罗非鱼肌浆蛋白源抗氧化肽的制备、分离纯化及其体外抗氧化活性

采用木瓜蛋白酶对罗非鱼肌肉蛋白组分(肌浆蛋白、肌原纤维蛋白、基质蛋白)进行酶解,研究罗非鱼不同蛋白组分酶解产物的抗氧化活性,并通过超滤、凝胶过滤色谱、反相高效液相色谱对高活性肌浆蛋白组分抗氧化肽进行分离纯化,同时对纯化后的抗氧化肽氨基酸组成予以分析.结果表明:罗非鱼肌浆蛋白酶解物(tilapia sarcoplasmi...     

雨生红球藻新型抗氧化肽的制备纯化、鉴定筛选及其对秀丽线虫抗氧化能力的影响

为深入挖掘藻渣的高附加值,本实验开展雨生红球藻抗氧化肽的制备和活性研究。将雨生红球藻蛋白酶解物作为原料,以2,2’-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)（2,2’-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid),ABTS）阳离子自由基清除力为活性跟踪指标,通过超滤、制备型和分析型高效液相色谱,纯化制备抗氧化多肽组分;经高效液相色谱-串联质谱法鉴定氨基酸序列,同时采用分子对接技术筛选并确定雨生红球藻抗氧化肽,并揭示作用机理;基于秀丽隐杆线虫模型,评价藻多肽的体内抗氧化活性。结果表明,雨生红球藻多肽组分的抗氧化能力经分离后提高2.96倍,选择自由基清除力最强的组分i(0.25 mg/mL时ABTS阳离子自由基清除率（96.97±2.00）%)进行结构鉴定,获得10条多肽序列i-1～i-10;分子对接结果显示,i-1与ABTS阳离子自由基的最小结合自由能最低,表明其抗氧化能力最强,确定新型雨生红球藻抗氧化肽（Haematococcus pluvialis antioxidant peptide,HPp）序列为KFTPAP。体内实验表明,H...     

明胶抗氧化肽的分离、纯化及其清除羟自由基活性的研究

为制备具有抗氧化活性的明胶肽,本实验采用不同的酶水解明胶,并对酶解产物采用超滤技术分离,利用分光光度法检测超滤后所得多肽组分对羟基自由基(·OH)的清除能力;进一步对抗氧化活性较强的组分利用葡聚糖Sephadex C-25阳离子交换色谱、Sephadex G-50凝胶过滤色谱和C18反向高效液相色谱进行分离、纯化,并对其各组分清除·OH活性进行了研究,最后对所得洗脱组分中具有最强清除自由基活性的多肽组分的分析氨基酸组成,结果显示:组分中甘氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸含量较高的肽具有较好的抗氧化活性,·OH清除率达到55.37%。     

猪皮胶原蛋白抗氧化肽的分离纯化及体外抗氧化活性研究

采用碱性蛋白酶对猪皮胶原蛋白进行酶解,制备抗氧化肽。为了得到抗氧化活性高且纯度高的抗氧化肽,本实验采用多种体外抗氧化评价体系研究超滤获得的各分子质量段猪皮胶原蛋白抗氧化肽的体外抗氧化活性;依次采用离子交换色谱、凝胶色谱对猪皮胶原蛋白酶解液进行分离纯化。结果显示:超滤分离获得5~10ku的抗氧化肽较其他分子量范围的抗氧化肽具有较好的抗氧化活性;采用离子交换色谱、凝胶色谱两种分离方法分步分离能达到较好的分离纯化效果,离子交换色谱分离得到7个组分,其中组分P1对O-2·清除率最高,多肽浓度为0.85mg/mL时,清除率为46.30%,IC50值为1.24mg/mL;该组分经过凝胶色谱分离后得到2个组分,其中组分P1-B对O-2·清除率最高,多肽浓度为0.9mg/mL时,清除率为49.43%,IC50值为0.98mg/mL。     

大豆酸奶对秀丽隐杆线虫体内抗氧化和寿命的影响

该研究旨在利用野生型秀丽隐杆线虫N2对一款富含大豆异黄酮苷元的大豆酸奶进行生物活性评价。采用高效液相色谱法对该大豆酸奶中大豆苷元、黄豆黄素和染料木素的含量进行分析表明,结果表明其苷元含量比未发酵豆乳增加了26.4倍。采用体外抗氧化实验和野生型秀丽隐杆线虫N2对大豆酸奶的抗氧化活性进行评价,发现发酵后的混合豆乳对DPPH自由基、超氧自由基、ABTS+自由基的清除率分别为98.03%、73.77%、83.37%,比发酵前显著提高（P<0.05）。大豆酸奶样液可将秀丽隐杆线虫的平均寿命和最大寿命分别延长21.57%和22.58%;饲喂大豆酸奶样液后,线虫体内超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）活性显著增强,体内活性氧（ROS）水平显著下降（P<0.05）,线虫抗应激能力显著增加（P<0.05）。说明通过乳酸菌发酵制备高苷元含量的大豆酸奶,可有效提高产品抗氧化活性,并能延长秀丽隐杆线虫寿命。     

中华圆田螺肉抗氧化肽的分离纯化及小鼠体内外活性研究

采用超滤、大孔树脂、凝胶过滤色谱和半制备液相色谱对中华圆田螺肉的酶解液进行分离纯化,以DPPH自由基清除率、ABTS自由基清除率、铁离子还原能力(FRAP)、氧自由基吸收能力(ORAC)为指标,制备抗氧化肽,并通过小鼠体内抗氧化酶活性及MDA生成量进行测定试验。结果表明:分子质量1kDa部位的抗氧化活性最强,分离出的混合物抗氧化肽纯度达到90%。体外抗氧化活性显示,该抗氧化肽的DPPH自由基清除率、ABTS自由基清除率、ORAC均为最高,且ORAC与谷胱甘肽相比效果无显著差异(P0.05),通过小鼠体内抗氧化酶及MDA增加值的测定显示,除GSH-PX外,试验组与谷胱甘肽阳性对照组无显著差异(P0.05),说明试验所获得的抗氧化肽具有和谷胱甘肽相当的抗氧化活性,具有深层的开发利用价值。     

牡蛎多肽组分OE-I抗氧化活性及其对秀丽隐杆线虫抗衰老作用

采用超滤对牡蛎酶解液（oyster enzymatic hydrolysate,OE）进行分级,获得OE-I（＜5 kDa）、OE-II（5～10 kDa）与OE-III（＞10 kDa）3 个多肽组分。以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除能力、羟自由基清除能力、超氧阴离子自由基清除能力和亚铁离子螯合能力为指标,评价牡蛎多肽3 个组分的体外抗氧化活性。以秀丽隐杆线虫为模型,研究不同剂量牡蛎多肽组分OE-I对线虫寿命、急性氧化应激、热应激、体内抗氧化酶活力、体内活性氧和细胞凋亡的影响,测定线虫寿命相关基因的表达水平并分析其抗衰老机制。结果发现,牡蛎多肽组分OE-I的抗氧化活性最强,且与空白组相比,OE-I高剂量组线虫的寿命极显著延长（P＜0.01）;线虫体内3 种主要抗氧化酶中超氧化物歧化酶活力显著提高（P＜0.05）,过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶活力极显著提高（P＜0.01）,线虫体内活性氧的积累和细胞凋亡减少;此外,组分OE-I通过上调skn-1、daf-16、sod-3和mtl-1基因的表达,下调daf-2和age-1基因的表达,提高了线虫的应激抵抗能力。综上,牡蛎多肽组分OE-I可作为抗氧化和抗衰老的功能性食品基料。     

草鱼蛋白源抗氧化肽的分离及鉴定

利用超滤、离子交换色谱、高效逆流色谱以及凝胶过滤色谱等系列分离纯化技术从草鱼蛋白酶解产物中分离纯化抗氧化活性肽,分离过程中发现相对分子质量1～3kD 的组分抗氧化活性最强,且碱性肽组分的抗氧化活性强于酸性或中性肽组分、疏水性肽组分的抗氧化活性强于亲水性肽组分。最终借助反相高效液相色谱在线连接的电喷雾质谱结合氨基酸分析鉴定出一种抗氧化肽,一级结构序列为Pro-Ser-Lys-Tyr-Glu-Pro-Phe-Val,相对分子质量为966.3D。     

玉米谷蛋白抗氧化肽的分离纯化与活性研究

采用Alcalase蛋白酶酶解从玉米脱脂蛋白粉中分离得到的玉米谷蛋白,对酶解产物采用超滤、凝胶过滤层析和高效液相色谱法分离纯化玉米谷蛋白抗氧化肽,并研究其抗氧化活性。结果表明,Alcalase蛋白酶酶解玉米谷蛋白获得的抗氧化肽分子量主要集中在低于1 kDa,其DPPH自由基和羟自由基清除率分别为80.46%、81.36%。凝胶过滤层析得到抗氧化活性较高的组分P6、P7和P8,其DPPH自由基清除率分别为32.05%、24.43%、14.19%,多肽含量分别为0.638、0.253、0.158 mg/mL。高效液相色谱对这3个组分进一步分离纯化分别得到主要组分。     

酶解鸡血球制备抗氧化肽的工艺优化和分析鉴定

为挖掘家禽血液潜在的抗氧化特性,以鸡血球为原料,筛选最佳蛋白酶酶解制备抗氧化肽,并对酶解工艺进行响应面优化。采用超滤、阳离子交换色谱、凝胶色谱及高效液相色谱对酶解物进行连续分离纯化,并用质谱进行结构鉴定。结果表明,酸性蛋白酶水解血球蛋白制备的酶解物具有最高的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除能力（＞80%）。其最佳酶解条件为酶用量2%、酶解温度45?℃、酶解时间3.0?h,该条件下的DPPH自由基清除能力、超氧阴离子自由基清除能力和还原力分别为（98.31±0.66）%、（28.89±0.31）%和1.94±0.03。经系列分离纯化获得抗氧化活性最强的组分,其在质量浓度为0.1?mg/mL时,DPPH自由基清除能力和还原力分别为（87.16±1.59）%和0.21±0.01。经高效液相色谱-质谱联用技术鉴定,目标肽的氨基酸序列为MGQKDSYVGDEAQSKRGILT,分子质量为2?182.1?Da。     

Evaluation of Antioxidant Activities of Zein Protein Fractions

Zein protein was extracted from the by‐product corn gluten meal. The obtained zein protein was 1st hydrolyzed by 4 different proteases. The antioxidant activities of the hydrolysates or peptides were evaluated by free radical scavenging activity, metal ion chelating activity, and lipid peroxidation inhibitory capacity. Among hydrolysates produced, alkaline protease hydrolysates exhibited the highest antioxidant activity. A regression model was established by uniform design to optimize the alkaline protease hydrolysis conditions. The hydrolysates with molecular weight < 3 kDa obtained from ultrafiltration showed the highest antioxidant activities in all relevant assays. The hydrolysates with molecular weight <3 kDa were subsequently purified by gel filtration chromatography, and fraction F3 exhibited the highest antioxidant activities. Two peptides were identified from fraction F3 using LC‐ESI‐Q‐TOF MS/MS as Pro‐Phe (263.13 Da) and Leu‐Pro‐Phe (375.46 Da). These peptides exhibited good free radical scavenging activity and lipid peroxidation inhibitory effect. The results clearly indicated that zein protein fractions are good sources for the development of natural antioxidants for the food industry.     

海蓬子正丁醇萃取物的体外抗氧化性研究

对海蓬子的正丁醇萃取物,通过硅胶柱层析、葡聚糖凝胶LH-20柱层析、高效液相色谱分离进行纯化,得到一种活性成分SBF;通过LC-MS检测,确定其分子量为802。并对SBF的还原能力、对羟自由基、DPPH自由基的清除能力和对脂质过氧化的抑制能力进行检测,研究其体外抗氧化活性。研究结果表明,SBF具有一定还原能力,对羟自由基、DPPH自由基都有一定的清除能力,但均小于阳性对照VC;SBF对脂质过氧化也具有一定抑制作用,在浓度小于1.2mg/mL时,抑制作用大于VC,在浓度大于1.2mg/mL时,抑制作用小于VC。     

牛乳源促睡眠肽的体外抗氧化活性评价及对秀丽隐杆线虫的体内抗氧化作用

为研究乳源促睡眠肽抗氧化、抗衰老活性,本实验采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基、2,2'-联氮-双-3-乙基苯并噻唑-6-磺酸(2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid),AB...     

发酵祛湿汤体外抗氧化活性及对秀丽隐杆线虫抗衰老作用

利用自由基清除能力评价发酵祛湿汤（Fermented Qushi Decoction,FQD）的体外抗氧化活性;结果显示,与未发酵祛湿汤（Qushi Decoction,QD）相比,高剂量FQD组的总抗氧化能力显著提高,其中1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基清除率、羟自由基清除率和总还原能力分别提高了24.38%、11.98%、11.76%。FQD对线虫总产卵量无显著影响,并能促进线虫的运动;与QD相比,FQD干预后线虫平均寿命延长了8.02%～26.36%;在热应激条件下,FQD组最长存活时间提高了25%,在氧化应激下,FQD组线虫的生存时间较QD提高了16.67%。此外,FQD作用后,线虫体内抗氧化酶活性显著增强（P<0.05）,脂褐质的堆积水平降低。综上,FQD通过提高体外抗氧化能力,延长线虫寿命,提升抵抗应激能力和抗氧化酶活性来延缓线虫的抗衰老作用。该研究初步表明发酵祛湿汤具有抗衰老作用,为保健品开发和利用提供理论基础。     

菜籽多肽体外和细胞内抗氧化性评价及氨基酸分析

本研究以Alcalase 2.4L酶解“双低”油菜籽宁杂19号得到的菜籽蛋白酶解物（rapeseed protein hydrolysate,RPH）为原料。通过超滤和凝胶色谱分离其活性肽组分,对酶解液及各分离组分进行抗氧化活性研究,并对抗氧化能力最高的组分进行氨基酸分析。结果表明：通过超滤将RPH分离成4 组不同分子质量范围的多肽组分,其中RPH-P4（分子质量＜3 kD）具有最高的抗氧化活性;RPH-P4经Sephadex G-15凝胶柱分离后得到3 个洗脱峰,收集并测定其活性,研究发现RPH-P4-S3抗氧化能力远高于其他2 个组分（P＜0.05）,氧自由基吸收能力（oxygenradical absorbance capacity,ORAC）、细胞抗氧化活性（cellular antioxidant activity,CAA）、细胞内CAA实验的EC50值分别为（1 951.90±20.35） μmol TE/g、（143.38±4.11） μmol QE/g、（45.63±3.67） μg/mL;对RPH-P4-S3进行了氨基酸分析,发现其抗氧化性氨基酸含量达到72.90%,必需氨基酸含量为53.52%。研究认为,菜籽蛋白Alcalase 2.4L酶解物分离组分RPH-P4-S3具有较高的抗氧化活性及营养价值,可以作为功能性成分用于抗氧化相关的功能食品和保健品的开发。     

Study on Antioxidant Activity and Amino Acid Analysis of Rapeseed Protein Hydrolysates

Alkaline extraction followed by acid precipitation were employed to extract rapeseed protein and, Alcalase 2.4 L was used to obtain rapeseed protein hydrolysates. Three groups of rapeseed protein hydrolysates were obtained by purifying with membrane ultrafiltration and a Sephacryl S-100HR gel column. The antioxidant activities were then determined. Group 3 had the best antioxidant activities according to the oxygen radical absorbance capacity, peroxyl radical-scavenging capacity, and cellular antioxidant activity assays, with the following antioxidant values: an oxygen radical absorbance capacity value of 1610 ± 113 µmol TE/(g sample), a peroxyl radical-scavenging capacity value of 622 ± 30 mg VC/(100 g sample), and a cellular antioxidant activity value of 25 ± 2 µmol QE/(g sample) and corresponding EC₅₀ value of 58 ± 3 µg/mL. Six peaks of group 3 were collected and well separated by reversed phase–high-performance liquid chromatography. Peak 5 were identified to exhibit a higher antioxidant activity, the amino acid sequence of which was found to be Trp-Ile (Leu)-Tyr, as determined by liquid chromatography–mass spectrometry.     

麦胚清蛋白抗氧化肽的筛选及对细胞氧化损伤的保护作用

本研究运用超滤与凝胶层析等分离纯化技术逐级分离麦胚清蛋白中性蛋白酶酶解产物,以氧化自由基吸收能力（oxygen radical absorbance capacity,ORAC）与2,2’-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)（2,2’-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonicacid),ABTS）阳离子自由基清除率为评价指标,筛选具有较高抗氧化活性的产物组分,并以该组分为研究对象,利用液相色谱-串联质谱结合PeptideRanker数据库活性预测技术筛选出具有高抗氧化活性的小肽,并通过高糖诱导血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）及H2O2诱导HepG2细胞与VSMCs建立细胞氧化应激模型,评价小肽对细胞氧化损伤的保护作用。结果表明,经超滤与层析筛选出分子质量较小的V组分抗氧化活性最高,液相色谱-串联质谱鉴定出该组分主要由20 个小肽组成,PeptideRanker预测与抗氧化实验验证发现肽序列LNYPPY（765.3 Da）抗氧化活性最高（ORAC 3.01 μmol TE/μmol）、ABTS阳离子自由基清除率95.58%）。肽序列LNYPPY对H2O2诱导的HepG2细胞和VSMCs氧化损伤具有很好的保护作用,但对高糖诱导的VSMCs异常增殖以及活性氧水平上升无明显影响。综上,肽LNYPPY具有良好的体外抗氧化活性,且对H2O2诱导的细胞氧化损伤具有保护作用,研究可为麦胚清蛋白的开发利用提供重要的理论参考。     

脱脂羊脑蛋白水解多肽的分离纯化及抗氧化活性

为制备羊脑蛋白抗氧化肽,本实验对脱脂羊脑蛋白含量及氨基酸组成进行了分析;采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）对枯草芽孢杆菌中性蛋白酶不同酶解时间的酶解液分子质量进行了分析;采用交联葡聚糖凝胶Sephadex G-25和Sephadex G-15对羊脑酶解产物进行了逐级分离纯化,以羟自由基（·OH）和亚硝酸根离子清除能力为指标对分离组分进行抗氧活性评价,并对纯化后的组分抗氧化活性进行了测定。结果表明,脱脂羊脑粉中蛋白含量为60.55%,在测定的17 种氨基酸中,谷氨酸和天冬氨酸这两种酸性氨基酸含量最高,且含有7 种必需氨基酸;羊脑蛋白经酶解后,分子质量集中在10 kD以下;经Sephadex G-25纯化后,得到了6 个组分,其中组分F4的抗氧化活性最强,组分F4经SephadexG-15纯化后,得到3 个组分,其中组分F4-2的抗氧化活性最强,组分F4-2对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、·OH、超氧阴离子自由基（O2－·）、亚硝酸根离子的半数抑制率IC50分别为1.64、2.47、7.98、5.14 mg/mL。