直接竞争酶联免疫法测定呋喃妥因代谢物

目的建立动物组织中呋喃妥因代谢物1-氨基乙内酰脲的直接竞争酶联免疫(ELISA)检测法,为检测食品中呋喃妥因代谢物残留提供快速检测的方法。方法采用活化酯法制备辣根过氧化物酶标记抗原,并用棋盘法确定酶标抗原和抗体的稀释度,优化反应条件,建立检测呋喃妥因代谢物的直接竞争酶联免疫法,并对其进行方法学评价。结果该方法的线性方程为Y=-34.723X+158.01(r2=0.9922),线性检测范围为0.177~11.508ng/m L,IC50为1.291 ng/m L;猪肉、鸡肉、鱼肉的最低检测限分别为0.115、0.113、0.109μg/kg,加标回收率在82.6%~104.7%之间,批内变异系数在3.6%~9.3%之间,批间变异系数在4.3%~12.4%之间。结论本方法快速准确,适用于动物组织中呋喃妥因代谢物的检测。     

鸡、鸭肉中金刚烷胺、金刚乙胺、索金刚胺间接竞争ELISA检测方法研究

目的：建立一种检测鸡肉、鸭肉中金刚烷胺、金刚乙胺、索金刚胺的间接竞争酶联免疫吸附方法（Indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,ic-ELISA）。方法：本研究基于间接竞争酶联免疫方法的原理,在酶标板微孔中预包被偶联抗原,样本中含有的金刚烷胺、金刚乙胺、索金刚胺与微孔中预包被的偶联抗原特异性地竞争酶标记抗体,催化底物显色,根据显色深浅来计算样本中金刚烷胺类药物的含量。结果：金刚烷胺、金刚乙胺、索金刚胺的检测限分别为：0.57、0.42、0.41 μg/kg （鸡肉）和0.59、0.40、0.38 μg/kg （鸭肉）;定量限分别为0.85、0.63、0.69 μg/kg （鸡肉）和0.94、0.68、0.52 μg/kg （鸭肉）;添加回收率范围为67.0%~117.9%;日内变异系数6.3%~12.7%,日间变异系数8.1%~14.5%,且实际样品检测结果与HPLC-MS一致性较高（R²=0.9990）,表明该方法具有良好的准确度和精密度。结论：本研究建立的ic-ELISA方法适用于鸡鸭肉样品中金刚烷胺类药物残留的检测,方法的灵敏度高、稳定性好,可应用于批量样本的快速筛查,具有良好的实际应用价值。     

呋喃西林代谢物酶联免疫吸附测定方法的建立及性能测定

建立动物源性食品中呋喃西林代谢物酶联免疫吸附测定方法。采用自制的呋喃西林代谢物抗原、抗体为基础原料,通过优化反应条件,建立间接竞争酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assays,ELISA)检测方法,并对方法的性能进行测定。结果表明:建立的检测方法在0.03μg/L^2.43μg/L范围内呈线性,检测灵敏度为0.03μg/kg,鱼肉组织样本、虾肉组织样本的检测限分别为0.236、0.229μg/kg,回收率均在75%~120%之间,批内、批间变异系数均在15%以下,通过与标准方法液相色谱-串联质谱(high performance liquid chromatography-mass spectrum/mass spectrum,LC-MS/MS)对比验证,两种方法用于鱼肉样本的检测呈现较好的相关性,相关系数R2为0.9944。建立的呋喃西林代谢物酶联免疫吸附测定方法的灵敏度、准确度和精密度等参数均符合我国动物源性食品中兽药残留检测方法的规定。     

分子印记聚合物仿生抗体用于酶联免疫吸附法检测恩诺沙星

在聚苯乙烯酶标板表面直接合成对恩诺沙星具有特异性识别吸附能力的分子印迹聚合物膜,将其作为仿生抗体代替生物抗体,建立直接竞争仿生酶联免疫分析法(ELISA)进行恩诺沙星的检测。结果表明最适条件下仿生酶联免疫方法的最低检出限(IC₁₅)为 0.80 μg/L,灵敏度(IC₅₀)为 65.93 μg/L,对恩诺沙星的代谢物环丙沙星有较高的交叉反应率(72.85%),对其它7种喹诺酮类结构类似物的交叉反应率均较低(0%~2.87%)。该方法对鸡肉组织和猪尿两种样品的添加回收实验中(鸡肉加标量分别为2.5、15、75 μg/kg;猪尿加标量分别为5、30、150 μg/kg),有较高的回收率(鸡肉:97.30%~103.56%;猪尿:94.48%~96.53%),采用HPLC方法与仿生ELISA方法进行对比验证无显著性差异(p>0.05)。该仿生ELISA法准确度、精密度及特异性均较高,步骤简单,与传统ELISA方法相比省时经济,可以应用于实际样品中恩诺沙星残留的快速检测。     

动物组织中赛庚啶竞争酶联免疫法的建立

建立快速检测动物组织中赛庚啶的竞争酶联免疫法。制备赛庚啶人工抗原作为包被原,使用辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体,构建快速检测动物组织中赛庚啶的竞争酶联免疫法。结果表明,Logit/Log拟合标准曲线方程为Y=-2.051 8X-1.353 4,相关系数R为0.995 7,半数抑制浓度（IC50）为0.23μg/L,动物组织样本的检测限为0.3μg/kg,赛庚啶阳性样本的加标回收率为85.1%-114.5%,样本重复检测结果的变异系数为5.2%-9.6%。建立的竞争酶联免疫吸附方法具有较好的特异性、回收率和重复稳定性,可用于动物组织中赛庚啶残留的检测。     

鸡肉中金刚烷胺间接竞争ELISA检测方法的建立

建立检测鸡肉中金刚烷胺的间接竞争酶联免疫吸附分析(indirect competitive enzyme linked immunosorbent assay,ic-ELISA)法。利用N-(1-金刚烷胺基)肼甲酰胺与乙醛酸合成新式金刚烷胺半抗原,采用活泼酯法将金刚烷胺半抗原分别与血蓝蛋白、牛血清白蛋白偶联合成免疫原和包被原,将所制备的人工抗原免疫BALB/c小鼠,并制备特异性识别金刚烷胺的单克隆抗体。ic-ELISA法经系统优化后,最佳包被原稀释倍数为80 000,抗体工作质量浓度为122.50μg/L,对金刚烷胺的IC50为0.69μg/L,检出限为0.21μg/L,在0.07～6.15μg/L之间线性良好,鸡肉样品中添加回收率为101.69%～108.71%,变异系数均低于15%,且实际样品检测结果与高效液相色谱-质谱联用测定结果相关性良好(R2=0.97),表明建立的ic-ELISA具有良好的准确度和可靠性。利用该特异性抗体建立的方法适用于实际鸡肉样品中金刚烷胺的快速检测。     

金黄色葡萄球菌肠毒素P双抗夹心酶联免疫检测方法研究

本研究目的是建立一种快速检测金黄色葡萄球菌新型肠毒素 SEP 的双抗夹心酶联免疫方法。通过对单克隆抗体和抗血清质量浓度、辣根过氧化物酶标记的羊抗兔 Ig G（Ig G/HRP）最佳稀释度、不同种类包被缓冲液、封闭时间、抗原包被时间、Ig G/HRP作用时间以及四甲基联苯胺（TMB）显色时间等条件进行优化;并采用灵敏度、批内和批间变异和加标回收率等对方法进行评价。结果表明：该方法中抗 SEP 单克隆抗体的最佳稀释质量浓度为 3.28 μg/m L,抗 SEI 兔血清的质量浓度为 3.14 μg/m L,酶标二抗稀释度 1:3000,1×磷酸缓冲盐溶液（p H 7.4）为最佳包被缓冲液,封闭时间为 1 h,抗原孵育时间为 90 min,酶标二抗反应时间为 30 min,TMB 显色时间 15 min。该方法回归方程为 y=0.0313x+0.0262,R2=0.9946。灵敏度为 1.80 μg/m L,精密度批内变异低于 6%,批间变异低于 15%,对 LB 肉汤、牛肉糜和熟米饭回收率达 90%以上。     

竞争性酶联免疫法快速检测高产奶牛精料补充料中玉米赤霉烯酮

目的 建立竞争性酶联免疫方法检测饲料中玉米赤霉烯酮的分析方法。方法 样品经过60%的甲醇溶液提取, 提取液经过离心后, 取25 ?L提取液, 加入475 ?L稀释缓冲液混合后即为试样液, 取50 ?L试样液采用酶联免疫吸附方法进行检测。在450 nm波长处检测吸光度值。结果 本方法在3 h内完成了饲料中玉米赤霉烯酮含量的测定。在加标浓度为100、200和500 ?g/kg的加标水平下, 玉米赤霉烯酮酶在饲料中的加标回收率为99.5%~122.1%, 变异系数为1.4%~3.0%。结论 该方法快速、准确、灵敏, 适用于饲料中玉米赤霉烯酮的快速筛查检测。     

超高效液相色谱-串联质谱法同时检测动物源性食品中22种兽药残留

目的 建立了超高效液相色谱-串联质谱法（ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry, UPLC-MS/MS）同时测定猪肉、牛肉、鸡肉、水产等动物源性食品中6种β-受体激动剂类、8种磺胺类、氯霉素、氟苯尼考、金刚乙胺、金刚烷胺、孔雀石绿、隐色孔雀石绿、地西泮、地塞米松等22种兽药残留量的方法。方法 样品分别用乙腈、2%甲酸乙腈和90%乙腈水（含0.1%甲酸）提取,提取液在40 ℃下氮气吹干后用10%乙腈水（含1%甲酸）溶液复溶,采用C18色谱柱分离,以电喷雾离子源在正、负离子多反应监测模式下进行测定。 结果 22种兽药用2%甲酸乙腈作为提取溶剂时,回收率均较高;在 0.2 ～ 40 μg/kg的浓度范围内呈现良好的线性关系,r均大于0.998,定量限范围为0.2~ 1.0 μg/kg;加标水平为 1、 5、 10 μg/kg时,回收率在62.6% ～ 120%之间,相对标准偏差为1.4% ~ 11%。结论 该方法简单、快速、准确、灵敏,极大地提高了多残留兽药的检测效率,适用于食品安全突发事件应急处置中多残留兽药的快速分析,对动物源性食品中药物残留的监控具有很重要的现实意义。     

西马特罗单克隆抗体制备以及酶联免疫试剂盒的研究

通过制备西马特罗半抗原,载体蛋白与之偶联合成免疫原,免疫原用于免疫动物,获得抗西马特罗单克隆抗体,制备能够检测猪尿中西马特罗残留量的酶联免疫试剂盒。结果表明,该试剂盒对猪尿中西马特罗的检测限为0.295 μg/L,半抑制浓度（IC50）值为0.870 μg/L,回收率范围为81.5%～103.5%,标准曲线线性范围为0.1～8.1 μg/L,精密度试验结果批内、批间的相对标准偏差（RSD）均＜15%,表明该检测方法准确度和精密度高。该试剂盒特异性较好,于4 ℃条件下能够保存12个月,稳定性较好,可以用于猪尿中西马特罗德快速检测。     

高效液相色谱-串联质谱法检测动物源性食品中9种抗病毒药物残留

本研究建立了一种高效液相色谱-串联质谱测定肉、蛋、奶等动物源性食品中奈韦拉平、泛昔洛韦、阿比多、阿昔洛韦、咪喹莫德、美金刚、金刚烷胺、奥司他韦和吗啉胍9种抗病毒药物残留的方法。样品前处理采用1%乙酸-乙腈提取,经PRiME HLB小柱净化后检测。采用乙腈?10 mmol/L乙酸铵溶液（含0.1%甲酸）流动相体系,在梯度洗脱的模式下,经Sielc Obelisc R柱分离,电喷雾离子源模式电离、多反应监测（MRM）模式进行检测,可以实现9种目标物的分离。结果表明9种抗病毒药物组分在一定浓度范围内线性关系良好,决定系数R2为0.9991～0.9998,检出限范围为0.1~0.5 μg/kg,定量限范围为0.3~1.5 μg/kg,加标回收率达到82.3%～95.7%,相对标准偏差为3.2%~5.9%（n=5）。利用本方法对10份样品进行检测,并与标准方法进行对比。本方法准确度和灵敏度均较高,可以满足动物源性食品中9种抗病毒药物残留的检测需求。     

超高效液相色谱-串联质谱法测定牛乳中6种兽药残留

目的:建立高效液相色谱-串联质谱法(high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,HPLC-MS/MS)测定牛奶样品中6种兽药残留(硝碘酚腈、碘醚柳胺、氯氰碘柳胺、托曲珠利、三氯苯达唑、水杨酸钠)的检测方法.方法:样品经过乙腈溶液提取,以...     

基于UHPLC-Q-TOF/MS法同时检测猪肉中主要抗生素类兽药残留

建立了QuEChERS净化结合超高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱(UHPLC-Q-TOF/MS)法同时筛查猪肉中10种抗生素类兽药残留量的分析方法.样品经过Na2EDTA-Mcllvaine缓冲溶液-0.1％甲酸乙腈-NaCl-无水Na2SO4-C18的提取净化.通过Infinity Lab Poroshell 12...     

超高效液相色谱-串联质谱法检测动物组织中10种抗胆碱类药物残留方法建立

采用超高效液相色谱-串联质谱建立动物组织中丙哌维林、贝那替嗪、哌仑西平、美卡拉明等10种抗胆碱类药物残留检测方法。样品经过1%甲酸乙腈提取、Oasis PRiME HLB柱净化后,经Acquity UPLC BEH C₁₈(50 mm×2.1 mm,1.7 μm)分离,以甲醇和0.1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,正离子MRM信号采集数据,10种抗胆碱类药物能在10.5 min内完好分离,在1.0~50.0 μg/L浓度范围内,10种抗胆碱类药物线性良好,相关系数均在0.9951以上;最低定量限均低于1.0 μg/kg,通过1.0、2.0、10 μg/kg三个水平的添加回收实验表明,猪肉中平均回收率在64.7%~108.2%,批内变异系数为1.09%~10.5%,批间变异系数为2.31%~11.4%,猪肝中平均回收率在62.6%~108.0%,批内变异系数为0.38%~10.7%,批间变异系数为2.24%~11.2%。该方法较好的满足了动物组织中该药物多残留检测要求,对有效防范药物滥用和非法添加行为和打击注水肉起到了一定的技术支撑作用。     

间接竞争化学发光酶联免疫分析方法检测禽肉中金刚烷胺和氯霉素残留

为快速检测禽肉中残留的金刚烷胺和氯霉素,结合高效的前处理方法,建立检测金刚烷胺和氯霉素的间接竞争化学发光酶联免疫分析方法(indirect competitive chemiluminescence enzyme-linked immunosorbent assay,ic-CLEIA).对包被原与抗体的最佳稀释倍数、竞...     

Quick simultaneous determination of residual veterinary drugs in processed food

Development of rapid and high accuracy analysis, and tightening of regulations for veterinary drugs are required because many examples of detection of veterinary drugs in many kinds of processed food have been reported. In this study, we constructed an improved method for simultaneous determination of veterinary drugs, based on the glass bead homogenization method with EDTA-2Na and batch purification for QuEChERS analysis. Our extraction procedure is suitable for handling multiple samples quickly and easily. Furthermore, our improved extraction solvent allowed simultaneous determination of tetracyclines in processed food. In a test of 69 veterinary drugs, recovery of over 60 ranged from 70 to 120%, with a coefficient of variation of less than 25% and with quantification limits of 0.01 μg/g (S/N≥10 ). This improved method is expected to be useful for quick simultaneous determination of multiple residues.     

三穗鸭中磺胺类和喹诺酮类药物残留检测及风险评估

建立了15种磺胺类和6种氟喹诺酮类药物残留的超高效液相色谱法-串联质谱法,并采用此法对2018年贵州省三穗县三穗鸭肉进行了15种磺胺类和6中氟喹诺酮类药物残留检测,在此基础上对三穗鸭肉产品中的磺胺类和氟喹诺酮类药物的残留风险进行了分析。结果显示,21种药物在5~200 μg/L质量浓度范围内线性关系良好,决定系数(R²)均大于0.990,药物的检出限为0.5~2.0 μg/kg,定量限2.0~5.0 μg/kg,在添加浓度5~50 μg/kg的范围内,21种药物回收率为70.3%~113.2%,相对标准偏差为2.1%~11.5%(n=6),该方法简单、快捷、精密度和准确度高,能满足鸭肉中两类兽药检测;三穗鸭肉中氟喹诺酮类均未检出,磺胺类仅检出磺胺氯哒嗪,检出率2.17%,检出值为2.37~3.68 μg/kg,均值3.33 μg/kg,未超过国家规定限量(100 μg/kg),其余磺胺类指标均未检出;参照国际上磺胺类ADI值规定,三穗鸭肉中磺胺氯哒嗪的食品安全指数值平均值为0.00014,最小值为0.00010,最大值为0.00016,均远远低于1;结果均表明,三穗鸭肉中氟喹诺酮类和磺胺类药物残留对人体的潜在危害水平是可以接受的。     

超高效液相色谱-串联质谱法同时测定动物源性食品中9种多肽类抗生素残留

建立了动物组织中9种多肽类抗生素残留的固相萃取-超高效液相色谱串联质谱（UPLC-MS/MS）检测方法。样品经甲醇-0.1 mol/L盐酸（7:3,v/v）混合溶剂提取,酸性氧化铝除杂、正己烷去除油脂,亲水-亲脂平衡（hydrophilic-lipophilic balance,HLB）固相萃取柱净化,以0.2%的甲酸水溶液和乙腈为流动相,经过C₈色谱柱（100A, 150 mm×2 mm, 3 μm）梯度洗脱分离,使用电喷雾正离子化和多反应监测模式检测。结果表明,万古霉素和去甲万古霉素、恩拉霉素A、恩拉霉素B、太古霉素在2～200 μg/L范围内,粘杆菌素A、粘杆菌素B、杆菌肽A在5～500 μg/L范围内,维吉尼霉素M1在0.1～20 μg/L范围内,各化合物定量离子的峰面积和样品质量浓度之间呈现良好的线性关系（R2>0.99）,方法的定量限（S/N=10）为1～20 μg/kg,检出限为0.3~6 μg/kg;以鸡肉、猪肉、猪肝、猪肾为基质,在加标水平为1～200 μg/kg时,各个化合物的平均加标回收率为74.2%～96.3%,相对标准偏差为4.3%～14.6%。该方法简便、灵敏、准确,可用于动物组织中多肽类抗生素残留的同时测定。