微生物添加剂中枯草芽孢杆菌的测量不确定度评估体系建立

目的:研究旨在实验室环境条件下建立微生物饲料添加剂中枯草芽孢杆菌活性成分检测方法的评价体系并使用该方法进行测定。方法:本实验依据现行通用标准GB/T 26428—2010、JJF1059.1—2012和RB/T151—2016,进行了微生物饲料添加剂中枯草芽孢杆菌中活性成分的菌落总数不确定度考察。结果:创建了微生物饲料添加剂中枯草芽孢杆菌活性成分的菌落总数不确定度研究方法,扩展不确定度U=4.59%(包含因子k=2),样品的范围在6.2×10⁹～8.5×10⁹cfu/g之间,符合误差允许范围。结论:建立了一种微生物饲料添加剂中枯草芽孢杆菌活性成分的菌落总数不确定度检测方法,通过不确定分量分析可以发现,实验室在进行枯草芽孢杆菌活菌计数试验过程中,主要影响因素顺序为:稀释>溶解>重复性>称量>移取。该方法适合于实验室内操作,可在不同实验室内进行推广应用。     

羽绒羽毛微生物检测嗜温性需氧菌计数检验中不确定度的评定

微生物不确定的评定主要是针对定量测试,本文法按照纺织行业方法标准<水洗羽毛羽绒试验方法>FZ/T 80001-2002中嗜温性需氧菌计数检测方法对本实验室样品进行嗜温性需氧菌计数检测后,采用不确定度评定中的A类评定方进行了该检测方法的不确定度评定.     

不确定度评定在婴儿配方奶粉中双歧杆菌计数中的研究

目的评定婴儿配方奶粉中双歧杆菌计数的不确定度,减少检测结果误差。方法按照GB 4789.35-2010中双歧杆菌计数的方法检测婴儿配方奶粉中双歧杆菌含量,依据JJF 1059.1-2012和CNAS-CL07-2011的要求,计算检验结果的不确定度。结果本实验采用测量不确定度评定的A类评定,标准不确定度为0.011 99,扩展不确定度为0.023 98(P=95%,k=2)。此方法适合于双歧杆菌计数检验结果的评定。结论婴儿配方奶粉中双歧杆菌计数检测的不确定度的分析能有效掌握检测结果的可信程度和准确性。     

月饼中菌落总数测定结果不确定度的评估

本文旨在建立月饼中菌落总数检测结果的不确定度的评定方法。方法:依据GB4789.2-2016《食品安全国家标准食品微生物菌落总数测定》进行测定和结果判断,再根据JJF1059.1-2012《测量不确定度评定与表示的规定》以及参考其他相关文献,对本实验室菌落测定过程引入的不确定度进行分量评定。结果:依据所采用的方法,得出两份样品结果分别为(1.6~1.8)×10~3CFU/g(k=2)和(2.6~2.8)×10~3CFU/g(k=2)。结论:本文所采用的评定方法,是对月饼中菌落总数加测结果不确定度的评定方法,也可以应用于日常工作中其他产品的菌落总数不确定度评定。     

水源水中菌落总数不确定度的评定

目的评估水源水中菌落总数检测结果的不确定度。方法按照GB/T 5750.12-2006《生活饮用水标准检验方法微生物指标》测定10份水源水样品中菌落总数,依据JJF 1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》评定检测结果的不确定度。结果依据所采取的方法,在置信概率为95%时,水源水中菌落总数的扩展不确定度为0.062,10份样品测量结果均在其各自的置信区间范围内。结论本研究建立的方法同样适合类似检测条件下菌落总数不确定的评定。     

关于GB/T13662-2018《黄酒》中总糖的测定(亚铁氰化钾滴定法)不确定度评价报告

依据JJF 1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》和GB/T 27411-2012《检测实验室中常用不确定度评定方法与表示》两个不确定度相关标准,对GB/T13662-2018《黄酒》中总糖的测定(亚铁氰化钾滴定法)的测量不确定度进行评定,根据《黄酒》亚铁氰化钾滴定法测定黄酒总糖含量的分析方法,建立数学模型,找出检测过程中影响结果的不确定度分量来源并进行评定分析,最终得出不确定度评定结果。     

副溶血性弧菌定量检测的不确定度分析和评定

目的 分析和评定冷冻天然海虾中副溶血性弧菌定量检测最大可能数(most probable number, MPN)计数的不确定度。方法 依据JJF 1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》、SN/T 4091–2015《食品微生物学测量不确定度评估指南》, 分析和评定检测过程中的不确定度主要来源, 运用统计学方法计算合成不确定度和扩展不确定度。结果 在95%的置信水平下, 当检验结果为75 MPN/g 和93 MPN/g时(k=2), 扩展不确定度为0.3526取值范围分别为(49~101) MPN/g、(60~126) MPN/g。评定结果表明, 实验过程的不确定度主要由样品匀液、加样体积、不同人员重复实验引入。结论 该方法适用于对冷冻天然海虾中副溶血性弧菌最大可能数计数结果的不确定度评定, 对检测结果准确度的提高具有指导意义。     

食品中总酸的测定及不确定度评定

依据JJF 1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》和GB/T 27411-2012《检测实验室中常用不确定度评定方法与表示》两个不确定度相关标准,对采用GB/T 12456-2008《食品中总酸的测定》测定饮料中总酸的测定方法进行不确定度评定,建立数学模型,找出检测过程中影响结果的不确定度分量来源并进行评定分析,最终得出不确定度评定结果。     

三重四级杆串联质谱法测定糯米(黄酒原料)中多菌灵残留量的不确定度分析

建立了评定GB/T 20770—2008《粮谷中486种农药及相关化学品残留量的测定——液相质谱联用法》中影响测量多菌灵不确定度多因素数学模型,考察了样品前处理及质谱测定的各个环节,根据建立的模型计算评定测量不确定度的各分量。采用该方法测得糯米中多菌灵的残留量为26.8×10-3±0.78×10-3mg/kg。分析表明,多菌灵残留量测定的不确定度主要来源于标准溶液的配制、样品前处理制备过程和样品溶液的平行测定差异。经计算,在置信概率P=95%时,运用该方法测定试样中多菌灵残留的相对标准合成不确定度为1.46%,标准不确定度为0.39×10-3mg/kg,扩展不确定度(K=2)为0.78×10-3mg/kg。     

能力验证乳粉中乳酸菌计数不确定度的评定

目的对能力验证乳粉样品中乳酸菌计数进行不确定度评定。方法依据能力验证作业指导书和GB4789.35-2010《食品安全国家标准食品微生物学检验乳酸菌检验》进行测定,再根据JJF 1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》对不确定度来源进行分析和评定。结果乳酸菌计数过程中,分散性对结果不确定贡献较大,因此测定结果的不确定度采用检测结果的分散性进行评定。6份样品乳酸菌计数结果扩展不确定度为分别为0.02012、0.04337、0.01992、0.03296、0.02182和0.031379(P=95%,k=2.09)。结论此方法适用于类似检测条件下乳酸菌计数不确定度的评定。     

鼠李糖乳杆菌及枯草芽孢杆菌发酵对饲料品质的影响

该研究通过测定发酵饲料pH值、活菌数、乳酸含量及中性蛋白酶活性,筛选出适宜基础饲料发酵的鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus）BLCC2-0038和枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）BLCC1-0281,并对筛选出的鼠李糖乳杆菌和枯草芽孢杆菌进行单菌及混菌发酵方式进行了研究。结果表明,BLCC2-0038单独发酵72 h时pH值降至3.73,活菌数达到7.05×109 CFU/g,乳酸含量为48.67 mg/g;BLCC1-0281单独发酵72 h时,活菌数达到2.28×1010 CFU/g,中性蛋白酶活性达到3 207 U/g;BLCC2-0038和BLCC1-0281混菌发酵时,以鼠李糖乳杆菌/枯草芽孢杆菌配比为3∶1,2%接种量,有氧发酵方式最优,发酵72 h时鼠李糖乳杆菌活菌数为5.35×109 CFU/g,枯草芽孢杆菌活菌数为7.80×109 CFU/g,中性蛋白酶活性为1 407.83 U/g。     

两株芽孢杆菌混菌发酵产芽孢条件的优化

为了探索地衣芽孢杆菌（Baclicus lincheniformis）DY-1和胶冻样芽孢杆菌（Bacillus mucilaginosus）XK混菌发酵产芽孢的最佳条件,该研究采用单因素试验和正交试验进行了优化;利用Eppendorf 7.5 L发酵罐在最佳条件下进行了混菌发酵产芽孢试验。结果表明,混菌发酵产芽孢的最佳发酵条件为：胶冻样芽孢杆菌XK和地衣芽孢杆菌DY-1种子液的接种比例为4∶1（V/V）,培养温度37 ℃,培养时间60 h,pH 8.0。在此条件下,进行Eppendorf 7.5 L发酵罐混菌发酵试验,其芽孢数可高达1.1×1011 CFU/mL,高于摇瓶发酵所产芽孢数（2.0×1010 CFU/mL）。     

High-throughput detection of spore contamination in food packages and food powders using tiered approach of ATP bioluminescence and real-time PCR

A rapid and quantitative method for detection of Bacillus spores in food/non-alcoholic beverage packages and food powders has been developed using filtration-based ATP bioluminescence and real-time PCR, targeting the sporulation gene (spo0A). In combination with heat activation, the presence and amount of viable bacterial spores (i.e., Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus licheniformis, and Bacillus thuringiensis) was determined within 20 min through ATP signal amplifications. The detection limits of heat activation-ATP bioluminescence assay for B. amyloliquefaciens and B. licheniformis spores on food packages were 1.4 × 10² and 1.0 × 10³ CFU/cm², respectively. In contaminated food powders, B. thuringiensis spores could be detected by the ATP assay within the range of 7.9 × 10⁰ to 3.2 × 10⁴ CFU/mg powder while the PCR detection limit was 614 CFU/mg. Linear relationships between luminescent signal (RLU/mg) and plate count (CFU/mg) were found. The same sample after heat activation-ATP assay could be directly used for real-time PCR as a streamlined detection to confirm the identity of Bacillus spores in food packages and food powders even though some bacterial DNA loss was observed. This tiered approach, filtration-based one-tube ATP luminescence method as a rapid, viable screening and using real-time PCR as confirmation, could serve as a high-throughput tool for the detection of Bacillus spores in the food and beverage industry.     

液相色谱-串联质谱法测定鳗鱼中甲苯咪唑含量的 不确定度评定

目的探讨液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定鳗鱼中甲苯咪唑含量的不确定度评价方法。方法根据JJF1059.1-2012《测量不确定度的评定与表示》,参考《化学分析中不确定度的评定的评估指南》及《实用测量不确定度评定》等相关理论,对测定过程中甲苯咪唑含量、样品定容体积、样品称量质量、称量样品稀释、样品重复性等引入的不确定度分量进行评定,评定鳗鱼中甲苯咪唑残留量测定的不确定度。结果测定结果合成不确定度为1.6×10-4 mg/kg,扩展不确定度为3.2×10-4 mg/kg。结论建立的不确定度评定方法适用于LC-MS/MS法测定鳗鱼中甲苯咪唑残留量的不确定度评定。     

GC-MS测定牛奶中有机磷残留的不确定度评定研究

目的 采用气相色谱法-质谱法对牛奶中有机磷农药残留的不确定度进行评估。方法 通过气质联用法对测定牛奶中有机磷农药残留量测定过程进行分析,应用数学模型计算出测定过程中的不确定度,最后计算出相对合成标准不确定度和扩展不确定度。结果 当牛奶中敌敌畏含量为0.507 mg/kg时,其扩展不确定度为7.35×10-3 mg/kg(k=2);当牛奶中甲拌磷含量为0.509 mg/kg时,其扩展不确定度为5.45×10-3 mg/kg(k=2);当牛奶中乐果含量为0.450 mg/kg时,其扩展不确定度为6.35×10-3 mg/kg (k=2);当牛奶中毒死蜱含量为0.459 mg/kg时,其扩展不确定度为6.09×10-3 mg/kg (k=2);当牛奶中对硫磷含量为0.435 mg/kg时,其扩展不确定度为6.53×10-3 mg/kg (k=2)。结论 影响测量结果不确定度的主要来源为测量重复性和方法的准确度,其他因素的影响相对较小。     

果汁中菌落总数的不确定度评定

目的建立评定菌落总数不确定度的方法,以减少实验误差并提高检测结果的精确度。方法按照GB 4789.2-2010《食品安全国家标准菌落总数测定》检测20份果汁样品中菌落总数,依据JJF 1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》分析菌落总数的不确定度来源;采用合并样本标准差计算,评定检测结果的不确定度。结果在包含概率为95%时,果汁中菌落总数的扩展不确定度为0.10(以对数计),此结果适用于同类样品的检测。结论用合并样本标准差评定多个同类样本菌落总数的不确定度较为方便,随着检验数量的不断增加,数据可随时加入到合并样本中,从而对菌落总数的不确定度进行合理判定,从而对食品进行正确的卫生学评价。     

芽孢杆菌的产酶特性及其对抗生素的耐受性

以4株枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）和2株地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）为研究对象,通过测定其成胞率、中性蛋白酶活性及对24种抗生素的耐受性,从中筛选优良芽孢杆菌。结果表明,从6株芽孢杆菌中筛选得到3株成胞率和产中性蛋白酶均较好的芽孢杆菌,分别为枯草芽孢杆菌BLCC1-0552、BLCC1-0615和地衣芽孢杆菌BLCC1-0441,液体发酵24 h后,成胞率较高,均达到98%;中性蛋白酶活性分别为90.58 U/mL、100.32 U/mL和24.72 U/mL。其中,枯草芽孢杆菌BLCC1-0615固体发酵玉米-豆粕型常规饲料产中性蛋白酶活力最高,发酵48 h时达到2 154.49 U/g。3株芽孢杆菌对抗生素的耐受性不一致,其中枯草芽孢杆菌BLCC1-0615对24种抗生素中的17种表现敏感,敏感率最高为70.83%。因此,确定优良菌株为枯草芽孢杆菌BLCC1-0615,其成胞率、产中性蛋白酶能力好及对抗生素耐受性较低,具有作为饲料添加剂应用于畜禽饲料中的潜力。     

控制图法评定食品中菌落总数检测的不确定度

目的运用控制图法对食品中菌落总数项目进行不确定度评定。方法依据GB 4789.2-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》检测方法,在保证精密度的条件下进行菌落总数的测定,基于控制图法对积累的数据进行统计和分析。结果通过建立测量值X与EWMA的叠加图及MR图,表明测量结果仅受随机效应的影响,结果符合正态性和独立性假设,计算得到扩展不确定度结果 U=0.10 lgCFU/mL。结论控制图法评定菌落总数不确定度将不确定度评估与实验室内部质量控制工作相结合,简便且易于操作,适合实验室内应用。     

一株芽孢杆菌的分离鉴定及其在发酵酱渣研究中的应用

从酱渣中筛选分离出一株芽孢菌株,通过生理生化实验以及16SrDNA鉴定其为地衣芽孢杆菌,将该菌种应用于发酵酱渣研究,表明用液态发酵方式较好,当酱渣与玉米淀粉比例为1∶1时,获得的活菌数较多。对添加辅料元素进行正交实验优化结果表明,当培养基中MgSO₄为3g/L,MnSO₄为2g/L,CaCO₃为3g/L时,培养基中的活菌数最多,为6.55×10⁹cfu/mL。     

北京地区饲料添加剂中蜡样芽胞杆菌的检测及分析

目的分析北京地区饲用酶制剂、微生态制剂和混合型饲料添加剂产品中蜡样芽胞杆菌污染情况。方法本实验方法在GB/T26427-2010《饲料中蜡样芽胞杆菌的检测》基础上进行优化,利用VITEKII Compact 15全自动生化鉴定及药敏分析系统,对生产环节的94批次样品,进行计数检测和生化鉴定分析。结果对94批次样品进行检测分析,46批次检出蜡样芽胞杆菌,检出率为48.94%。其中30批次样品含量102CFU/g,占总样品数31.91%;4.26%的样品中蜡样芽胞杆菌含量103CFU/g,分别为饲料添加剂植酸酶2批次,混合型饲料添加剂复合酶制剂2批次。结论北京地区饲用酶制剂、微生态制剂和混合型饲料添加剂产品,存在不同程度上被蜡样芽胞杆菌污染的情况。其中酶制剂类产品的污染状况最为严重,酶制剂和含有酶制剂成分的混合型饲料添加剂产品中蜡样芽孢杆菌检出率均高于50%。