、水果等农产品中异丙威的最低检出限为10 μg/kg，检测时间仅为15 min，假阳性率和假阴性率均为0。与甲草胺、亚胺菌、乙霉威和异丁草胺等药物无交叉反应，技术指标均符合《农残办技术材料要求及审查程序》要求。该试纸条检测快速、便捷，能够应用到基层实验室的大批量样本检测，具有实际意义。     

各食用米中活性成分及其抗氧化活性

本研究以黑米、白糯米、大米、黄米、糙米、香米、玉米、薏米、西米、高粱米10种常见食用米为研究对象,测定其总黄酮、总酚含量及其体外抗氧化活性。结果显示供试食用米品种间的总酚和总黄酮含量分别在2.61~287.61 mg/g和3.79~175.43 mg/100 g之间,黑米总酚、总黄酮含量最高(分别为287.61±18.38 mg/g和175.43±3.25 mg/100 g),西米的含量均最低(分别为2.61±0.04 mg/g和3.79±0.06 mg/100 g);黑米乙醇提取液的总抗氧化能力(354.18 U/g)和总还原力(吸光度为2.91)最强,大米提取液的总抗氧化能力(4.62 U/g)最弱,而西米的总还原力(5倍稀释时吸光度为0.11)最弱;黑米对DPPH·的清除能力最高(当加入量为2 μL时清除率为50%,IC₅₀=2 μL),西米的清除能力最弱(当加入体积大于105 μL时清除率为50%,IC₅₀>1×105 μL);黑米对·OH的清除能力最高(IC₅₀=250倍稀释),西米的最低(IC₅₀=1.71倍稀释);黑米对NO₂-的清除能力最高(IC₅₀=500倍稀释),玉米为最低(IC₅₀=2.97倍稀释);西米和糯米对O₂-·的清除能力最高(IC₅₀>105倍稀释),玉米最低(IC₅₀=2.467倍稀释)。综合比较发现黑米具有较丰富的生物活性物质,抗氧化活性相对较好,本研究为进一步开发功能性米类产品提供一定的理论基础。     

酶联免疫法快速检测保健食品中吲哚美辛和阿西美辛

针对保健食品中吲哚美辛和阿西美辛的非法添加问题，以吲哚美辛和阿西美辛分别作为免疫半抗原和包被半抗原，通过活泼酯法与载体蛋白偶联制备完全抗原，免疫动物筛选获得了可同时识别吲哚美辛和阿西美辛的兔多克隆抗体，并建立了抗风湿类保健食品中吲哚美辛和阿西美辛同时检测的间接竞争酶联免疫分析方法。方法对吲哚美辛的检出限为0.3 ng/mL,半抑制质量浓度(IC₅₀)为5.6 ng/mL,线性范围为0.9～32.9 ng/mL;对阿西美辛的检出限为1.1 ng/mL,IC₅₀为7.4 ng/mL,线性范围为2.2～24.3 ng/mL;与多种非甾体抗炎药无交叉反应。片剂、硬胶囊和软胶囊3种剂型的抗风湿类保健食品经甲醇超声提取，通过标准稀释液稀释消除基质效应，吲哚美辛和阿西美辛的添加回收率为80.0%～119.7%,相对标准偏差低于15%;检测结果与液相色谱-串联质谱法检测结果的线性相关系数均大于0.99,结果一致性良好，可用于保健食品中吲哚美辛和阿西美辛的快速筛查。     

呋喃西林代谢物单克隆抗体的制备及免疫学特性鉴定

为建立呋喃西林代谢物氨基脲（semicarbazide,SEM）的免疫学检测方法,采用碳化二亚胺法成功合成人工免疫抗原SEM-牛血清白蛋白（bovine serum albumen,BSA）（SEM-BSA）,并用该抗原免疫BALB/c小鼠,采用聚乙二醇介导的细胞融合技术制备SEM的单克隆抗体（SEM mAb）,采用辛酸-硫酸铵沉淀法纯化单抗,并对其效价、敏感性、特异性和亲和力等免疫学特性进行鉴定。结果表明：成功制备SEM单克隆抗体SEM-3D9,抗体效价达到1∶5×106,敏感性半抑制质量浓度为0.42 μg/L,亚型为IgG1,亲和常数Ka=2.1×108 L/mol,与呋喃唑酮代谢物2-NP-3-氨基-2-恶唑酮、呋喃它酮代谢物2-NP-5-甲基吗啉-3-氨基-2-唑烷基酮类似物的交叉反应率（cross reaction,CR）均小于0.01%,与呋喃妥因代谢物2-NP-1-氨基-2-乙内酰的CR为0.016 8%,特异性良好。     

三种香茅精油的化学成分及体外抗氧化和抗炎活性评价

采用气相色谱-质谱联用法（GC-MS）测定爪哇香茅（Cymbopogon winteranus）、柠檬草（C. citratus）和芸香草（C. distans）三种植物精油的化学成分,并通过DPPH法及炎症因子NO生成量检测法评价这三种植物精油的抗氧化活性和抗炎活性。结果表明,三种香茅属植物精油化学成分以萜类物质为主,含量为76.35%~90.52%,其中萜醛、萜醇类物质含量最高。爪哇香茅、柠檬草和芸香草的主要成分分别为（+）-香茅醛（37.85%）、反式柠檬醛（36.12%）和香叶醇（34.76%）;三种香茅属植物精油的DPPH自由基清除能力呈一定的剂量依赖性,但与阳性对照抗坏血酸(IC₅₀值为(0.005±0.002) mg/mL)相比,抗氧化活性较差;在较低浓度（2~4 μg/mL）时,香茅属植物精油减少LPS致炎模型的NO生成能力与10 μmol/L地塞米松（Dexamethasone,Dex）相当,表明这三种香茅属植物精油具有良好的抗炎活性,其中柠檬草（IC₅₀值为（0.472±0.121） μg/mL）的抗炎活性最好,其次为爪哇香茅（IC₅₀值为（0.632±0.147） μg/mL）和芸香草（IC₅₀值为（0.669±0.131） μg/mL）。因此,三种香茅属植物精油具有较大的开发潜力开发成抗炎药物和抗炎功能产品。     

纤维素酶辅助超声法提取葛根多糖及其DPPH自由基清除能力

本文以柴葛根为原料,以纤维素酶辅助超声法提取葛根多糖的工艺并对其DPPH自由基清除能力进行研究。在单因素研究结果基础上,确定纤维素酶的用量、超声功率、超声时间和超声温度四因素三水平Box-Benhnken组合试验,优化多糖得率条件。结果表明:在纤维素酶用量6.0%,超声功率280 W,超声时间为52 min,超声温度65℃条件下,多糖得率为4.93%±0.02%,与预测值的误差在2%之内。酶辅助超声法提取的葛根多糖对DPPH清除自由基能力IC₅₀值为954.97 μg/mL,热回流法的IC₅₀值为1379.60 μg/mL,维生素C为131.07 μg/mL。因此,纤维素酶辅助超声法提取葛根多糖具有较强清除DPPH自由基活性,为葛根多糖的开发利用的IC₅₀值提供依据。     

辐照红景天乙醇提取物的抗氧化作用及美白作用研究

目的:探讨60Co-γ射线辐照处理对红景天乙醇提取物抗氧化及美白作用的影响。方法:本试验所用红景天经不同剂量(5、10、20、30 kGy)的60Co-γ射线辐照处理后,采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除率、2,2'-联氨-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二氨盐(ABTS)自由基清除率及铁离子还原能力(FRAP)、酪氨酸酶抑制实验、小鼠B16黑色素瘤细胞实验,评价辐照红景天提取物的抗氧化活性及美白活性。结果:与未辐照组相比,辐照组红景天提取物的抗氧化活性及美白活性均增加,其中20 kGy辐照组红景天提取物效果最佳,清除DPPH自由基的IC₅₀值为3.75 μg/mL、清除ABTS自由基的IC₅₀值为44.88 μg/mL、铁离子还原能力FRAP值为(1.90±0.05) mmol/mg、抑制酪氨酸酶的IC₅₀值为244.10 μg/mL、能够有效降低小鼠黑色素瘤细胞中黑色素的合成,并在浓度为0.50%以下时无细胞毒性。结论:20 kGy的60Co-γ射线辐照处理红景天乙醇提取物的抗氧化活性最强,并具有良好的美白功效。     

雀嘴茶中三大酚类成分的抗氧化活性和酪氨酸酶抑制活性分析

为深入挖掘雀嘴茶的利用价值,本文以其中含量丰富的6’-O-咖啡酰熊果苷(CA)、β-熊果苷和绿原酸三大酚类成分为研究对象,对其抗氧化活性和酪氨酸酶抑制活性进行分析。结果表明,雀嘴茶三大酚类成分均表现出较好的抗氧化活性,6’-O-咖啡酰熊果苷(CA)、β-熊果苷和绿原酸清除DPPH自由基的IC₅₀值分别为13.56±0.14、104.41±6.52和8.42±0.21μg/mL,清除ABTS⁺自由基的IC₅₀值分别为18.01±0.06、50.60±1.25和26.93±0.38μg/mL,清除OH自由基的IC₅₀值为2.64±0.06、>10.00和<1.00 mg/mL,对铁离子总还原能力的强度依次为绿原酸>CA>β-熊果苷;雀嘴茶三大酚类成分对酪氨酸酶的抑制活性差异较大,CA对酪氨酸酶兼具单酚酶和二酚酶抑制作用,其IC₅₀值分别为1.114±0.035和95.198±1.117μmol/L,β-熊果苷仅有单酚酶抑制作用,IC₅₀...