以猪小肠黏膜提取物作为α-葡萄糖苷酶和二肽基肽酶IV的酶活力分析体系的建立

α-葡萄糖苷酶和二肽基肽酶IV（dipeptidyl peptidase 4,DPP-4）是II型糖尿病治疗中2 种重要的靶向酶。这两种商品化酶价格昂贵且主要来源于微生物,难以有效用于两种酶抑制剂的筛选,而这两种酶均普遍存在哺乳动物的小肠中。为了获得经济有效、来源于哺乳动物体内的α-葡萄糖苷酶和DPP-4,本研究收集新鲜的猪小肠黏膜分泌物及上皮细胞,对比分析了猪小肠不同部位黏膜提取物的α-葡萄糖苷酶和DPP-4的活力。以猪小肠黏膜提取物作为α-葡萄糖苷酶和DPP-4的酶反应体系,并且利用这两种酶的阳性药（阿卡波糖和抑二肽素A（diprotin A,IPI））分别进行了抑制率验证和评价。阿卡波糖对商品和猪回肠源α-葡萄糖苷酶的半数有效抑制质量浓度（median inhibition concentration,IC50）分别是1.102 4、0.244 7 mg/mL;IPI对商品和猪回肠源DPP-4的IC50分别为19.119 7、41.268 4 μg/mL。通过比较发现,猪回肠黏膜提取物的α-葡萄糖苷酶和DPP-4比活力分别为0.084 1、0.053 4 U/mg,在3 种黏膜提取物中均为最高,因此选择猪回肠黏膜提取物作为商品化α-葡萄糖苷酶和DPP-4的替代物进行抑制剂的筛选。     

具有α-葡萄糖苷酶抑制作用益生菌的筛选及特性分析

以实验室77 株益生菌为研究对象,从其菌体细胞代谢物（cell-free excretory supernatants,CFS）和细胞内容物（cell-free extracts,CFE）两方面分析菌株对α-葡萄糖苷酶的抑制活性;同时还从耐酸性、细胞黏附性等方面对具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的菌株进行了益生特性评价;最后利用主成分分析进行综合性评价,以期筛选出具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的益生菌。结果表明,77?株益生菌的CFE对α-葡萄糖苷酶没有抑制作用;而CFS对α-葡萄糖苷酶具有一定的抑制作用,抑制率为2.53%～15.76%。选取抑制率明显高于其他益生菌（编号为ST-2、1.1881、GS-3和BLP12）菌株进行益生特性的研究。其中ST-2表现出很高的耐酸性和细胞黏附性;GS-3在模拟消化液中有很强的耐受性等,各菌株特性不一。主成分分析表明菌株BLP12的综合性能最好：其对α-葡萄糖苷酶的抑制率可达15.10%;于pH?2.0孵育3?h后,存活率能达到71.04%;于2.0%的胆盐条件下孵育24?h,存活率为0.70%;依次经模拟唾液、胃液、肠液消化后,存活率仍能达到88.27%,但对HT-29细胞的黏附率较低,仅为1.93%,总体上菌株BLP12对体外模拟胃肠环境的适应性很强。该菌株经过16S基因序列鉴定为植物乳杆菌,可作为降糖益生菌株应用于降糖食品的开发。     

具有α-葡萄糖苷酶和二肽基肽酶Ⅳ抑制作用降糖益生菌的筛选

以实验室保藏的13株乳酸杆菌为研究对象,研究其细胞代谢物(cell-free,excretory,supernatants,CFS)和细胞内容物(cell-free,extracts,CFE)对α-葡萄糖苷酶和二肽基肽酶Ⅳ(dipeptidyl peptidase Ⅳ,DPP-Ⅳ)的抑制活性;然后对酶抑制率较高的菌株进行益生特性评价,以期筛选出具有潜在降糖作用的益生菌。结果表明,13株乳酸杆菌的CFS对α-葡萄糖苷酶具有一定的抑制作用,抑制率为0%～12.13%;CFE对α-葡萄糖苷酶无抑制作用。13株乳酸杆菌CFS和CFE对DPP-Ⅳ均表现出一定的抑制作用,抑制率分别为0%～7.13%和0%～55.42%。选取酶抑制率较高的嗜酸乳杆菌KLDS1.1003、KLDS1.0901和KLDS1.0902进行益生特性的研究。其中嗜酸乳杆菌KLDS1.0901表现出较高的酸耐受性,嗜酸乳杆菌KLDS1.1003表现出较高的胆盐耐受性和疏水性。主成分分析表明嗜酸乳杆菌KLDS1.1003的综合性能最佳:其对α-葡萄糖苷酶的抑制活性可达10.29%;对DPP-Ⅳ的抑制率为CFS,7.13%,CFE,50.14%;于pH,2.0的条件下孵育1,h后,存活率达到51.55%;在0.3%的胆盐条件下孵育,滞后时间为2.26,h;在二甲苯、乙酸乙酯和氯仿溶剂中的疏水率分别为134.33%、20.51%和344.08%,总体上嗜酸乳杆菌KLDS1.1003具有较高的酶抑制活性和良好的益生特性。     

鸡血藤提取物对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制作用

从鸡血藤中获得醇提物(alcohol extract, ESs)及水提物(water extracts, WSs),研究其对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制作用。结果表明,ESs的抑制效果显著高于WSs。为深入研究鸡血藤对2种酶的抑制作用,采用不同极性溶剂对ESs进一步萃取,获得W-ESs、D-ESs、N-ESs、E-ESs四个组分。实验结果表明,在同一浓度范围,ESs及4个组分的抑制效果存在差异。对α-淀粉酶的抑制效果为：W-ESs>D-ESs>ESs>N-ESs>E-ESs;对α-葡萄糖苷酶的抑制效果为：W-ESs>ESs>N-ESs>E-ESs>D-ESs。其中W-ESs对2种酶的抑制作用最好,IC₅₀值分别为(0.88±0.02) mg/mL和(15.82±2.79)μg/mL。绘制Lineweaver-Burk曲线确定酶抑制类型,结果显示,WSs、ESs、W-ESs及N-ESs对α-淀粉酶为反竞争性抑制,D-ESs和E-ESs为竞争性和非竞争性混合抑制。对于α-葡萄糖苷酶,W-ESs、D-ESs和E-ESs...     

马齿苋提取物对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制作用

目的：进一步研究干、鲜马齿苋的降血糖活性及降糖机制。方法：分别将干燥和新鲜马齿苋用乙醇为溶剂浸泡提取,制备干燥马齿苋乙醇提取物(Dried Portulaca oleracea L. ethanol extracts,DEP)和新鲜马齿苋乙醇提取物(Fresh Portulaca oleraceaL. ethanol extracts, FEP)。再分别将DEP和FEP用水混悬,依次用正己烷、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取,从DEP得到H-DEP、E-DEP、D-DEP和W-DEP,从FEP得到H-FEP、E-FEP、D-FEP和W-FEP。分别对DEP和FEP以及所得各种萃取物进行酶抑制活性测试,结果：E-FEP对2种酶的抑制作用最好,IC₅₀值分别为(0.094±0.001)mg/m L和(33.63±0.42)μg/m L。绘制Lineweaver-Burk曲线确定酶抑制类型：对于α-淀粉酶,H-DEP、E-DEP、H-FEP及E-FEP为非竞争性抑制,DEP、FEP、D-DEP、W-DEP、D-FEP及W-FEP为竞争性和非竞争性混合抑制;对于α-葡萄糖苷酶,H...     

南瓜多糖主要成分对α-葡萄糖苷酶的抑制作用

实验以南瓜为原料经水提、醇沉、脱蛋白、纯化,得到南瓜多糖PP-Ⅰ和PP-Ⅲ。分别对PP-Ⅰ和PP-Ⅲ进行纯度鉴定以及分子量、单糖组成的研究,并测定其对α-葡萄糖苷酶的抑制作用及抑制作用类型。结果表明,PP-Ⅰ和PP-Ⅲ主要由半乳糖、葡萄糖、甘露糖组成,且二者对α-葡萄糖苷酶均具有显著的抑制作用,且PP-Ⅲ对α-葡萄糖苷酶的抑制作用明显强于PP-Ⅰ(P<0.05)。PP-Ⅰ和PP-Ⅲ的抑制作用机制均为非竞争性抑制。     

儿茶素氧化聚合物的α-葡萄糖苷酶抑制作用研究

对绿茶的95%茶多酚提取物进行体外模拟茶叶发酵过程进行催化氧化,通过控制反应条件获得不同反应阶段的儿茶素氧化聚合物,考查不同氧化阶段儿茶素氧化聚合物的α-葡萄糖苷酶抑制活性。实验结果表明儿茶素氧化聚合物在0.5mg/mL时,对α-葡萄糖苷酶体外抑制活性均高于绿茶提取物和阳性对照品阿卡波糖,且不同氧化阶段生成的儿茶素组分对α-葡萄糖苷酶抑制活性存在一定的差异,氧化反应40min时所生成的氧化聚合物的酶抑制活性最强。以上结果表明发酵茶中所含有的儿茶素氧化聚合物对α-糖苷酶具有一定的抑制活性,作为安全有效的α-葡萄糖苷酶抑制剂类素材具有很好的开发前景。     

南瓜多糖对α-葡萄糖苷酶抑制作用的研究

实验目的:通过南瓜多糖(Pumpkin Polysaccharide,PP)对α-葡萄糖苷酶活性的影响,探讨南瓜多糖降血糖作用的可能机制.实验方法:实验依次采用加热浸提、有机溶剂分步萃取、减压浓缩、冷冻干燥等工艺方法制备南瓜多糖;提取正常大鼠小肠上段-α葡萄糖苷酶,酶活力采用P-硝基苯麦芽庚糖(PNPG)比色法进行测定,优化α-葡萄糖苷酶作用的最佳实验条件,考察南瓜多糖对α-葡萄糖苷酶活性的影响.实验结果:在实验优化的α-葡萄糖苷酶作用的反应条件下,即在反应时间2h、反应温度49℃、缓冲液pH6.0、底物PNPG浓度为10mmol/L的实验条件下,南瓜多糖对α-葡萄糖苷酶的抑制作用较弱.结论:南瓜多糖的降血糖作用不是通过抑制α-葡萄糖苷酶的活性实现的,而是通过其它途径实现的.     

醪糟发酵液对α-葡萄糖苷酶抑制作用的研究

通过一系列功能性实验，对醪糟发酵液的抗老年性痴呆、抗氧化、降血压、降血糖等作用进行了初步研究，发现醪糟发酵液抑制血管紧张素转换酶和α-葡萄糖苷酶的作用确切而且明显，具有潜在的降血压和降血糖作用。然后，主要研究了不同产地、不同发酵时间的醪糟发酵液以及它们在不同的稀释度下对α-葡萄糖苷酶的抑制作用，并排除了乙醇的抑制作用。发酵液经灭活、离心处理，用p-NPG（α-葡萄糖苷对硝幕苯酚）法测定α-葡萄糖苷酶的活性。结果表明，在原浓度下，不同产地的醪糟发酵液对α-葡萄糖苷酶的抑制效果基本相同；在醪糟发酵的过程中，发酵液对α-葡萄糖苷酶的抑制效果保持稳定，均在60％以上，且在发酵的第60-66h内抑制效果最好。此外，不同稀释度下的醪糟发酵液对α-葡萄糖苷酶的抑制效果不同，随着其浓度的增大，醪糟发酵液的抑制效果明显增强。这说明醪糟发酵液埘α-葡萄糖苷酶具有稳定的抑制作用（由于篇幅有限，降血压作用另作介绍）。     

具α-葡萄糖苷酶抑制作用的蚕豆蛋白酶解物的制备

以蚕豆为原料,通过碱溶酸沉法得到蚕豆蛋白,再通过酶解制备具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的蚕豆蛋白酶解物。以α-葡萄糖苷酶抑制率与水解度为指标,考察蛋白酶种类、酶解温度、酶解pH、料液比、加酶量与酶解时间对蚕豆蛋白酶解的影响,在此基础上采用响应面法对工艺参数进行优化。结果表明：酶解蚕豆蛋白制备具有α-葡萄糖苷酶抑制作用酶解物的最优工艺条件为以碱性蛋白酶为最适用酶、酶解温度50 ℃、酶解pH 8.5、酶解时间4.3 h、料液比1∶ 10、加酶量14 000 U/g,在此条件下酶解物α-葡萄糖苷酶抑制率为（38.58±0.87）%,蛋白水解度为22.87%。