利用蛹虫草菌培养基生产保健酱油的研究

实验以蛹虫草菌培养基、豆粕、麸皮为主要原料生产酱油,在对制曲、制醅、发酵淋油等工艺研究的基础上,通过大量实验确定了食用菌保健酱油制作的最佳工艺,生产出了一种富含蛹虫草菌保健成分并有浓厚蛹虫草菌香味的保健酱油。实验得出最佳配料比为:豆粕50g,麸皮20g,面粉10g,水80mL,蛹虫草菌培养基30g。     

蛹虫草培养基的酶水解研究

以蛹虫草培养基为原料,采用酶法水解原料中的碳水化合物和蛋白质,制备保健食品的基料。实验中先用2%的淀粉酶、2%的糖化酶水解蛹虫草培养基溶液中碳水化合物,再通过对木瓜蛋白酶、中性蛋白酶和菠萝蛋白酶的优选实验,优选出最佳水解酶为木瓜蛋白酶,并进行正交实验确定了木瓜蛋白酶的最佳水解条件为:温度55℃、固液比为1:12、加酶量为2%及水解时间为6h,此时酶解液中游离氨基态氮含量最高,达0.844%,固形物总量为10%。      

杂粮蛹虫草菌丝共生体中虫草素的优化提取及测定

目的:探讨杂粮蛹虫草菌丝共生体中虫草素的最优提取条件,并比较了不同光照时长对虫草素含量的影响,为其工艺条件的优化和综合利用提供依据。方法:采用单因素结合响应曲面法优化虫草素的水浴提取条件,高效液相色谱法测定虫草素含量。结果:最优水浴提取条件为:浸提时间6.59 h、浸提温度81.9℃、料液比1∶90,此条件下虫草素含量为6.0143 mg/g;不同光照时长条件下虫草素含量为3.8988~11.9629 mg/g,不同光照时长间差异具有统计学意义(p=0.000)。结论:实验确定了虫草素水浴提取的最优条件,并得出不同光照时长对虫草素含量有显著影响,为进一步优化杂粮蛹虫草菌丝共生体的培养条件提供参考依据。     

蛹虫草培养基的酶水解研究

以蛹虫草培养基为原料,采用酶法水解原料中的碳水化合物和蛋白质,制备保健食品的基料。实验中先用2%的淀粉酶、2%的糖化酶水解蛹虫草培养基溶液中碳水化合物,再通过对木瓜蛋白酶、中性蛋白酶和菠萝蛋白酶的优选实验,优选出最佳水解酶为木瓜蛋白酶,并进行正交实验确定了木瓜蛋白酶的最佳水解条件为:温度55℃、固液比为1:12、加酶量为2%及水解时间为6h,此时酶解液中游离氨基态氮含量最高,达0.844%,固形物总量为10%。     

杂粮蛹虫草菌丝共生体中虫草素的优化提取及测定

目的:探讨杂粮蛹虫草菌丝共生体中虫草素的最优提取条件,并比较了不同光照时长对虫草素含量的影响,为其工艺条件的优化和综合利用提供依据。方法:采用单因素结合响应曲面法优化虫草素的水浴提取条件,高效液相色谱法测定虫草素含量。结果:最优水浴提取条件为:浸提时间6.59 h、浸提温度81.9℃、料液比1∶90,此条件下虫草素含量为6.0143 mg/g;不同光照时长条件下虫草素含量为3.8988~11.9629 mg/g,不同光照时长间差异具有统计学意义(p=0.000)。结论:实验确定了虫草素水浴提取的最优条件,并得出不同光照时长对虫草素含量有显著影响,为进一步优化杂粮蛹虫草菌丝共生体的培养条件提供参考依据。      

蛹虫草菌的液态培养基优化

采用响应面法优化蛹虫草菌的液态培养基,以获得最大菌体量为响应值,采用Plackett-Burman试验筛选出主要影响因素为葡萄糖、蛋白胨、七水硫酸镁。再利用最陡爬坡试验确定响应区域的中心点。最后利用中心复合试验确定最优的培养基配方为葡萄糖53.363 6g/L,蛋白胨26.720g/L,七水硫酸镁2.195 2g/L,磷酸二氢钾0.5g/L。蛹虫草菌的最终菌体总干重为3.91g/L,比优化前增加了2.48倍。     

不同固态培养基对蛹虫草子实体品质的影响

通过测定不同固态培养基培养蛹虫草子实体的生长情况,虫草素、虫草酸、虫草多糖含量,1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基清除率及2,2'-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸（ABTS）自由基清除能力,研究不固态培养基对蛹虫草子实体品质的影响。结果表明,不同固体培养基培养蛹虫草子实体的活性物质与抗氧化活性差异显著（P＜0.05）,其中小米+麦麸培养基培养蛹虫草子实体的生长情况较佳,出芽时间最快,为12 d,子实体最长,为（6.50±0.15） cm,鲜质量最重,为（8.58±0.07） g,其虫草素和虫草酸含量最高,分别为（6.53±0.06） mg/g和（7.66±0.21） mg/g;薏仁米培养基培养蛹虫草子实体虫草多糖含量最高,为（59.07±1.89） mg/g,薏仁米＋麦麸培养基抗氧化活性最强,DPPH自由基清除率和ABTS自由基清除率分别为（66.84±0.77）%、（68.28±0.26）%。     

利用蛹虫草培养基酿制功能型酱油

本实验研究了在酱油酿制过程中,添加一定比例的人工蛹虫草培养基残基后对所酿制的酱油品质的影响,结果表明,添加5％-10％的培养基残基所酿制的酱油在感官指标和理化指标上明显优于普通酱油。     

蛹虫草培养基多糖的超声波提取及抗氧化性研究

研究用超声波提取蛹虫草培养基中粗多糖的工艺条件,并比较了该多糖与蛹虫草子实体多糖的抗氧化性。结果表明:在料液比1∶30(质量比),乙醇用量15 mL,超声波功率70 W,超声时间90 min的条件下,蛹虫草培养基中多糖含量为3.30%。在0.2 mg/mL～1.0 mg/mL浓度范围内蛹虫草培养基多糖与子实体多糖抗氧化能力相似,且具有一定的量效关系。红外显示两种多糖结构相同。     

蛹虫草固体发酵培养基多糖的分离纯化及组成分析

为研究蛹虫草固体发酵培养基中多糖的分离纯化及组成,本实验利用水提醇沉法与Sevage法相结合,得到蛹虫草固体发酵培养基粗多糖（CMSMP）。经DEAE-cellulose52柱层析分离得到纯化蛹虫草固体发酵培养基多糖组分（CMSMP1）后,采用紫外光谱、醋酸纤维素薄膜电泳和SephadexG-150凝胶柱层析鉴定其纯度,高效液相色谱及红外光谱分析其组成、结构。结果表明,CMMSP1为均一多糖,且由木糖、阿拉伯糖和葡萄糖三种单糖组成。同时红外光谱显示,CMSMP1具有典型多糖吸收峰。      

蛹虫草培养基多糖的提取及抗肿瘤活性研究

为综合利用蛹虫草小麦培养基,研究培养基多糖的提取和开发。在热回流水提法和超声波水提法单因素试验的基础上,采用热回流水提法正交试验筛选蛹虫草小麦培养基粗多糖最佳的提取工艺;用 MTT法检测了不同处理提纯多糖的抗肿瘤活性。结果表明热回流水提法提取培养基粗多糖效果优于超声波水提法;提取温度100 ℃、料液比1 g∶25 mL、提取3次、每次提取时间90 min,为最佳培养基粗多糖提取工艺;影响粗多糖提取效率的4个因素的主次关系是：提取温度>提取时间>提取次数>料液比;粗多糖的得率随着醇沉浓度的提高而提高。MTT试验发现质量浓度为5 mg/mL、培养时间72 h,培养基脱脂脱蛋白多糖A对HepG2肝癌细胞抑制率可达到83.02%,培养基脱脂多糖B的抑制率可达到75.39%,培养基未脱脂脱蛋白粗多糖C抑制率为30.61%,提纯多糖表现出较高的抑制率;100 ℃热回流水提蛹虫草子实体脱脂脱蛋白多糖F,质量浓度为5 mg/mL、培养72 h后,对Hepg2细胞抑制率平均值达到92.974%,与对照顺铂（SB）无显著差异,与多糖A差异显著。     

关于蛹虫草菌多糖发酵及培养基的研究

研究了蛹虫草胞外多糖发酵过程，分析不同因素对胞外多糖得率的影响，获得了比较适宜的培养基组成和发酵条件。蛹虫草胞外多糖优化发酵培养基组成为：蔗糖12％，玉米浆2％，酵母膏2％，硝酸钾0．45％；发酵培养条件为：pH值6．5，温度20℃。此条件下蛹虫草胞外多糖得率为1．188g／100mL，菌丝体干重为1．221g／100mL。     

蛹虫草复合谷物杂粮膨化产品的工艺优化及糊化特性

目的：采用双螺杆挤压工艺制备蛹虫草复合谷物杂粮膨化产品,并研究蛹虫草对谷物杂粮膨化产品淀粉糊化特性的影响。方法：以大米粉、糯米粉、薏米粉、红豆粉、黄豆粉、蛹虫草粉为原料,按照一定比例混合制成蛹虫草复合谷物杂粮粉进行挤压膨化实验,并在单因素试验的基础上,选择物料水分含量、螺杆转速、进料速率、挤压温度为影响因素,产品径向膨化率、糊化度、水分含量、吸水性和水溶性指数为指标,设计正交试验,用极差分析法优化出蛹虫草复合谷物杂粮膨化产品的最佳工艺,并利用快速黏度仪测定谷物杂粮膨化产品和蛹虫草复合谷物杂粮膨化产品的淀粉糊化特性。结果：蛹虫草复合谷物杂粮膨化产品的最优工艺参数为物料水分含量16%、螺杆转速180 r/min、机筒的5 段挤压温度80-90-120-140-165 ℃、进料速率15 r/min,此时蛹虫草复合谷物杂粮膨化产品的径向膨化率、糊化度、水分含量、水溶性和吸水性指数分别为3.015、84.32%、6.11%、29.65%、416.39%;与谷物杂粮膨化产品相比,蛹虫草复合谷物杂粮膨化产品峰值黏度、保持黏度、最终黏度、回生值显著下降。结论：蛹虫草复合谷物杂粮膨化产品挤压工艺可行,添加蛹虫草能够显著降低谷物杂粮膨化产品的糊化特征值,并抑制其淀粉分子的回生或重排。     

蛹虫草大米培养基中多糖提取及初步纯化工艺

以蛹虫草培养基为材料,确定硝酸钙提取法去除其中淀粉的最佳条件,进而采用正交试验法提取多糖,Sevag法除蛋白,为培养基中多糖的提取及初步纯化提供依据。将80%Ca（NO3）2按料液比1∶20（g∶mL）在100℃条件下水浴提取3次,淀粉的去除率达42.57%。多糖提取的最优条件为料液比1∶30（g∶mL）,在100℃浸提3 h,提取2次,提取率为3.31%。多糖溶液与Sevag试剂按1∶3比例提取1次,脱蛋白率可达94.2%,而多糖损失率仅为20.95%,效果较好。     

培养基中添加植物生长调节剂的蛹虫草转录组学分析

为探究培养基中添加植物生长调节剂(GN-01)对蛹虫草基因表达变化的影响,采用高通量测序技术对培养基中添加GN-01栽培的蛹虫草和对照组蛹虫草鲜品进行转录组测序分析,采用生物信息学方法对差异基因进行功能注释和通路分析。结果表明:培养基中添加GN-01后,蛹虫草子实体中显著差异基因有189个,共富集到29条代谢通路;差异基因主要参与次生代谢产物的生物合成、精氨酸和脯氨酸的代谢、植物过氧化物酶体路径。试验证实GN-01能够激活与抗病能力有关代谢通路,在提高蛹虫草抗病效应中发挥重要作用。     

蛹虫草及其培养基中主要核苷类成分的分析比较

采用高效液相色谱法测定虫草中的核苷类成分,优化后的色谱条件为YMC-Polyamine 柱(250mm × 4.6mm,5μm);采用梯度洗脱,流动相：乙腈- 水(V/V)：0～15min 为90:10,15～20min 为86.5:13.5,20～30min 为75:25,30～35min 为70:30;流速：1mL/min;柱温：30℃;检测波长：259nm;进样量：10μL。结果表明：胸腺嘧啶、虫草素、尿嘧啶、腺苷、腺嘌呤、尿苷、鸟嘌呤、次黄嘌呤均能得到较好分离,该方法稳定性好、精密度高、重现性好,适用于虫草中的核苷类成分的分析。经分析发现,蛹虫草子实体核苷类物质组成大致相似,但含量差异非常显著,同时发现蛹虫草培养基残基及固体发酵产物中虫草素含量较高,其他核苷类成分很少,因此认定蛹虫草培养基残基及固体发酵产物是非常优良的分离纯化虫草素的原料。     

响应面法优化蛹虫草菌丝液体发酵产虫草素培养基

探究利用响应面法优化蛹虫草液体发酵产虫草素的条件,以提高虫草素积累量。以虫草素积累量为指标,同时测定对应的菌丝体产率,利用Plackett-Burman实验筛选影响虫草素积累量的关键因素,再以最陡爬坡实验逼近最大虫草素积累量响应区域,最后应用Box-Behnken方法优化培养基;对虫草素积累量和对应的菌丝体产率数据进行相关性分析。结果表明:在25℃,无光照,160 r/min,p H自然,5 m L/100 m L接种量,优化培养基为:KNO_30.04 g/100 m L,酵母浸膏1.50 g/100 m L,Fe SO_4·7H_2O 0.03 g/100 m L,KH_2PO_40.2 g/100 m L,葡萄糖3.82 g/100 m L,Zn SO_4·7H_2O 0.06 g/100 m L,Mg SO_4·7H_2O 0.13 g/100 m L,维生素B_10.08 g/100 m,虫草素积累量达到852.621μg/m L;在同等条件下,利用优化培养基发酵8 d+静置10 d后,虫草素积累量达到936.225μg/m L。在本实验多组分的条件下,菌丝体产率小于0.857 g/100m L时,虫草素生成的效率较高,而菌丝体产率大于1.703 g/100 m L时,虫草素积累量开始下降;发酵第8 d虫草素积累量和菌丝体产率存在极显著相关关系。     

响应面法优化蛹虫草菌丝液体发酵产虫草素培养基

探究利用响应面法优化蛹虫草液体发酵产虫草素的条件,以提高虫草素积累量。以虫草素积累量为指标,同时测定对应的菌丝体产率,利用Plackett-Burman实验筛选影响虫草素积累量的关键因素,再以最陡爬坡实验逼近最大虫草素积累量响应区域,最后应用Box-Behnken方法优化培养基;对虫草素积累量和对应的菌丝体产率数据进行相关性分析。结果表明:在25℃,无光照,160 r/min,p H自然,5 m L/100 m L接种量,优化培养基为:KNO₃0.04 g/100 m L,酵母浸膏1.50 g/100 m L,Fe SO₄·7H₂O 0.03 g/100 m L,KH₂PO₄0.2 g/100 m L,葡萄糖3.82 g/100 m L,Zn SO₄·7H₂O 0.06 g/100 m L,Mg SO₄·7H₂O 0.13 g/100 m L,维生素B₁0.08 g/100 m,虫草素积累量达到852.621μg/m L;在同等条件下,利用优化培养基发酵8 d+静置10 d后,虫草素积累量达到936.225μg/m L。在本实验多组分的条件下,菌丝体产率小于0.857 g/100m L时,虫草素生成的效率较高,而菌丝体产率大于1.703 g/100 m L时,虫草素积累量开始下降;发酵第8 d虫草素积累量和菌丝体产率存在极显著相关关系。      

利用人工蛹虫草培养基酿制功能型酱油的研究

本实验研究了在酱油酿制过程中,添加一定比例的人工蛹虫培养基残基后对所酿制的酱油品质的影响,结果表明,添加5%～10%的培养基残基所酿制的酱油在感官指标和理化指标上明显优于普通酱油。     

冬虫夏草与蛹虫草融合子菌丝体液体培养基筛选

以冬虫夏草与蛹虫草融合子菌丝体生物量为主要指标,采用正交设计方法对其菌丝体液体培养基进行筛选,比较3种培养方法对菌丝体的影响.结果表明其最适培养基配方为葡萄糖5.00g/L,蔗糖5.00g/L,酵母粉0.25g/L、黄豆粉5.00g/L(浸提液),KH2PO41.50g/L,MgSO4·7H2O 0.50g/L,VB1 4g/L,pH自然.25℃培养,周期156h,其菌丝体干重生物量可达3.51g/L.持续摇动培养法获得菌丝体生物量最多,利于菌体的规模发酵生产;动静相间法次之;静止法获得量较少.动静相间法所培养的菌丝体更有利于原生质体的制备和诱变育种.