HPLC法测定不同产地黑豆皮中矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的含量

目的：建立黑豆皮中矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的含量测定方法,测定5个不同产地黑豆皮中矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的含量。方法：采用HPLC法测定黑豆皮中矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的含量,色谱柱采用Phenomenex Luna Su C18 柱 (250mm×4.60mm,5μm);流动相A相为0.5%磷酸溶液,B相为水-乙腈(50:50),进行梯度洗脱;流速0.8mL/min;检测波长520nm;柱温30℃;进样量10μL。结果：矢车菊素-3-O-葡萄糖苷标准曲线回归方程为：Y＝2×107X－33120(r＝0.9998),在 0.1041～1.041μg范围内线性关系良好,平均回收率分别为92.4%、 92.5%和95.5%,不同产地黑豆皮中矢车菊素-3-O-葡萄糖苷含量范围为5.263～12.829mg/g。结论：所用方法简便、准确,可用于不同产地黑豆皮的质量控制。     

肉豆蔻酰矢车菊素-3-O-葡萄糖苷在混合溶剂体系中的酶法合成

为了提高矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(C3G,Cyanidin-3-O-glucoside)的稳定性及亲脂性,本研究用固定化脂肪酶Lipozyme 435催化肉豆蔻酸甲酯对C3G进行酰基化修饰.首先分别在单一有机溶剂和混合有机溶剂中进行酰基化反应,然后通过半制备液相色谱对C3G酰基化衍生物进行分离纯化,并通过液质联用和核...     

矢车菊素-3-O-葡萄糖苷进入巨噬细胞的荧光检测

利用荧光技术探索矢车菊素-3-O-葡萄糖苷（cyanidin 3-O-glucoside,C3G）在体外培养的巨噬细胞中的分布。首先采用荧光分光光度法扫描C3G的特异激发波长和发射波长,再利用激光共聚焦技术探讨C3G进入小鼠和人巨噬细胞的过程以及C3G在细胞中的定位,并分析C3G孵育时间对细胞内荧光强度变化的影响。结果表明：在488 nm和520 nm的激发波长下,C3G孵育15 min的细胞质内开始呈现绿色和红色荧光,并且随着孵育时间的变化,细胞内荧光强度逐渐增强,其中孵育60 min可观察到荧光布满细胞核,其荧光强度是孵育前的6.45 倍。研究表明采用特异波长的激光共聚焦断层扫描技术可示踪到花色苷在干预细胞内的分布,结果显示花色苷C3G可快速穿过巨噬细胞的细胞膜和核膜,直达细胞核。     

HPLC法测定黑米矢车菊素-3-葡萄糖苷

建立水浴震荡提取-高效液相色谱法测定黑米中矢车菊素-3-葡萄糖苷(Cy-3-G)的方法。确定了HPLC法测定Cy-3-G的测定条件,通过响应面优化试验确定了水浴震荡提取黑米中Cy-3-G的最优提取条件。实验得HPLC法测定Cy-3-G的条件为:色谱柱(C18,150mm×4.6mm,5um),柱温30℃,进样体积10u L,检测波长520nm,流动相A(甲醇)-B(1%甲酸水溶液),流速1m L/min,梯度洗脱:0~3min,A∶B(20∶80);3~17min,A∶B(20∶80~30∶70);17~20min,A∶B(30∶70~20∶80)。最优提取条件为:溶剂是含0.8%盐酸的50%乙醇水溶液、料液比1∶20、提取次数2次、温度70℃、时间20min,Cy-3-G的得率为0.728%。结果表明水浴震荡提取法实现了黑米中Cy-3-G的高效提取,满足样品测定的前处理需求;建立的HPLC法测定黑米中Cy-3-G的方法操作简便、重复性好、测定结果精密度高。     

黑米矢车菊素-3-O-葡萄糖苷及其月桂酸酰化物对小鼠肠道免疫功能的影响

目的 研究黑米矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(cyanidin-3-O-glucoside,C3G)及其月桂酸的酰化产物(cyanidin-3-glucoside lauryl ester,L-C3G)对小鼠肠道免疫功能的影响.方法 以小鼠为试验动物,经过低、中及高剂量的C3G和L-C3G灌胃28 d后,测定小鼠的体重、肠...     

矢车菊素-3-O-葡萄糖苷保护RAW264.7细胞免受过氧化氢诱导的氧化损伤

本研究旨在探究矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(cyanidin-3-O-glucoside,C3G)对H2O2诱导RAW264.7细胞氧化损伤的保护作用及其机制.通过噻唑蓝法测定C3G和过氧化氢分别对RAW264.7细胞存活率的影响;采用酶联免疫吸附测定法检测细胞内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,...     

聚酰胺树脂分离纯化黑米中矢车菊素-3-葡萄糖苷工艺研究

通过单因素试验和正交试验,确定了聚酰胺树脂分离纯化黑米中矢车菊素-3-葡萄糖苷的最佳工艺参数。以矢车菊素-3-葡萄糖苷得率为考察指标时,其最佳工艺条件为:上样液pH4、上样液质量浓度25mg/ml、上样液流速6ml/min、洗脱液乙醇体积分数50%、洗脱流速3ml/min;以纯度为考察指标时,该最佳工艺条件为:上样液pH3、上样液质量浓度25mg/ml、上样液流速3ml/min、洗脱液乙醇体积分数30%、洗脱流速6ml/min。聚酰胺树脂能有效纯化黑米花色苷,最终所得样品纯度达到80.84%,大部分黄酮类杂质被有效去除。     

HPLC法测定黑米中矢车菊素-3-葡萄糖苷含量的不确定度评定

评定HPLC法测定黑米中矢车菊素-3-葡萄糖苷含量的不确定度。建立相应的数学模型,运用测量不确定度的基本方法,对模型中各影响因素的不确定度进行计算和评定。结果表明样品液中矢车菊素-3-葡萄糖苷浓度的不确定度是合成不确定度的主要来源,其中影响最大的是曲线拟合过程带来的不确定度,其次是标准样品配制带来的不确定度;按照JJF1059-2012《测量不确定度评定与表示》对各不确定度分量合成和扩展,当取置信概率95%,最终得到测量结果的扩展不确定度为0.058g/100g(k=2)。本方法对HPLC法测定矢车菊素-3-葡萄糖苷含量结果的不确定度评定具有参考作用。     

复配条件对矢车菊素-3-O-葡萄糖苷与β-胡萝卜素复合模拟体系物化稳定性的影响

为探讨富含花色苷及类胡萝卜素的复合果蔬汁中花色苷及类胡萝卜素的降解机制,选择自然界中分布最广、含量最多的花色苷及类胡萝卜素——矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(C3G)及β-胡萝卜素为对象,构建模拟体系,研究金属离子、pH值、糖种类及含量对C3G和β-胡萝卜素稳定性的影响。结果表明,C3G和β-胡萝卜素热降解均符合一级反应动力学,且两者的降解反应均为吸热非自发反应。C3G和β-胡萝卜素经复合后,C3G的稳定性无显著变化,而β-胡萝卜素稳定性降低。此外,不同糖种类及浓度对复合模拟体系中的C3G和β-胡萝卜素热降解的影响不同。糖类对C3G的促降解作用依次为果糖＞蔗糖＞葡萄糖,且随糖浓度的增大,花色苷稳定性逐渐增加。而3种糖类对β-胡萝卜素的作用不显著,且随糖浓度的增大,β-胡萝卜素稳定性逐渐下降。研究结果为富含花色苷及类胡萝卜素的复合果蔬汁的研发提供了理论依据。     

黑米花色苷矢车菊素-3-O-β-葡萄糖苷对脂多糖诱导的人THP-1单核细胞炎症损伤的保护作用

单核细胞介导的炎症反应在动脉粥样硬化发生和发展过程中起关键作用。花色苷是一种具有多种生物学活性的多酚类黄酮化合物,富含于各种深色的蔬菜、水果及谷类中,其中矢车菊素-3-O-β-葡萄糖苷（cyanidin-3-O-β-glucoside,Cy-3-g）是花色苷中重要的单体,本研究旨在探讨黑米来源的Cy-3-g对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的人单核白血病细胞（Tohoku hospital pediatrics-1,THP-1）炎症损伤的作用及可能的分子机制。采用乙醇-盐酸溶液浸提、大孔树脂吸附洗脱等步骤得到黑米花色苷粗提物,然后用中压液相层析联合紫外检测提取得到纯化的Cy-3-g（纯度>96.5%）。用不同质量浓度（0、0.10、0.25μg/mL和0.50μg/mL）Cy-3-g与THP-1细胞共孵育4 h,然后加入LPS（质量浓度50 ng/mL）与细胞继续孵育48 h,用酶联免疫吸附试验法测定培养液中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、IL-8、IL-10和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis fac...     

矢车菊-3-O-葡萄糖苷及其代谢物原儿茶酸对杂环胺诱导细胞损伤的修复机制

目的：研究矢车菊-3-O-葡萄糖苷（cyanidin-3-O-glucoside,C3G）及其主要代谢物原儿茶酸（protocatechuic acid,PCA）对杂环胺诱导细胞损伤的修复机制。方法：分别采用2-氨基-3-甲基咪唑并[4,5-f]喹啉（2-amino-3-methylimidazo[4,5-f]quinoline,IQ）和2-氨基-1-甲基-6-苯基-咪唑[4,5-b]吡啶（2-amino-1-methyl-6-phenylimidazo[4,5-b]pyridine,PhIP）诱导HepG2细胞损伤,利用细胞毒性实验（cell counting kit-8,CCK-8）、Hoechst33258染色法、流式细胞术和实时荧光定量聚合酶链式反应（quantitative polymerase chain reaction,qPCR）技术,评价C3G和PCA对杂环胺诱导损伤细胞的存活情况、细胞周期以及凋亡和DNA损伤关键基因表达的影响。结果：C3G和PCA能够显著提高杂环胺损伤细胞的存活率（P<0.05）,并使细胞发生S期阻滞。与IQ单独损伤组相比,C3G和PCA均可...     

矢车菊素-3-葡萄糖苷对人巨核细胞株Dami增殖分化的影响

目的：研究植物花色苷单体矢车菊素-3-葡萄糖苷（cyanidin-3-O-β-glucoside,Cy-3-g）对人巨核细胞株Dami的增殖、分化作用。方法：不同浓度的花色苷Cy-3-g（0.05、0.50、5.00、50.00、100.00 mmol/L）与人巨核细胞株Dami细胞共同培养,并将用完全培养基培养的细胞设为对照组。培养结束后,用台盼蓝染色法检测巨核细胞活性、噻唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）染色法检测细胞增殖能力,软琼脂细胞集落培养法观察巨核细胞集落生成情况。采用Giemsa染色法观察细胞形态、流式细胞术检测巨核细胞DNA多倍体的生成及细胞表面CD41阳性表达率。结果：与对照组相比,50.00、100.00 mmol/L的Cy-3-g可增强Dami细胞活性,差异具有统计学意义（P＜0.05）;各Cy-3-g剂量组与对照组相比,均可明显增强Dami细胞增殖能力（P＜0.01）;Dami细胞集落数目、DNA多倍体数目以及CD41的阳性表达率在50.00、100.00 mmol/L Cy-3-g作用下明显升高,且与对照组相比均具有统计学差异（P＜0.01）。结论：Cy-3-g能够明显促进人巨核细胞株Dami的增殖、分化,这可以为花色苷促进血小板生成提供可能的理论依据。     

利用中压制备液相色谱从桑葚中快速制备矢车菊素-3-葡萄糖苷单体

单体花色苷的快速大量制备长久以来是花色苷产业化中的难题,而中压制备液相色谱在产业应用中有着很大的开发空间。选取花色苷组分较单一的桑葚为实验原料,经提取分离总花色苷后使用填装有反相C18填料的耐压玻璃柱作为中压制备液相色谱柱,纯化制备矢车菊素-3-葡萄糖苷单体。结果显示：3 个色谱分离峰中目的峰（峰2）经高效液相色谱和质谱确证为由矢车菊素-3-葡萄糖苷（cyanidin-3-glucoside,C3G）和矢车菊素-3-芸香糖苷（cyanidin-3-rutinoside,C3R）组成,采用峰面积归一化法计算得到C3G纯度为73.56%;通过对峰2采用切割方式进行收集,C3G纯度达到98%以上,单次收集到C3G单体溶液650?mL。中压制备液相色谱法单次上样量大、步骤简洁、成本低廉,可为矢车菊素-3-葡萄糖苷单体的规模化生产提供一定的参考。     

双标样高效液相色谱法测定紫玉米花青素的含量

采用分子量校正系数减小由于样品分子量与标样不同造成的偏差;根据紫玉米花青素中矢车菊素-3-葡萄糖苷和芍药色素-3-葡萄糖苷及其衍生物含量为主要组成部分,选择矢车菊素-3-葡萄糖苷和芍药色素-3-葡萄糖苷为标样的双标样高效液相色谱法分别计算相应衍生物含量减小由于样品母环与单一标样不同造成的偏差,最终确定紫玉米花青素含量为93.77 mg/g.并证实该方法的精密度、重复性和稳定性均较高.     

矢车菊素-3-葡萄糖苷与四种乳蛋白相互作用的研究

采用荧光光谱法、傅里叶红外光谱法和圆二色谱法,研究矢车菊素-3-葡萄糖苷(cyanidin 3-O-glucoside,C3G)与α-酪蛋白、β-酪蛋白、乳清蛋白和β-乳球蛋白的相互作用。结果表明,C3G对上述四种乳蛋白都产生了荧光静态猝灭作用,在溶液中C3G与乳蛋白相互结合摩尔比约为1:1,且由热力学参数判定C3G与α-酪蛋白结合的分子间作用力为氢键与范德华力,而与β-酪蛋白、乳清蛋白和β-乳球蛋白结合主要靠静电引力。通过比较C3G与α-酪蛋白、β-酪蛋白、乳清蛋白和β-乳球蛋白相互作用的荧光猝灭率(84%、74%、77%、75%);温度分别为298、318、338 K时的结合常数(423.448、362.994、28.655×10⁴ L/mol;9.524、8.056、8.308×10⁴ L/mol;9.262、6.940、7.889×10⁴ L/mol;30.440、11.830、17.262×10⁴ L/mol);结合距离(2.17、2.66、2.18、2.19 nm),由此得出α-酪蛋白与C3G结合最紧密。傅里叶红外光谱和圆二色谱分析显示,C3G的加入使得α-酪蛋白的α-螺旋增加,β-折叠和转角降低;β-酪蛋白的α-螺旋、β-折叠和转角均增加;乳清蛋白的α-螺旋、β-折叠和转角均无明显变化;β-乳球蛋白的α-螺旋降低,β-折叠和转角增加。C3G对四种乳蛋白均有较强的结合能力,可以使其构象发生变化。     

七种花色苷色素中矢车菊-3-葡萄糖苷含量研究

目的:调查研究七种花色苷色素中矢车菊-3-葡萄糖苷的含量.方法:实验采用高效液相色谱法,检测条件为Ultimate(R)LP-C18(5μm,250mm ×4.6mm)色谱柱;甲酸水溶液(1∶9)∶甲醇=85∶15(v/v)梯度洗脱;流速1mL/min;柱温30℃;检测波长535nm.结果:萝卜红、甘薯红、甜菜红中不含矢车菊-3-葡萄糖苷,葡萄皮色素、欧洲越橘色素、红米红、甘蓝红中矢车菊-3-葡萄糖苷含量分别为5.09％、4.15％、10.84％、0.03％.结论:七种花色苷色素中矢车菊-3-葡萄糖苷含量存在明显差异,葡萄皮色素、欧洲越橘红色素、红米红中矢车菊-3-葡萄糖苷含量较高,为矢车菊-3-葡萄糖苷的进一步开发利用提供了可靠的理论依据.     

矢车菊素-3-葡萄糖苷对骨骼肌细胞脂蛋白脂肪酶活性的影响

富含矢车菊素-3-葡萄糖苷(Cy-3-g)的花色苷提取物可抑制肥胖,但其作用机制不明。骨骼肌细胞脂蛋白脂肪酶(LPL)活性与肥胖相关,LPL使骨骼肌中的β-脂肪酸氧化增强,从而加速清除体内循环的甘油三酯(TG),抑制TG流向脂肪组织积聚而导致肥胖。本实验建立稳定的骨骼肌细胞分离培养方法,通过花色苷Cy-3-g干预骨骼肌细胞,研究Cy-3-g对细胞LPL活性的影响及其作用机制。结果表明：Cy-3-g通过激活一磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)上调骨骼肌细胞LPL活性,提示Cy-3-g具有潜在的调节机体脂代谢作用,与含Cy-3-g的花色苷提取物的肥胖抑制作用密切相关。     

矢车菊素-3-葡萄糖苷通过AMPK抑制成熟脂肪细胞脂蛋白脂酶活性

通过矢车菊素-3-葡萄糖苷(Cy-3-g)干预成熟脂肪细胞,研究Cy-3-g对细胞脂蛋白脂酶(LPL)活性的影响及其作用机制。结果表明:Cy-3-g通过激活一磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)抑制成熟脂肪细胞的LPL活性,提示Cy-3-g具有潜在的调节机体脂代谢作用,与含Cy-3-g的花色苷提取物的肥胖抑制作用密切相关。     

黑果小檗果实中锦葵素-3-O-葡萄糖苷的分离纯化及安全性研究

目的 建立并验证黑果小檗果实中锦葵素-3-O-葡萄糖苷(malvidin 3-O-glucoside, Ma-3G)的分离纯化方法,并评估其安全性。方法 利用超声辅助浸提法提取黑果小檗果实中的花色苷(Berberis atrocarpa Schneid anthocyanin,BHSA)粗提物,将BHSA粗提物用乙酸乙酯萃取,AB-8大孔吸附树脂、聚酰胺树脂纯化,采用Sephadex LH-20凝胶柱对纯化后BHSA进行分离,分别考察洗脱液浓度、上样量对花色苷不同组分分离效果的影响,并筛选出最佳分离条件,将最佳条件下分离得到的Ma-3G进行紫外可见光谱扫描及高效液相色谱法检测。采用固定剂量法对小鼠以2000 mg/kg Ma-3G的单次口服剂量进行安全性实验。结果 经乙酸乙酯萃取、AB-8大孔吸附树脂、聚酰胺树脂纯化后得到BHSA粗品纯度为50.76%, Sephadex LH-20凝胶柱层析的最佳分离条件为上样量20 mg,洗脱液为含有0.5%HCl的20%甲醇溶液,在此条件下成功获得了Ma-3G单体。使用面积归一化法进行纯度测定,结果显示其纯度为99.48%。黑果小檗果实中Ma-3...     

矢车菊素-3-葡萄糖苷与大豆蛋白相互作用的多重光谱分析及分子对接

采用多重光谱技术和分子对接技术,研究矢车菊素-3-葡萄糖苷（cyanidin-3-glucoside,C3G）与β-伴大豆球蛋白和大豆球蛋白的相互作用。结果表明,C3G以静态、动态组合模式强烈的猝灭β-伴大豆球蛋白/大豆球蛋白的内源荧光,且C3G对大豆球蛋白的结合亲和力强于β-伴大豆球蛋白。C3G与β-伴大豆球蛋白/大豆球蛋白结合的主要相互作用力不同,但n（结合位点数）表明C3G和大豆蛋白以物质的量比1∶1形成稳定的复合物。C3G能够诱导大豆蛋白二级结构部分展开,促使部分α-螺旋转变为β-折叠,使大豆蛋白多肽链解折叠;并降低β-伴大豆球蛋白色氨酸残基微环境疏水性,而对大豆球蛋白氨基酸残基微环境没有明显影响。C3G的大部分酚羟基参与成键,其与大豆蛋白的结合依靠疏水作用力和氢键为主导的多种作用力维持。大豆球蛋白对C3G具有更好的稳定、递送性能,但可能不利于C3G生物活性的发挥。