黑豆纳豆激酶粗提取物的免疫调节作用

以壶关大黑豆为原料发酵纳豆,分离得到黑豆纳豆激酶粗提取物（BNCE）,对其结构进行初探,测定其酶活力和溶栓能力,并研究BNCE的免疫调节作用。通过红外光谱分析和扫描电镜对BNCE结构进行鉴定;分别使用纤维蛋白平板法和动物血块法测定BNCE的酶活及其对小鼠血块的体外溶栓作用;用MTT比色法探究BNCE对RAW264.7细胞增殖的影响;中性红染色法测定BNCE对RAW264.7细胞吞噬率的影响;ELISA法检测BNCE对RAW264.7细胞分泌IL-6、TNF-α和IL-1β的影响。结果表明,BNCE具有蛋白质的化学结构,表观呈现大小不同且无规则的碎片形状,具有一定的纤溶活性和体外溶栓作用。BNCE可以促进正常状态以及LPS激活状态下RAW264.7细胞的增殖,增强其吞噬率,并且有浓度依赖性。另外,BNCE还可以促进正常状态下的RAW264.7细胞TNF-α和IL-1β的分泌,抑制IL-6的分泌;也能抑制LPS激活状态下RAW264.7细胞IL-6、TNF-α和IL-1β的分泌。因此,BNCE具有一定的免疫调节作用,在食品工业上可以作为保健食品的一种优质原料。     

纳豆发酵及后处理生产工艺对纳豆激酶活性的影响

跟踪了纳豆发酵过程中纳豆激酶的变化.考察了纳豆冻干粉在模拟胃肠环境、冷冻干燥以及破碎过程中的酶活损失情况,为纳豆胶囊生产过程中工艺确立、剂型选择和食用方法提供了技术基础.     

纳豆激酶液体深层发酵技术的研究

本文研究了纳豆菌株ZN-4 (Bacillus natto)的液体深层发酵条件及其对纳豆激酶活力的影响,结果表明:纳豆菌株ZN-4液体深层发酵的最佳培养基配方为:葡萄糖2 %,大豆蛋白胨1 %,Na2HPO4 0.6 %,NaH2PO4 0.1 %,MgSO4 0.05 %,CaCl2 0.02 %;最佳培养基起始pH 7.0,接种量为3 %,最适发酵温度为35 ℃.在此条件下,摇瓶、50 L罐和500 L罐发酵酶活最高分别达到1903 U/mL、2210 U/mL和1934 U/mL.     

纳豆激酶高产菌株的筛选及纳豆激酶的初步分离研究

从日本传统食品纳豆中筛选获得一株高产纳豆激酶的盐芽孢杆菌菌株,其产酶能力为227IU/g。该菌株经过固体发酵后获得含酶发酵物,采用硫酸铵分步盐析的方法对纳豆激酶进行了分离纯化,其沉淀物即纳豆激酶,经过分步盐析纳豆激酶的纯化倍数为1.34。     

胃蛋白酶对纳豆激酶的化学修饰研究

纳豆激酶(Nattokinase,NK),具有很强的溶血栓作用,它是一种在纳豆发酵中由纳豆杆菌(Bacil-lusnatto)或纳豆枯草杆菌(Bacillussubtilisnato)产生的丝氨酸蛋白酶。用胃蛋白酶作为修饰剂,对纳豆激酶进行水解切割,可使纳豆激酶暴露更多的底物结合部位,从而使得酶活性增加。实验得到了最佳修饰条件:修饰pH为6.5、修饰温度为39℃、修饰作用时间为8h。通过修饰,NK的活性可提高6倍,其热稳定性和耐酸性也得到改善     

纳豆冻干粉对抗生素介导小鼠免疫调节作用及细胞因子分泌的影响

本实验旨在探究纳豆冻干粉（natto lyophilized powder,NLP）对昆明小鼠免疫功能及其细胞因子分泌的影响。选取体质健康昆明小鼠128 只,随机分为8 组：空白对照组（C组）、调节组（R0组和RN1、RN2、RN3组）4 组、预防组（P0、PN组）2 组、模型组（M组）。除C组外,其他各组灌胃3 d抗生素溶液,之后R0组灌胃生理盐水,RN1～RN3组灌胃不同剂量的NLP溶液;预防组每天继续灌胃抗生素溶液,8 h后P0、PN组分别灌胃生理盐水和NLP溶液;M组灌胃抗生素溶液。30 d后测定免疫指标及其细胞因子分泌量的变化情况。结果表明：与M组相比,低剂量的NLP能够极显著增加小鼠的脾脏指数和胸腺指数（P＜0.01）,RN1、RN2、RN3组小鼠血清中白细胞介素-2（interleukin-2,IL-2）、IL-10、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、干扰素-γ（interferon-γ,IFN-γ）的分泌量极显著增加（P＜0.01）,同时,RN1、RN2、RN3组均能够极显著增加小鼠血清中诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）活力（P＜0.01）,RN1、RN3组小鼠血清中白蛋白、球蛋白的含量和二者比值（白球比）及NO水平显著或极显著增加（P＜0.05或P＜0.01）。C组、调节组、预防组小鼠的血清溶血素水平较对照组均极显著升高（P＜0.01）。RN1、RN2、RN3、PN组较M组均能够极显著增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬作用（P＜0.01）。与C组相比,RN1、RN2、RN3组小鼠的半数溶血值显著或极显著升高（P＜0.05或P＜0.01）。RN3和PN组可极显著增加巨噬细胞吞噬百分率、鸡红细胞的吞噬数（P＜0.01）。结果表明NLP具有免疫增强作用和增加细胞因子分泌的作用。     

溶栓纳豆芽孢杆菌的筛选鉴定及产纳豆激酶条件的研究

利用目标纳豆芽孢杆菌(Bacillus Natto)所应具有的耐热性、耐盐性、显著的蛋白酶活性及生物素缺陷等生物学特性,设计了定向选育方案,从日本传统食品纳豆中筛选出具有较高纤溶活性的8株枯草芽孢杆菌,命名为 NK-1～NK-8；根据菌落形态、生理生化特征,鉴定为纳豆芽孢杆菌。NK-4菌株经过发酵培养,液体培养指数生长期为4～12h,最佳产酶条件是 pH7．0,培养温度34℃,装液量100mL/500mL。     

黑牛肝菌多糖对小鼠酒精性肝损伤的改善作用

目的:旨在研究黑牛肝菌多糖（refined polysaccharide from Boletus aereus,RPBA）对小鼠酒精性肝损伤的保护作用。方法:将60只小鼠适应性喂养3 d后,随机分为空白对照组、阳性对照组（联苯双酯滴丸,150 mg/kg·bw）、模型组、RPBA各剂量组（100、200、400 mg/kg·bw）,连续灌胃30 d,第31 d禁食不禁水12 h,除空白组外的其余各组灌胃50%乙醇溶液（12 m L/kg·bw）,建立动物急性肝损伤模型。结果:小鼠酒精灌胃后,模型组谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、甘油三酯（TG）水平及丙二醛（MDA）含量与空白对照组相比显著（p<0.05）升高,超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力、还原型谷胱甘肽（GSH）含量显著（p<0.05）低于空白对照组,RPBA各剂量组ALT、AST、TG水平及MDA含量与模型组相比明显降低,而以上各抗氧化酶活性明显提高。结论:RPBA能明显降低小鼠血清中AST、ALT及TG水平,提高血清中抗氧化酶活性,减少脂质过氧化,对小鼠酒精性肝损伤具有明显的保护作用。      

纳豆激酶活性的检测及纳豆粉筛选

对纳豆激酶活性的检测方法进行了总结,结合生产及操作人员的实际情况总结出适合企业操作及评估的检测方法,并利用该方法对6种纳豆粉原料进行筛选,选择溶栓功能稳定、纳豆粉溶解性良好并经过脱臭处理的原料用于产品的生产。     

金属离子对纳豆激酶的化学修饰研究

纳豆激酶(Nattokinase,简称NK)是一种新型食源性纤溶酶,具有很强的溶血栓作用。本项研究采用金属离子对纳豆激酶进行置换修饰研究,找出最佳金属离子的种类和浓度,提高酶活性,以更大的发挥其药理学功能。实验结果表明,修饰后纳豆激酶的酶活性及稳定性有明显的提高,6mmol/L的Mg2+对酶有明显的激活作用,比天然酶提高了45%的活性。Ca2+、Mn2+、Ni2+则表现出不同程度的抑制作用。因此,可通过加入Mg2+来改善提高纳豆激酶的活性。     

野生猕猴桃与维生素C对大鼠酒精性肝脑损伤的预防性保护作用

本文研究野生猕猴桃与维生素C对大鼠酒精肝脑损伤的预防性保护作用。将40只雄性SD大鼠随机分为4组:正常组、模型组、维生素C组及野生猕猴桃组。正常组给予等量生理盐水,其余组灌胃56°红星二锅头建立酒精肝脑损伤模型(第一周剂量为8 m L/kg,第二周为10 m L/kg),每天1次,同时正常组、模型组给予普通饲料,维生素C组给予维生素C强化饲料(按420 mg/kg添加维生素C),野生猕猴桃组给予按30%比例添加野生猕猴桃的饲料。2周后检测大鼠肝功能、肝脂质含量和氧化应激水平,HE染色观察肝和脑病理变化。结果表明,与模型组比较,野生猕猴桃与维生素C可显著降低酒精肝脑损伤大鼠的血清ALT、AST、TG、TC、LPO,血清及脑MDA,升高血清及脑SOD(p0.01),野生猕猴桃降低或升高指标更显著(p0.05)。因此,野生猕猴桃和维生素C对酒精肝脑损伤均具有预防性保护作用,前者效果更好。     

自制淡豆豉对SD大鼠急性酒精性肝损伤的保护作用

探究淡豆豉对急性酒精性肝损伤大鼠的肝保护作用;用低、高剂量[ 5 g/(kg·bw)、10 g/(kg·bw) ]的淡豆豉对大鼠进行为期一周的预处理,再用12 mg/(kg·bw) 52°红星二锅头一次性灌胃造成大鼠急性酒精性肝损伤,分别测定大鼠血清谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）等指标和肝脏中乙醇脱氢酶（ADH）、细胞色素P4502E1（CYP2E1）、超氧化物歧化酶（SOD）等指标,并采用H&E染色观察肝组织形态。结果表明,不同剂量的淡豆豉能够抑制血清中AST、ALT、和ALP水平的升高,抑制率最高为47.18%;不同剂量淡豆豉和阳性对照均能显著降低炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的水平,其中高剂量淡豆豉对IL-1β水平的抑制率达到了72.03%;高剂量淡豆豉预处理使肝组织中CAT的酶活升高到312.80 U/mg prot,SOD和GSH-Px的水平也显著高于模型组（p<0.01）;肝组织切片结果表明淡豆豉能改善大鼠肝细胞损伤程度。因此,自制淡豆豉对ALD具有保护作用,主要是通过降低炎症反应和提高抗氧化能力实现的。     

骆驼乳对小鼠酒精性肝损伤的保护作用

目的:研究骆驼乳对Lieber-DeCarli液体饲料诱导的小鼠酒精性肝损伤的保护作用.方法:将40只雄性C57BL/6NCr小鼠随机分为对照组(Con)、模型组(Et)、骆驼乳高剂量组(EtCM_H,3 g/kg)、骆驼乳低剂量组(EtCM_L,1.5 g/kg)和阳性对照组(美他多辛,300 mg/kg).试验8周...     

猪血蛋白酶解物对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用

目的：研究猪血蛋白酶解物对酒精所致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法：小鼠被随机分为空白对照组、 模型对照组、药物对照组（还原性谷胱甘肽,每日以20 mg/kg mb灌胃）、猪血蛋白酶解物各剂量组（每日分别以 0.83、1.70、3.33 g/kg mb灌胃）,连续灌胃30 d,空白对照组和模型对照组给予等体积蒸馏水。第31天,给予体积 分数50%乙醇溶液（12 mL/kg mb）建立动物急性肝损伤模型。在灌胃16 h后各组小鼠取血测定谷草转氨酶和谷丙转 氨酶活力;处死小鼠后取肝脏测定各项抗氧化指标,并采用组织切片分析小鼠肝损伤程度。结果：与模型对照组 相比,猪血蛋白酶解物各剂量组均能降低血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶活力及肝脏丙二醛、肿瘤坏死因子-α、白细 胞介素-6水平,提高肝脏超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活力及谷胱甘肽水平,使肝脏脂肪变性程度明显减 轻。结论：猪血蛋白酶解物对小鼠酒精性肝损伤具有明显保护作用,其机制可能与其抗炎、抗氧化作用有关。     

食源复方解酒口服液对小鼠酒精性肝损伤的保护作用

目的:探讨食源复方解酒口服液对醉酒小鼠的解酒及对酒精性肝损伤小鼠的保肝作用.方法:将小鼠随机分成六组,正常组,模型组,阳性对照组(海王金樽1.30 mL/10 g),低剂量组、中剂量组、高剂量组(0.65、1.30、2.60 mL/10 g).解酒作用实验:采用口服液对高、中、低剂量组进行灌胃干预,阳性对照组给予海王金...     

益生菌联合白藜芦醇对小鼠慢性酒精性肝损伤的改善作用及机制研究

利用C57BL/6J小鼠构建慢性酒精性肝损伤模型,探究益生菌联合白藜芦醇对慢性酒精性肝损伤的保护作用及可能机制。小鼠被随机分为空白对照组（Con组)和酒精模型组(Mod组）,三组益生菌分别联合白藜芦醇（Resveratrol,Res）干预组（Lactobacillus paracasei J5+Res（J5+Res）、Lactobacillus casei YRL577+Res（YRL577+Res）、Bifidobacterium animalis F1-7+Res（F1-7+Res））和阳性药物硫普罗宁组（LP组）。实验结束后,通过分析小鼠肝脏脂质含量、酒精代谢酶活性、氧化应激水平等指标,对益生菌联合白藜芦醇的作用效果进行评价。为了进一步探究联合作用机制,对肝脏中氧化应激相关基因CYP2E1、核因子 E2 相关因子 2（Nuclear factor erythroid-2-related factor 2, Nrf2）、血红素加氧酶1（Heme oxygenase-1,HO-1）的mRNA表达进行分析。结果表明,相较于Mod组,益生菌联合白藜芦醇能够显著降低小鼠肝脏中甘油三脂、总胆固醇含量、血清谷草转氨酶和谷丙转氨酶活力（P<0.05）,提高肝脏乙醇脱氢酶、乙醛脱氢酶活性并抑制肝脏CYP2E1活性及其mRNA表达,显著提高肝脏还原型谷胱甘肽含量和超氧化物歧化酶、过氧化氢酶活性（P<0.05）,并能有效激活Nrf2/HO-1通路,其中,Nrf2 mRNA表达量在J5+Res、YRL577+Res、F1-7+Res三组益生菌联合干预组中分别被上调了2.6、3.7和2.7倍,HO-1 mRNA表达量被上调了2.0、6.2和4.0倍。因此,益生菌联合白藜芦醇可能通过激活Nrf2/HO-1途径预防慢性酒精性肝损伤。     

芦荟多糖联合低聚果糖缓解小鼠酒精性肝损伤

本文研究了芦荟多糖联合低聚果糖对慢性酒精所致小鼠肝损伤的保护作用。采用芦荟多糖联合低聚果糖灌胃,以保护慢性酒精性肝损伤小鼠,实验结束后测定小鼠肝脏指数;血清生化指标,如谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG);肝脏生化指标,如还原型谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、肿瘤坏死因子(TNF-α)和白介素-6(IL-6),同时观察组织病理学变化,以综合评价芦荟多糖联合低聚果糖对小鼠的肝保护作用。结果表明,高剂量组芦荟多糖联合低聚果糖能显著地降低酒精诱导的ALT、AST、TC、TG的水平至(23.37±0.80) U/L、(106.50±4.58) U/L、(2.85±0.10) mmol/L、(1.38±0.12) mmol/L;降低炎症因子IL-6和TNF-α水平至(28.24±0.45)和(155.90±9.67) pg/(mg pro)和提升丙二醇MDA含量至(1.25±0.13)pmol/(mgpro)(p0.05),并且提高肝内抗氧化酶GSH、SOD、GSH-Px活性至(93.65±4.93)、(61.24±3.13)和(82.75±7.04)U/(mgpro)(p0.05),高剂量组的肝保护效果较阳性药物水飞蓟更明显,其主要保护机制为抗氧化。因此,本研究为缓解酒精性肝损伤的芦荟多糖联合低聚果糖复方产品提供了一定的理论支撑。     

桑叶生物碱对小鼠酒精性肝损伤的保护作用

探讨桑叶生物碱（mulberry leaf alkaloids,MLA）对酒精性肝损伤小鼠的改善作用。建立酒精性肝损伤小鼠模型,以MLA（40、80、160 mg/kg?day）干预4周,计算肝脏指数,检测血清甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）和肝脏中过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、总超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素6（IL-6）的含量。与模型组相比,MLA中剂量组小鼠的肝脏指数、血清TG、TC、ALT、AST和肝脏MDA、IL-1β、IL-6、TNF-α水平分别降低11.18%、22.78%、19.19%、28.08%、16.16%、25.07%、23.51%、18.61%、11.78%,肝脏SOD、CAT、GSH-Px活力分别提高27.47%、15.36%、27.83%;MLA高剂量组小鼠的肝脏指数、血清TG、TC、ALT、AST和肝脏MDA、IL-1β、IL-6、TNF-α水平分别降低15.17%、32.65%、23.16%、30.58%、16.41%、31.97%、27.19%、25.41%、29.59%,肝脏SOD、CAT、GSH-Px活力分别提高38.38%、19.09%、31.09%;MLA中、高剂量组肝脏组织结构损伤明显改善。MLA可以改善小鼠酒精性肝损伤,其作用机制可能与改善肝脏氧化应激和抑制炎症反应有关。     

嗜热链球菌grx02对酒精性肝损伤大鼠保护作用的分子机制

研究了嗜热链球菌grx02对急性酒精性肝损伤大鼠模型的保护作用机制。建立了急性酒精性肝损伤大鼠模型,观察嗜热链球菌grx02对急性酒精性肝损伤大鼠血清转氨酶以及炎症细胞因子的改善作用。结果表明,酒精可诱导大鼠血清谷氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙二醛(MDA)水平显著升高,;血清、肝匀浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-8(IL-8)细胞因子水平显著升高;乙醇脱氢酶(ADH)、还原性谷胱甘肽(GSH)、增加谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性显著下降,与对照组比较均有显著性差异。结论:grx02可能通过抑制炎性因子,增强抗氧化酶系活性、抑制氧化应激引发的肝损伤,对大鼠急性酒精性肝损伤发挥保护作用。     

芦荟多糖联合茶多酚对小鼠酒精性肝损伤的预防作用

目的:研究芦荟多糖(AG)联合茶多酚(TP)对酒精性肝损伤的预防作用。方法:以芦荟凝胶粉为原料,提取芦荟多糖;以C57BL/6小鼠为动物模型,4周42% vol酒精加1次50% vol酒精灌胃,造成酒精性肝损伤,检测小鼠肝脏指数、血清生化指标、肝脏生化指标和病理变化,比较AG、TP和AG&TP对酒精性肝损伤的预防作用。结果:模型组与空白组相比,肝脏指数、血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性极显著升高;还原型谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性极显著性降低(P<0.01),而丙二醛(MDA)极显著增加(P<0.01);肿瘤坏死因子(TNF-α)以及白介素-6(IL-6)水平也极显著增高(P<0.01),HE染色结果显示肝细胞明显的炎性浸润和空泡变性。AG&TP组与AG和TP组相比,AG&TP可以更加显著(P<0.05)地改善酒精引起的氧化损伤、炎症反应和肝形态学变化。结论:芦荟多糖联合茶多酚能够有效缓解酒精性肝损伤,且效果优于单一成分。