超高效液相色谱法直接测定糖浆中低聚半乳糖质量分布

目的建立一种超高效液相色谱-蒸发光散射检测器联用测定糖浆中低聚半乳糖质量分布的方法。方法采用Agilent Poroshell 120 HILIC(3.0 mm×100 mm,2.7μm)色谱柱分离,以乙腈-水梯度洗脱。通过调节进入蒸发光散射检测器(evaporative light scattering detector,ELSD)的流动相流速以及组成来校正不同聚合度聚半乳糖的响应一致性。以葡萄糖、乳糖、麦芽三糖、麦芽四糖和麦芽五糖为校正溶液来建立校正方法,校正后以乳糖标准曲线来定量其他低聚半乳糖,最终完成了在没有低聚半乳糖标准品的情况下对低聚半乳糖糖浆质量分布的测定。结果样品中的乳糖与其他半乳二糖分离的同时不同聚合度的低聚半乳糖按聚合度增加分段出峰,互不干扰。乳糖在0.25~5 mg/mL范围内线性良好,log(峰面积)-log(浓度)的线性拟合曲线,相关系数r~2为0.996。以麦芽四糖和麦芽五糖来验证方法准确性,所得回收率分别为107%和110%。方法重现性良好,以2mg/mL乳糖为考察对象,连续6针进样保留时间RSD0.05%,峰面积RSD0.78%。结论该方法可快速、准确用于低聚半乳糖糖浆中不同聚合度半乳糖的质量分布。     

高效液相色谱-蒸发光散射法测定乳粉中的低聚果糖和低聚半乳糖

目的建立一种检测乳粉中蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五塘、低聚半乳糖的高效液相色谱-蒸发光散射法(high performance liquid chromatography coupled with evaporative light scattering detector,HPLC-ELSD)。方法以水和乙腈为流动相梯度洗脱,利用糖柱分离,蒸发光散射检测器检测。考察了沉淀剂、酶解pH、温度和时间的影响。结果经过优化,得到以乙腈为沉淀剂,酶解pH为6.0、酶解温度为25℃、酶解时间为50min的最佳实验条件。该方法的线性范围均为0.05~2.0 mg/m L,半乳糖、乳糖、蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖检出限分别为0.02、0.02、0.01、0.02、0.02 mg/m L(S/N=3),回收率为92.52%~106.00%,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)低于5.12%(n=6)。结论该方法能准确可靠地检测乳粉中低聚果糖和低聚半乳糖的含量。     

高效离子色谱法分离、检测低聚果糖

采用CarboPac PA20柱和脉冲安培检测器的高效阴离子交换色谱建立一种低聚果糖的分析方法,该法可有效分离蔗果型和果果型低聚糖组分,并由此推测出低聚果糖的来源。结果表明,在优化条件下,蔗果低聚糖中蔗果三糖、新蔗果三塘、蔗果四糖和蔗果五糖的回收率分别为98.27%～99.72%、97.32%～102.56%、99.33%～101.81%和97.38%～102.12%。该法的相对标准偏差在0.55%～2.15%。蔗果三糖、新蔗果三塘、蔗果四糖和蔗果五糖的方法检出限分别为0.13、0.19、0.20 μg/g和0.41 μg/g。蔗果三糖在0.3～18 μg/mL、新蔗果三糖和蔗果四糖在0.5～20 μg/mL、蔗果五糖在0.8～23 μg/mL的范围内,其质量浓度与峰面积线性关系良好,相关系数在0.999 6～0.999 9之间。本方法简单、易于掌握,测定结果准确,适合低聚果糖产品及蛋白粉和奶粉等功能性食品中低聚果糖成分的检测分析。     

利用蒸发光散射检测器测定食品中的低聚果糖

采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器在同一色谱条件下对不同种类食品中低聚果糖含量的测定。结果表明,在该检测条件下,食品中低聚果糖组分的能够得到有效的分离,基线平稳。蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖的检测范围在0.67mg/m L~14.0 mg/m L之间,线性相关系数在99.95%以上。不同种类的食品样品中,低聚果糖3种组分的回收率在95.20%~100.15%之间。该方法灵敏度高,准确,快捷,适合于食品中低聚果糖含量的测定。     

食品中低聚果糖高效液相色谱检测方法研究

针对乳制品、糕点、酒类、饮料、糖果等食品中添加的功能活性成分低聚果糖,包括蔗果三糖(GF2)、蔗果四糖(GF3)、蔗果五糖(GF4)的检测,建立了水和乙腈为流动相,梯度洗脱,氨基色谱柱分离,蒸发光散射检测器(evaporativelight-scattering detector,ELSD)检测食品中添加的低聚果糖含量的高效液相色谱方法。蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖的线性工作范围分别为0·04~0·45、0·05~0·50、0·04~0·45mg/mL,线性相关系数R2分别为0·9999、0·9999、1。对不同类型的食品,三种低聚果糖的回收率在90·0%~110·0%之间,方法准确度高。室内重复性变异系数一般都低于10%,室间再现性变异系数一般都低于15%,说明方法的重复性和再现性良好。该方法简单、易于掌握,测定结果准确,适于复杂食品基质中低聚果糖含量的测定。     

高效液相色谱-蒸发光散射检测器分析配方乳粉中的低聚果糖

建立了高效液相色谱-蒸发光散射检测器检测配方乳粉中低聚果糖的方法,采用水和乙腈二元梯度淋洗,在28min内梯度洗脱,低聚果糖(蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖)分离效果好,蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖的平均回收率分别为84.4%、74.3%、69.5%,方法简便快速,结果准确可靠,可以用于配方乳粉中低聚果糖的检测。     

高效液相色谱-蒸发光散射检测法快速测定益生菌粉中低聚果糖含量

目的建立高效液相色谱-蒸发光散射检测(HPLC-ELSD)法,快速洗脱分离出蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖,测定益生菌粉中低聚果糖的含量。方法样品经过前处理,以乙腈和水为流动相,等度洗脱,经XAmide(4.6 mm×250 mm,5μm)中性酰胺色谱柱分离,采用蒸发激光检测器检测。结果蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖线性范围分别在0.2671~3.168 mg/m L、0.2429~2.8215 mg/m L、0.1617~3.544 mg/m L,线性相关系数r0.99。3种主要组成的回收率在97.0%~105.0%之间。结论该方法可有效分离出蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖,推广性高、快速、简便、准确,可用于益生菌粉中低聚果糖含量的测定。     

乳制品中单糖、双糖和低聚果糖的同时测定

建立了高效液相色谱同时分离测定乳制品中果糖、葡萄糖、蔗糖、乳糖、蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖等7种糖的方法。通过调节样品溶液的p H值到1.7和4.5除去样品中蛋白质,采用氨基色谱柱,以乙腈-水为流动相梯度洗脱,用蒸发光散射检测器检测。7种糖质量浓度在0.01~10.0 mg/m L内具有良好的线性关系,回收率在95.0%~104.1%,精密度(RSD)为1.98%~4.56%,检出限在0.04~0.17 mg/g。该方法可用于乳制品中单糖、双糖和低聚果糖的日常检测。     

高效阴离子交换色谱法同时测定菊粉酶解产物中的单糖、双糖和低聚果糖

建立了低聚果糖样品中的葡萄糖、果糖、蔗糖、蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖的高效阴离子交换色谱-脉冲安培法的定量分析方法。采用阴离子交换柱CarboaPacTM PA10（250 mm×2 mm）脉冲安培法进行检测,以氢氧化钠和醋酸钠为淋洗液进行梯度洗脱,柱温30 ℃,流速0.3 mL/min。结果表明,葡萄糖、果糖、蔗糖、蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖在质量浓度0.1～10 mg/L范围内的线性关系良好,相关系数r2大于0.996 1,各组分的相对标准偏差均在2.69%～7.21%之间。将此方法应用于菊粉酶解后反应产物的检测,结果表明该方法快速简便且灵敏度高,能满足反应样品中低聚果糖的检测要求。     

奶粉中低聚果糖质量浓度的测定

为检测奶粉中低聚果糖的质量浓度,建立起奶粉中低聚果糖的正相高效液相色谱法.样品经质量浓度为100g/L硫酸铜和40g/L氢氧化钠去除蛋白,氨基色谱柱分离,示差折光检测器,柱温30℃,流速1 mL/min,流动相为乙腈:水=70∶30(体积比),标准曲线法定量.蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖在质量浓度范围内线性关系良好,添加回收率分别是99.1％,99.7％,95.3％,方法的精密度的相对标准偏差为0.3％,1.1％和0.3％,检出限为2,2,4mg/kg.该方法快速灵敏,简便准确,适用于奶粉中低聚果糖质量浓度的检测.     

微生物油脂中花生四烯酸的气相色谱定量检测

建立了快速、灵敏测定微生物油脂中花生四烯酸(AA)含量的气相色谱法(GC).采用HP-INNOWAX毛细管柱,氢火焰离子化检测器(FID),优化了分析花生四烯酸酯化产物的色谱条件.结果表明:花生四烯酸甲酯(AA - ME)在0～1.00 mg/mL范围内具有较好线性,相关系数为0.999 6,检测限为0.000 5 mg/mL,相对标准偏差(RSD)为1.49％,回收率在95.86％～105.32％;花生四烯酸乙酯( AA - EE)在0～1.23 mg/mL范围内线性良好,相关系数为0.999 9,检测限为0.003 0 mg/mL,RSD为0.60％,回收率在97.79％～103.61％.     

毕赤酵母表达解淀粉芽孢杆菌壳聚糖酶及其水解制备可控结构壳寡糖

优化并全合成解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）壳聚糖酶编码基因并在毕赤酵母（Pichia pastoris）中实现分泌表达,表达产物的蛋白质量浓度达到0.23 mg/mL。壳聚糖水解酶的最适pH值为5.0,最适温度为45 ℃,比活力达52.2 U/mL。该酶在50 ℃以下较稳定。利用该酶水解低脱乙酰度壳聚糖并对产物进行了组成及结构分析。基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱分析结果显示,酶解产物中包含聚合度3～15、不同脱乙酰度的壳寡糖。核磁共振鉴定结果显示,壳寡糖组分的还原末端及非还原末端均主要由氨基葡萄糖组成。综上,本研究高效表达了来源于解淀粉芽孢杆菌的壳聚糖酶,并制备了确定末端结构的壳寡糖,为壳寡糖的结构与功能关系研究提供理论支持。     

高效液相色谱法测定发酵乳中的乳糖、葡萄糖和半乳糖

利用高效液相色谱法测定发酵乳中乳糖、葡萄糖、半乳糖的含量。样品通过Carrez法处理沉淀蛋白,采用Aminex HPX 87H色谱柱, 5mmol/L H2SO4溶液为流动相,流速0.6mL/min。结果表明：利用该法进行色谱分析各组分达到较好的分离,各糖组分在0.5～12mg/mL范围内呈现良好线性关系,相关系数为0.9986～0.9999(n＝ 5),样品回收率为96.45%～101.78%;精密度实验表明,各组分峰面积RSD在0.62%～4.21%之间(n＝ 5);重现性实验表明,各组分含量测定值RSD为1.86%～3.44%。该法测定样品快速、准确、可靠,为发酵乳贮藏过程中关键糖含量的测定提供参考依据。     

LC-MS/MS法测定水基胶中的3种异噻唑啉酮类防腐剂

建立了测定水基胶中3 种异噻唑啉酮的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)方法。水基胶样品经水萃取、离心后进行LCMS/MS 分析,内标法定量。结果表明:MI、CMI 在浓度范围2.5~250 ng/mL、BIT 在浓度范围5~500 ng/mL 内,线性关系良好(R2 ≥ 0.9996),3 个加标水平的加标回收率在96.3%~109.6% 之间,平均相对标准偏差(RSD)在1.5%~6.7% 之间,方法的检出限(LOD)和定量限(LOQ)分别为0.011~0.015 mg/kg 和0.035~0.051 mg/kg。该方法适用于水基胶中MI、CMI、BIT 的快速测定。      

HPLC-ELSD法测定微胶囊中阿拉伯糖、果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖含量

建立高效液相色谱-蒸发光散射法(High performance liquid chromatography with evaporative light-scattering detection,HPLC-ELSD)同时测定微胶囊中阿拉伯糖、果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖含量的高效液相色谱方法。样品经乙腈水超声波浸取,采用Waters Amide色谱柱(4.6×250mm3.5μm)分离,以1%氨水和乙腈为流动相,使用蒸发光散射检测器进行检测。结果表明,阿拉伯糖:0.44~7.06mg/mL、果糖:0.30~4.74mg/mL、葡萄糖:0.40~6.45mg/mL、蔗糖:0.32~5.04mg/mL、麦芽糖:0.40~6.47mg/mL及乳糖:0.41~6.61mg/mL范围内线性关系良好;方法检出限为0.02~0.03mg/mL;回收率为95.31%~105.33%,6种糖含量相对标准偏差在2.30%~3.50%之间。该方法前处理简单、灵敏度高和检测速度快,适用于微胶囊中阿拉伯糖、果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的定量检测。     

高效液相色谱法测定甘蔗节间果糖、葡萄糖和蔗糖的含量

研究高效液相色谱(HPLC)示差折光检测法测定甘蔗节间糖含量,建立一种简便、快速和准确可靠的,能同时测定果糖、葡萄糖、蔗糖含量的高效液相色谱法。HPLC 方法采用Agilent Zorbax carbohydrate 柱(4.6mm ×250mm,5μm),流动相为乙腈- 水(75:25,V/V),流速1.0mL/min,柱温30℃,检测器温度35℃。该法相对标准偏差(RSD)为0.82%～0.87%(n=5),加标回收率为97.84%～99.12%,糖类质量浓度在0.625～20mg/mL 内呈现良好的线性关系,相关系数在0.9982(n=6)以上。采用本法测定两种甘蔗品种不同时期、不同节间糖含量,均获得满意结果。     

液相色谱-质谱法快速检测4 种乳源低聚糖

建立一种乳样经简单预处理后采用超高效液相色谱-串联质谱同时检测4 种重要的乳源低聚糖方法。牛乳及人乳经过脱脂、脱蛋白后经amide液相色谱柱用0.1%氨水-乙腈溶液梯度分离,采用质谱检测。2 种唾液酸乳糖标准品的标准曲线在0.78～50.00 mg/L范围内线性良好（R2＞0.990）,2 种岩藻糖乳糖标准品的标准曲线在1.56～100.00 mg/L范围内线性良好（R2＞0.990）。加标回收率在80.00%～100.00%之间,重复性、精密度实验所得相对标准偏差均小于5.00%。     

微波消解-火焰原子吸收法测定平湖糟蛋中锌含量

目的建立利用微波消解样品,火焰原子吸收法测定平湖糟蛋中锌含量的检测方法。方法加入8 mL HNO3+2 mL H2O2组成的消化液,采用多阶段程序升温,最后微波消解-火焰原子吸收法测定。结果测得平湖糟蛋中锌含量范围18.10~24.76 mg/kg,锌的回收率96.45%～103.27%,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为2.07%。结论本方法操作简便、污染少、回收率高,测定结果准确可靠。     

桑椹酒中氨基酸含量分析

建立采用氨基酸分析仪测定桑葚酒中18种氨基酸含量的分析方法。样品经氮吹去除乙醇处理后,采用酸/碱水解将其中的蛋白质和肽类化合物转化成游离氨基酸,采用氨基酸分析仪测定其含量。18种氨基酸在2.5～250.0 μmol/L的浓度范围内,峰面积和浓度呈良好的线性关系,相关系数R为0.998 8～0.999 9,检出限均＜0.50 mg/L,各化合物的加标回收率为72.8%～104.0%,重复性试验结果相对标准偏差（RSD）均＜5.0%。该方法可靠、准确、重现性好,为桑椹酒的营养价值评价提供参考资料。     

流动分析法测定烟草中的纤维素

建立了测定烟草中纤维素含量的流动分析法。采用纤维素酶酶解烟草中的纤维素,利用流动分析仪测定水解液中的葡萄糖。结果表明:①最优酶解条件为:烟粉0.25 g,缓冲溶液60 mL,酶用量0.25 g,水解温度37℃,水解时间24 h;②方法的相对标准偏差(RSD)为2.40%,回收率为96.7%～103.8%,检测限为0.11 mg/mL。该方法适合于烟草中纤维素含量的测定。