乳粉中克罗诺杆菌属阪崎肠杆菌能力验证样品制备及应用

目的 制备均匀性及稳定性均满足要求的克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)检验能力验证样品,用于组织能力验证考核.方法 通过生化及基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱方法鉴定背景菌株及所使用的克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)菌株.采用冷冻干燥技术制备均匀性及稳定性均满足要求且各种菌含量为104 CFU/瓶的能力验证菌球.依据CNAS-GL0...     

奶粉中沙门氏菌和阪崎肠杆菌的测定能力验证结果分析

目的 提高实验室用传统生化方法检测沙门氏菌和克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)的能力和水平。方法 用空白添加法和交叉试验检查培养基性能后,以奶粉样品为材料,用传统生化培养方法进行检测。结果 发现在传统生化检测技术中,对于排除非沙门氏菌来说,BS板作用突出,XLD和沙门氏菌显色平板容易受干扰菌影响。W样品检出沙门氏菌,Q样品未检出沙门氏菌;V样品检出阪崎肠杆菌,G样品未检出阪崎肠杆菌。结论 通过该研究,本实验室的沙门氏菌和克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)的传统生化检测技术水平和能力得到了提高。     

阪崎肠杆菌(克罗诺杆菌属)分子检测方法研究进展

阪崎肠杆菌(现克罗诺杆菌属)是一种重要的食源性条件致病菌,因其能通过污染婴幼儿配方食品导致严重的新生儿脑膜炎、菌血症和小肠结肠炎等疾病,而受到广泛的关注。其分子生物学检测方法克服了传统检测方法实验操作繁琐、耗时长等问题。目前常用的分子生物学方法主要有普通PCR、实时荧光定量PCR、环介导恒温扩增、探针方法等。     

食品中阪崎肠杆菌分析及其检测

阪崎肠杆菌是G^-杆菌,属于肠杆菌属中的一个种,是食源性的条件致病菌。主要危害免疫力低下的婴幼儿,导致脑膜炎、败血症和坏死性小肠结肠炎等疾病。依据FDA提供的“三管”增菌法和DFI改进法,均可以检测出样品中微量的阪崎肠杆菌。该菌具有一定耐热性,广泛分布于食品和周围环境中。通过提高原料质量、改善环境卫生和加大检测力度．可有效降低阪崎肠杆菌的污染．确保婴幼儿的身心健康。     

阪崎克罗诺杆菌标准物质研制

目的采用冷冻干燥技术制备均匀性和稳定性符合要求的阪崎克罗诺杆菌标准物质,用于实验室内部质量控制。方法对使用菌株阪崎克罗诺杆菌(45403)的生化特征、16SrRNA序列、质谱特征进行确认。采用冷冻干燥技术制备含量为103 CFU/样品的菌球。参照CNAS-GL29《标准物质/标准样品定值的一般原则和统计方法》,对20件样品进行均匀性检验,采用单因素方差分析对结果进行统计分析。将样品分别于-20、2、37℃条件下保藏,对其储藏稳定性和运输稳定性进行评价。组织5家实验室进行协同标定。使用20件婴儿配方乳粉作为基质对阪崎克罗诺杆菌标准物质的使用效果进行确认。结果阪崎克罗诺杆菌(45403)生化鉴定结果、16SrRNA序列的NCBIGenebank比对结果、质谱鉴定结果均为阪崎克罗诺杆菌(Cronobacter sakazakii)。采用单因素方差分析进行均匀性检验, F=1.067, P=0.442,符合标准物质的要求。于-20℃保藏170 d,于25、37℃保藏14d后,样品仍然稳定。经5家实验室协同标定,样品含量均为103 CFU/样品。20件婴儿配方乳粉作为基质加入阪崎克罗诺杆菌标准物质进行检验,均可以检出。结论阪崎克罗诺杆菌(CMCC45403)的生化特征、16SrRNA序列分析、蛋白飞行质谱特征均符合克罗诺杆菌属的典型特征。均匀性、储藏稳定性、运输稳定性及适用性的验证实验结果均符合标准物质的要求。     

LAMP法检测乳粉中的阪崎肠杆菌

据WHO最新报告显示,乳粉中的阪崎肠杆菌是导致婴幼儿感染和死亡的主要原因之一。FDA于2002年公布了婴幼儿乳粉中阪崎肠杆菌检测的推荐方法,但检测周期长达1周左右,而且操作复杂,难以满足控制该疾病暴发和传播的需要。DNA环介导等恒扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术是一种特异性、灵敏度高、检测时间短的新型基因扩增技术。本文以阪崎肠杆菌为研究对象,建立了一套应用于婴幼儿乳粉中阪崎肠杆菌快速检测方法。针对阪崎肠杆菌16s RNA基因设计4条引物特异性识别靶基因的六个特殊区域,并在63℃进行恒温扩增。实验结果表明,使用该方法能够在5h之内检测出复原乳样品中101CFU/mL的阪崎肠杆菌。灵敏度可以达到100fg阪崎肠杆菌基因组DNA。应用环介导等温扩增法,克服了传统检测周期长、操作复杂的缺点,不仅能够用于婴幼儿乳粉中阪崎肠杆菌的检测,而且满足了对于婴幼儿乳粉中阪崎肠杆菌快速检测的迫切需要。     

阪崎克罗诺肠杆菌致病性机理研究进展

阪崎克罗诺肠杆菌是一种革兰氏阴性无芽孢肠道杆菌,可导致新生儿和免疫功能不全的婴幼儿严重脑膜炎、菌血症和坏死性结肠炎,是一种非常重要的食源性条件致病菌。目前,国内外对阪崎克罗诺肠杆菌的致病性及其致病机理的研究报道非常有限。本文通过阪崎克罗诺肠杆菌外膜蛋白A、脂多糖、生物膜、宿主细胞骨架、铁获得机制、海藻糖的存在、超广谱β-内酰胺酶的产生和细胞间相互作用等方面对阪崎克罗诺肠杆菌的致病性机理进行综述。     

冰激凌中阪崎肠杆菌的检测

目的 对市售冰激凌中的阪崎肠杆菌进行抽样检测。方法 按照《食品安全国家标准 食品微生物学检验 (GB 4789.40- 2010)》进行检验。结果 从冰激凌中检出阪崎肠杆菌,经过染色和生化试验, 在29份样品中有3份样品分离出阪崎肠杆菌,检出率为10.34%。结论 市售冰激凌样品中存在一定比例的阪崎肠杆菌,有较大的安全隐患。质检系统应加强对市售的冰激凌的卫生预防与控制。     

奶粉中阪崎肠杆菌的风险评估

阪崎肠杆菌能引起脑膜炎、NEC和菌血症等，约2．5％～14％婴儿配方奶粉含有阪崎肠杆菌，0％～12％的普通奶粉含有阪崎肠杆菌，含量从0．36-66．0cfu／100g。婴幼儿奶粉中的阪崎肠杆菌问题已受到了全世界的普遍关注。本文基于大量研究和调查数据，从奶粉中阪崎肠杆菌的危害识别、奶粉中阪崎肠杆菌的暴露评估、奶粉中阪崎肠杆菌危害特性以及阪崎肠杆菌的检测方法等方面客观地对奶粉中阪崎肠杆菌进行风险评估，并对降低我国婴儿配方奶粉中阪崎肠杆菌风险提出建议。     

乳粉中阪崎克罗诺杆菌快速检测方法应用比较

对几种应用较为广泛的阪崎克罗诺杆菌分子生物学检测技术进行比较分析,探求适用于食品实验室检验要求的快速准确的阪崎克罗诺杆菌检测方法。通过DNA灵敏度检测及样品添菌实验比较交叉引物等温扩增法、实时荧光PCR法、环介导等温扩增法的检测灵敏度;通过实际样品检测,以常规培养生化鉴定为基准方法,进行灵敏度、特异性、假阳性率、假阴性率及相对准确度等5方面比较分析。DNA灵敏度检测显示实时荧光PCR法最灵敏,检测低限在0.9 fg/test;样品添菌实验,3种方法检测低限均可达100 cfu/100 g;与基准方法比较,3种方法灵敏度均达到100%,假阴性率0%,特异性在98.8%~99.0%之间,假阳性率1.0%~1.2%之间,相对准确度98.8%~99.0%之间,均能满足食品实验室检测要求。3种分子生物学方法检测时间短,同基准方法比较,检测结果大致相符,无漏检情况,有假阳性结果,可用于日常阪崎克罗诺杆菌初筛检测。     

牛奶中氯霉素残留量测定能力验证结果分析

目的 对牛奶中氯霉素残留量测定的能力验证结果进行分析.方法 按照中国合格评定国家认可委员会规定的方法进行均匀性检验和稳定性检验.以Z比分数作为统计量对参加实验室的检测结果进行评价,选择全部参加实验室上报结果的中位值作为指定值、标准化四分位距作为能力评定标准差.结果 牛奶中氯霉素残留检测项目能力验证实验室满意率为84.8...     

食品中沙门氏菌检出能力验证结果与分析

目的为了提升实验室的食品中沙门氏菌检测能力,增强实验室竞争能力,本实验室参加了中国食品药品检定研究院组织的NIFDC-PT-010食品中沙门氏菌检出能力验证。方法利用全自动免疫检测系统(VIDAS)对能力验证中的5个样品进行快速筛查,依据GB4789.4-2010沙门氏菌检验进行血清学试验,采用16S r DNA全序列分析、全自动微生物生化鉴定系统(VITEK2)和全自动微生物基因指纹鉴定系统(Ribo Printer)对分离出的疑似菌进行鉴定。结果编号为CODE 1的样品检出阿贡纳沙门氏菌和婴儿沙门氏菌,CODE 3检出蒙得维的亚沙门氏菌,CODE 5检出鼠伤寒沙门氏菌,CODE 2和CODE 4未检出。结论 5个样品测试均取得优秀的结果。     

巧克力中沙门氏菌检测能力验证结果与分析

目的 通过参加中国食品药品检定研究院组织的NIFDC-PT-135巧克力中沙门氏菌检验能力验证活动, 提高实验室沙门氏菌的检测能力, 增强实验室的竞争力。方法 按照GB 4789.10-2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验》进行沙门氏菌的分离与血清学鉴定, 辅以VIDAS 30 全自动酶联免疫分析系统进行快速初筛, 并以VITEK 2 Compact自动微生物快速检测分析系统对分离出的可疑菌落进行生化鉴定。结果 样品编号为0148的检出鼠伤寒沙门氏菌, 0546的检出肠沙门菌双相亚利桑那亚种(沙门氏菌Ⅲb), 0676未检出沙门氏菌。结论 本次实验发现的肠沙门菌双相亚利桑那亚种在沙门氏菌属显色平板上出现蓝色菌落, 与以往判定的紫红色菌落有差异, 在检测中应当引起关注。     

配方奶粉生产过程中阪崎肠杆菌的风险与控制

阪崎肠杆菌是20世纪发现的一种对婴幼儿具有严重健康威胁的致病微生物,在婴幼儿配方奶粉的原料和生产过程中都有污染阪崎肠杆菌的风险。准确对配方奶粉生产过程中阪崎肠杆菌的污染风险进行评价,并相应制定科学有效的风险控制措施,对于降低风险、提高产品品质、保障食品安全具有重要意义。本文综述了配方奶粉生产过程中阪崎肠杆菌的存活规律、配方奶粉原料中可能存在的被阪崎肠杆菌污染的风险,以及通过环境、空气、设备以及制度操作等方面对阪崎肠杆菌风险进行控制的各种措施。     

大豆转基因成分测定能力验证结果与分析

目的进一步提高实验室对转基因成分的检测水平,提升检验人员的专业素养。方法根据能力验证计划作业指导书中推荐使用的GB/T 19495.5-2004《转基因产品检测核酸定量PCR检测方法》中提供的3种方法分别对样品进行检测。结果样品013和083为GTS-40-3-2品系转基因大豆,142为非转基因大豆。能力验证获得满意结果。结论转基因成分检测应重点关注DNA提取效率和实验过程质控等因素。     

食品中金黄色葡萄球菌定量检测能力验证 结果与分析

目的提升实验室对食品中金黄色葡萄球菌的检测能力。方法按照能力验证作业指导书规定的方法要求进行检测,并采用全自动微生物基因指纹鉴定系统(RiboPrinter~(?))对盲样中添加的菌株进行鉴定与分型。结果编号为CODE 1~9的样品均检出金黄色葡萄球菌,编号为CODE 10的样品未检出金黄色葡萄球菌。阳性样品的Z值结果均2;阴性样品的结果为10 CFU/g,10个样品测试均取得满意结果。结论通过开展能力验证工作可以较好地提高实验室检测能力。     

玉米品系转基因检测能力验证结果与分析

目的 提高实验室的检测能力和检测人员的技术水平,增强实验室的竞争力.方法 依据农业部公告和能力验证要求,对ACAS-PT757(2019)转基因玉米品系能力进行验证,编号分别为19-S183和19-T170.结果 进行PCR扩增结果显示,19-S183待测样品中检出BtⅡ转化体、MIR162转化体和MON89034,转...     

恒温实时荧光法快速检测奶粉中阪崎肠杆菌方法的建立

为实现奶粉中快速检测阪崎肠杆菌,本文建立了检测阪崎肠杆菌的恒温实时荧光法。针对阪崎肠杆菌16S r RNA设计三组LAMP引物,采用Deaou-308C恒温实时荧光检测平台,选取常见病原菌标准株进行引物特异性检测;选取阪崎肠杆菌标准菌株进行基因组DNA灵敏度和最低检测限测定,同时利用人工污染方式检测此方法在脱脂和全脂奶粉中的灵敏度和最低检测限,利用Real Amp法和国标法对20份市售奶粉进行对比实验。结果显示,引物组16S-11扩增效率最优,与常见病原菌无交叉反应,对阪崎肠杆菌基因组DNA、阪崎肠杆菌污染的脱脂和全脂奶粉的灵敏度分别达到102 CFU/m L、102 CFU/m L和103 CFU/m L;对阪崎肠杆菌基因组DNA和阪崎肠杆菌污染的脱脂和全脂奶粉的最低检测限分别达到103 CFU/m L、103 CFU/m L和104 CFU/m L;在20份市售奶粉样品中Real Amp检测结果与传统国标培养结果一致,表明本文建立的阪崎肠杆菌Real Amp检测方法适用于阪崎肠杆菌的快速检测。     

2017年食品检验实验室能力验证结果分析

目的 了解在陕西省内从事食品检验活动的实验室检验能力的整体水平, 评价各食品实验室的检测能力与质量保证水平, 为实验室监管部门提供技术支撑。方法 通过设计与实施能力验证计划, 获得各参加实验室8个能力验证项目的测定结果, 对结果进行稳健统计分析, 通过Ｚ比分数评价实验室检测能力, 并对结果进行分析。结果 全省共有42家实验室参加了本次能力验证项目, 累计提交了220个结果, 其中结果满意为29家, 总体满意率为69%, 8个项目满意率分别为氨基酸态氮89.5%、糖精钠88.2%、二氧化硫84.4%、三氯杀螨醇80.0%、镉90.0%、可待因61.5%、西布曲明85.7%、沙门氏菌100%。结论 参加本次能力验证活动的实验室, 多数的检测能力评价为满意, 表明各实验室检测水平总体良好, 具有相应项目的检验能力。但仍有少数实验室评价结果不满意, 应进一步加强实验室的检测能力水平。